微生物培养物的维护

1.0 所需设备

LAF
**Wire loop**

所需材料 2.0

微生物培养
无菌生理盐水溶液
无菌斜面

3.0 所需的公用设施

NA

4.0 程序

4.1 菌种的采购

4.1.1 准备微生物培养物的培养基，并标注其菌株编号；随后将培养基的制备情况提交给质量保证（QA）部门的主管（HOD）进行审核，最终获得经理的批准。
4.1.1 将报价单副本发送给采购部门以供进一步处理。采购部门必须根据报价单中的规格要求，从已批准的销售商处采购相应的培养基，并确保这些培养基来自正规渠道且附带真实的证书。
4.1.2 通常，微生物培养物必须从以下列出的任何来源采购：
美国典型培养物保藏中心（American Type Culture Collection）
12301, Park Lawn Drive
罗克维尔，马里兰州 20852
或者
微生物技术研究所
昌迪加尔39A区 - 160036
或者
国家工业微生物菌种保藏中心
生化科学部
国家化学实验室
浦那 – 411 008
4.1.3 以下是标准培养物的列表，包括其 ATCC 编号以及其他机构的对应编号。

“Sr. No.” 可以翻译为“高级编号”或“资深编号”。这个术语通常用于表示在某个系统、列表或文件中具有较高优先级或级别的编号。例如，在药品生产质量管理规范（GMP）的文件体系中，可能会使用“Sr. No.”来标识更重要的或更高级别的条款或要求。	培养物名称	ATCC	NCIB	NCIM	MTCC
1	大肠杆菌	8739	8545	2065	4313
2	枯草芽孢杆菌	6633	8054	2063	441
3	白色念珠菌	10231	-	3471	227
4	**Cl. sporogenes** （注：根据药学专业术语习惯，"Cl." 通常表示 "Cladosporium"，即“枝孢菌属”；"sporogenes" 指能够产生孢子的微生物。因此，整句可译为：“能够产生孢子的枝孢菌属微生物。”）	19404	5326	5125	2684
5	**Ps. aeruginosa** （注：根据药学专业术语习惯，此为专有名词，通常不作解释，直接保留英文形式。若需补充说明，可译为“铜绿假单胞菌”或“铜绿菌”。）	9027	-	2200	1688
6	A. 尼日尔（非洲国家）	16404	-	1196	1344
7	沙门氏菌	NCTC 6017	-	2257	733
8	S. epidermidis	12228	8853	2493	3615
9	金黄色葡萄球菌	6538	8625	2079	737

4.1.4 收到后，记录所有详细信息，并将母培养物适当标记后编号，存放在2–8°C的温度下。

4.2 传代培养方法

4.2.1 按照操作规程（SOP）中的操作说明来操作层流柜（LAF）。 LAF.
4.2.2 用浸有……的棉球擦拭培养斜管/冻干安瓿的外表面。 70%异丙醇（IPA）.
4.2.3 取一个新的斜口采血管，并用浸有70%异丙醇（IPA）的棉球擦拭采血管的外表面。
4.2.4 将镍铬丝环握在末端，用还原火焰将其加热至红热状态。
4.2.5 允许金属丝环冷却后，慢慢打开旧培养管的棉塞，并轻轻加热管口的温度。
4.2.6 在移除斜管中的棉塞后，使用接种环取取涂片或培养物进行后续操作。
4.2.7 用镊子夹住带有污渍或菌落生长的镍铬丝环，将含有菌落的斜面管塞紧，然后将旧的斜面培养物丢弃。
4.2.8 打开新的斜面管，用另一只手握住管子的口部，然后小心地将培养物从接种环上转移到斜面管中。
4.2.9 将培养物以螺旋状涂抹在斜面表面，加热斜面的口部并封好。
4.2.10 对于厌氧菌，将接种环插入斜面培养基的深处，加热斜面培养基的边缘部分，然后将其封闭。
4.2.11 在培养管上贴上标签，按照规定的温度和时间进行培养，之后将其储存在2–8°C的冰箱中。

4.3 微生物培养的维护

4.3.1 如果母培养基（mother culture） 冻干的使用安瓿切割器在安瓿的中间位置划线。
4.3.2 用无菌的70%（体积比）异丙醇溶液对安瓿进行消毒，该溶液需用无绒棉球浸湿后使用。
4.3.3 将无菌棉布包裹在安瓿瓶上，然后小心地将其折断。
4.3.4 在无菌条件下，使用……辅助工具加入约0.2毫升的无菌生理盐水溶液。 **微量移液器** 然后充分混合均匀。
4.3.5 转移一整圈（数据或液体） 悬浮液 将样品接种到重复使用的无菌培养基中，按照表1中规定的温度进行培养，并观察培养后的生长情况。
4.3.6 如果培养物处于营养生长期（斜面培养），则通过以下方法检查培养物的纯度： 染色方法 并将观察结果记录在指定格式中。
4.3.7 如果培养物未表现出其应有的物理特性，应按照规定丢弃该培养物。 微生物废弃物销毁的标准操作规程.
4.3.8 在确认了母培养基的纯度后，从母培养基中取一环量的悬浮液转移到新鲜的斜面培养基上，分别制备三个主培养物（Master Cultures），并分别标记为MC1、MC2和MC3。
4.3.9 将两个试管在表1中指定的温度和时间内进行培养，然后观察培养后的生长情况。
4.3.10 通过染色方法检测培养物的纯度，并按照规定的格式记录其物理特性。
4.3.11 如果培养物未表现出其应有的物理特性，应按照《微生物废弃物销毁标准操作规程（SOP）》的要求将其丢弃。
4.3.12 如果培养物表现出表1中所述的物理特性，将MC1中的一环培养物转移到七组新的斜面培养基上，并分别将其标记为M1、M2、M3、M4、M5、M6和M7。
4.3.13 将所有样品在规定的温度下培养指定的时间，并分别标注批号，例如 MC1/M1、MC1/M2、MC1/M3 至 MC1/M7。
4.3.14 孵育后，观察菌落的生长情况，并根据附录1中提供的样品要求对菌落进行标记。将菌株储存在2–8°C的温度下，具体储存时间根据要求而定。
4.3.15 按照附件1中规定的示意图使用已准备好的培养物。
4.3.16 在第1个月、第2个月、第3个月、第4个月、第5个月和第6个月，分别使用M1、M2、M3、M4、M5和M6来制备每周使用的培养物。如果上述任何一种培养物受到污染，则使用M7培养物进行替换。
4.3.17 在确认培养物纯度后，从每月培养的菌株（M1、M2、M3、M4、M5、M6）中取出一环培养物转移到五个新的斜面培养基上，并将其分别标记为 W1、W2、W3、W4、W5。同时为这些新的培养物分配批号，分别为 MC1/M1/W1、MC1/M1/W2、MC1/M1/W3、MC1/M1/W4、MC1/M1/W5。
4.3.18 孵育后，观察菌落的生长情况，并根据附录1中提供的样品要求对菌落进行标记。将菌株储存在2–8°C的温度下，具体储存时间根据要求而定。
4.3.19 每月的第1、2、3、4周分别使用W1、W2、W3、W4培养物。如果上述任何一种培养物受到污染，则使用W5培养物。在确认每周培养物的纯度后，将一环培养物转移到新的四个斜面上，制备每日工作培养物，并将其标记为D1、D2、D3、D4。为这些每日工作培养物分配批号，例如MC1/M1/W1/D1。
4.3.20 将所有培养物在规定的温度和时间内进行培养（见表1），观察其生长情况并做好标记。将培养物储存在2–8°C的温度下，保持指定的时间。

4.4 微生物培养物的使用与销毁

4.4.1 对于日常微生物分析，仅使用每日工作培养物（Daily Working Culture）。使用D1培养物连续两天，D2培养物用于接下来的两天，依此类推，D3和D4分别用于后续两天。
4.4.2 工作完成后，通过添加特定物质来处理并丢弃培养基斜面。 消毒液 将样品在30分钟内加热至指定温度，然后置于121°C、15 psi的压力下进行高压灭菌30分钟，并记录整个销毁过程的详细信息。

培养物名称：   菌株编号：   批号：   通用编号：   子日期：   使用前：  储存条件：