高效液相色谱（HPLC）校准程序

检查高效液相色谱仪（泵）的以下参数/状态：
I. 检查点：泄漏测试（通过压降法进行）
II. 流速校准

检查点：压力下降法泄漏测试

确保仪器已准备好进行校准，并且按照启动程序进行操作。
2. 将泵的进液管通过一个吸滤器插入符合水级要求的 HPLC 用水中。

3. 让流动相流动大约5分钟。
4. 用锁紧螺丝封闭泵的出口。

5. 压力开始上升，当压力超过300巴时，显示屏上会显示“ERROR P-MAX”。记录下当前时间。按下“CE”键，然后观察压力在5分钟内的下降情况。
6. 5分钟后，将压力记录在校准日志中。
7. 将“HOLC列的使用情况”记录在“列使用日志登记册”中。
8. 将用户信息记录在仪器使用日志登记表中。
9. 将检测结果与校准日志中规定的限值进行比较，并记录关于 HPLC 色谱仪校准状态的备注。

10. 在出现不符合规定的情况时，应按照维护计划（Maintenance Program）进行处理。
相关： 高效液相色谱（HPLC）的原理与工作原理

流量校准

确保仪器已准备好进行校准，并且按照启动程序进行操作。
2. 确保该泵通过了“泄漏测试（通过压降法）”。
3. 将引流管放置得当，确保其... 流动相 （将水）滴入10毫升的干净、干燥的容量瓶中，确保水滴不接触到瓶壁；当第一滴水滴入瓶中时，立即开始计时。
4. 等待收集到的流动相体积达到容量瓶的10毫升刻度线后，停止计时器。
5. 将收集10毫升流动相所需的时间记录在校准日志中。
6. 以1.0 ml、1.5 ml和2.0 ml/分钟的流速分别重复该操作。
7. 重复步骤3至6，但将流动相从水改为甲醇HPLC级。
8. 将检测结果与校准日志中规定的限值进行比较，并根据校准状态记录相应的备注。
9. 将仪器和HPLC色谱柱的使用情况分别记录在《仪器使用日志登记册》和《色谱柱使用日志登记册》中。
10. 制作校准状态标签，并将其放置在仪器指定的位置进行展示。
11. 在出现不符合规定的情况时，应按照维护计划（Maintenance Program）进行处理。

注射体积的可重复性和线性

溶液混合器准备

取一个干净且干燥的50毫升容量瓶。
2. 用移液管将1.0毫升的苯和甲苯移入干净且干燥的50毫升容量瓶中。
3. 用甲醇将体积补足至50毫升，然后充分混合。

色谱条件

HPLC柱：ODS C18，（25厘米×4.6毫米内径，5微米颗粒大小）
流动相：甲醇：水（70 : 30）
流速：1.0 毫升/分钟。
波长：254纳米
注射体积：20 微升

校准

确保仪器已准备好进行校准，并且按照启动程序进行操作。
2. 确保仪器已根据色谱分析的条件进行正确设置。
3. 按照仪器操作规程进行操作，每次注入10微升样品，重复三次（triplicate），并记录色谱图结果。
4. 重复上述溶液的注射过程，分别注射15 µl、20 µl、25 µl、30 µl的量，每组重复三次（即三次注射）。
5. 将色谱图的打印结果取出，并将其附在校准日志上。
6. 将苯和甲苯峰的面积及保留时间记录在校准日志中。
将仪器和HPLC柱的使用情况分别记录在《仪器使用日志登记册》和《色谱柱使用日志登记册》中。
8. 绘制苯峰与甲苯峰的面积与注射体积之间的关系曲线，计算其重复性（RSD），并将结果记录在校准日志中。
9. 计算每个峰在五个不同浓度水平下的相关系数“r2”，并将结果记录在校准日志中。
10. 将检测结果与校准日志中规定的限值进行比较，并根据校准状态记录相应的备注。
11. 制作校准状态标签，并将其放置在仪器指定的位置进行展示。
12. 在出现不符合规定的情况时，应按照维护计划（Maintenance Program）进行处理。

检查点：D2灯能量检测（探测器）

确保仪器已准备好进行校准，并且按照启动程序进行操作。
2. 在检测器的显示窗口中，会出现“l(nm)”、“abs(AU)”、“range(AUFS)”和“lamp”这些功能对应的数值。
3. 在显示屏上，先前设置的值会在“l(nm)”功能下闪烁。通过按下数字键，将波长输入为254纳米。
4. 按下“Func Back”键，选择“lamp”功能，输入1来选择D2灯。
5. 继续按“Func Back”键，直到“REF EN”出现。
6. 将 D2 灯在 254 nm 波长的参考能量记录在校准日志中。
7. 将检测结果与校准日志中规定的限值进行比较，并根据校准状态做出相应的备注。
8. 如发现不符合规定的情况，请按照以下步骤进行处理： 维护计划.

III. 检测器响应的线性：

溶液混合器准备

1. 取三个干净且干燥的50毫升容量瓶。
2. 根据下表中的用量，分别用移液管将苯（Benzene）和甲苯（Toluene）移入干净的、干燥的50毫升容量瓶中。
3. 用甲醇将体积补足至50毫升，然后充分混合。

溶液浓度（水平）	需服用**毫升**苯。	需服用**1毫升**甲苯。	需用甲醇稀释至……
1	0.5	1.0	50毫升
2	1.0	1.0	50毫升
3	1.5	1.0	50毫升

色谱条件

根据设备的参数设置程序，将每台设备设置为以下参数。
HPLC柱：ODS C18，（25厘米×4.6毫米内径，5微米粒径）
流动相：甲醇：水（70 : 30）
流速：1.0 毫升/分钟。
波长：254纳米
注射体积：20 微升

校准

确保仪器已准备好进行校准，并且按照启动程序进行操作。
2. 确保仪器已根据色谱分析的条件进行正确设置。
3. 按照仪器操作规程进行操作，每种溶液分别注射三次，并记录色谱图结果。
4. 将色谱图的打印结果取出，并将其附在校准日志上。
5. 将苯和甲苯峰的面积及保留时间记录在校准日志中。
6. 将仪器和HPLC色谱柱的使用情况分别记录在《仪器使用日志登记册》和《色谱柱使用日志登记册》中。
7. 计算苯与甲苯的面积比，求出这些比值的平均值，并记录在校准日志中。
8. 从三个水平的平均面积比值中计算出相关系数“r2”，并将其记录在校准日志中。
8. 绘制苯峰与甲苯峰面积比与浓度的关系曲线，计算其重复性（RSD），并将结果记录在校准日志中。
9. 将检测结果与校准日志中规定的限值进行比较，并根据校准状态记录相应的备注。
10. 制作校准状态标签，并将其放置在仪器指定的位置进行展示。
11. 在出现不符合规定的情况时，应按照维护计划（Maintenance Program）进行处理。

高效液相色谱（HPLC）泵的校准

型号编号：	生产；制造
仪器代码编号：

A. 检查点：泄漏检测（压降测试）
P.Max 待定；尚未确定	P.Max Set		开始时间		停机时间		总时间		观察到的压力		备注；说明
300巴
B. 流量校准：
流量；流速 （毫升/分钟）		收集10毫升流动相所需的时间						限制；限度；界限		备注；说明；附言
		理论上的；假设的 （以秒为单位）		实际含水量（以水计）		实际含量（含甲醇）
0.5毫升		1200						1194 - 1206
1.0 毫升		600						594 – 606
1.5 毫升		450						443 – 457
2.0 毫升		300						294 - 306

注射器的校准

型号：                                            制造商：
仪器代码编号：

a. 溶剂混合物的配制：

取_____毫升（1.0毫升）的________（苯）和________（甲苯）放入一个_____毫升（50毫升）的干净、干燥的容量瓶中，用甲醇补足体积，然后充分混合。

b. 色谱条件：

参数；指标	测试条件	应用条件
流动相	甲醇：水（70:30）
高效液相色谱柱	ODS C18柱，（内径25厘米 x 长度4.6毫米，粒径5微米）
流量；流速	1.0 毫升/分钟
波长	254纳米

注射体积		注射剂-1		注射剂-2		注射剂 -3		含义；意思	% RSD：相对标准偏差（Relative Standard Deviation） （不超过2.0%）
		苯	甲苯	苯	甲苯	苯	甲苯
10 由于“m”本身不是一个常见的英文术语或短语，在制药行业的专业术语中也没有明确的对应中文翻译。如果“m”是某个特定缩写（如“mg”代表“milligram”或“mL”代表“milliliter”），则需要提供更多的上下文信息才能给出准确的翻译。如果“m”是某个专有名词或缩写，也需要明确其具体含义。请提供更多的背景信息以便进行准确的翻译。由于您提供的内容仅为“l”这一个字符，它没有明确的含义或翻译成中文的依据。请提供更多的上下文或信息，以便我能够为您提供准确的翻译。	RT
	区域；面积；领域
15 由于“m”本身不是一个常见的英文术语或短语，在制药行业的技术文档中也没有明确的含义或用法，因此无法提供准确的翻译。如果您能提供更多的上下文或说明“m”的具体含义，我将能够更准确地帮助您进行翻译。由于您提供的内容仅为“l”这一个字符，它没有明确的含义或翻译成中文的依据。请提供更多的上下文或信息，以便我能够为您提供准确的翻译。	RT
	区域；面积；领域
20 由于“m”本身不是一个常见的英文术语或短语，在制药行业的专业术语中也没有明确的对应中文翻译。如果“m”是某个特定上下文中的缩写或代码，建议提供更多的背景信息以便进行准确的翻译。如果“m”只是一个普通的字母，那么它通常不会被翻译，因为它没有具体的含义。请提供更多的上下文或说明，以便我能给出更准确的翻译。由于您提供的内容仅为“l”这一个字母，它没有明确的含义或翻译成中文的依据。请提供更多的上下文或信息，以便我能够为您提供准确的翻译。	RT
	区域；面积；领域
25 由于“m”本身不是一个常见的英文术语或短语，在制药行业的技术文档中也没有明确的含义或用法，因此无法提供准确的翻译。如果您能提供更多的上下文或说明“m”的具体含义，我将能够更准确地帮助您进行翻译。由于您提供的内容仅为“l”这一个字母，它没有明确的含义或翻译成中文的依据。请提供更多的上下文或信息，以便我能够为您提供准确的翻译。	RT
	区域；面积；领域
30 由于“m”本身不是一个常见的英文术语或短语，在制药行业的技术文档中也没有明确的含义或用法，因此无法提供准确的翻译。如果您能提供更多的上下文或说明“m”的具体含义，我将能够更准确地帮助您进行翻译。由于您提供的内容仅为“l”这一个字符，它没有明确的含义或翻译成中文的依据。请提供更多的上下文或信息，以便我能够为您提供准确的翻译。	RT
	区域；面积；领域

检测器的校准

型号：	生产；制造
仪器代码编号：

D2 LAMP ENERGY CHECK：
需要设置的波长	波长设置	观察到的参考能量	限制；限度；界限
254纳米			不少于200

检测器响应的线性：
a. 溶液配制
溶液；配方；解决办法	**毫升苯**		**毫升甲苯**		用甲醇溶解
（级别）	请服用。	已领取；已收到	需按指示服用。	已采纳；已接收	需要稀释。	稀释至
1	0.5毫升		1.0 毫升		50毫升
2	1.0 毫升		1.0 毫升		50毫升
3	1.5 毫升		1.0 毫升		50毫升

**流动相制备：** 取 ______ 毫升 ___________（甲醇，HPLC级）加入到一个 _______ 毫升的干净、干燥的容量瓶中，然后加入 ____________ 毫升 ___________（水，HPLC级），充分混合后冷却至室温。最后通过 0.45 微米或 0.22 微米的滤膜进行过滤。 由于“m”本身不是一个常见的英文术语或短语，在制药行业的专业术语中也没有明确的对应中文翻译。如果“m”是某个特定术语的缩写（例如“mg”代表“milligram”或“mRNA”代表“messenger RNA”），则需要提供更多的上下文信息才能给出准确的翻译。如果“m”是随机输入的字符，建议提供更多的背景信息以便进行准确的翻译。 膜过滤器在真空条件下脱气_____分钟，或通过超声波处理脱气。

参数；指标	测试条件	应用条件
流动相	甲醇：水（70:30）
高效液相色谱柱	ODS C18，内径25厘米，长度4.6毫米，5个 µ由于“m”本身不是一个常见的英文术语或短语，在制药行业的技术文档中也没有明确的含义，因此无法提供准确的翻译。如果您能提供更多的上下文或说明“m”的具体含义，我将能够更准确地帮助您进行翻译。)
流量；流速	1.0 毫升/分钟
波长	254纳米
范围；幅度；区间	1.0 AUFS
注射体积	20 µ由于您提供的内容仅为“l”这一个字符，它没有明确的含义或翻译成中文的依据。请提供更多的上下文或信息，以便我能够为您提供准确的翻译。

溶液；配方；解决办法 （级别）	苯面积		甲苯面积		面积比 （苯/甲苯）
	RT	区域；面积；领域	RT	区域；面积；领域
1
含义：
% RSD：相对标准偏差（Relative Standard Deviation）		---		---
2
含义：
% RSD：相对标准偏差（Relative Standard Deviation）
3
含义：
% RSD：相对标准偏差（Relative Standard Deviation）

比例线性：相关系数 r2  :

限值：保留时间的相对标准偏差（% RSD）不得超过2.0%。 比例线性：相关系数 r2  不少于0.999