一般要求
生物指示剂是一种微生物测试系统，由特定微生物（通常是细菌孢子）的标准化活菌群组成。这些微生物被接种在载体上，并包装在主包装中，随时可以使用。该系统能够对特定的灭菌过程产生明确的抗性反应（即能够存活下来）。生物指示剂能够直接评估灭菌过程的杀菌效果。当与物理和/或化学过程监测手段结合使用时，生物指示剂可以反映特定灭菌过程的有效性。
生物指示物的类型
生物指示剂有多种形式，每种形式都是为特定的灭菌方法设计的，其中包含已知微生物种类的活菌培养物。生物指示剂至少有三种不同的类型。有些生物指示剂可能还包含两种不同的微生物种类及其孢子浓度。在一种形式中，孢子被接种到一种方便使用的载体上，例如滤纸，这种滤纸被放置在初级包装内，以保护载体免受损坏或... 污染；杂质 在允许灭菌剂与测试微生物接触的过程中，必须采用无菌技术将接种后的载体转移到培养基中，以避免意外污染。该载体和初级包装不会被特定的灭菌过程破坏，并且其设计旨在尽量减少运输、处理和储存期间原始接种物的损失。
另一种形式的生物指示剂被称为“自含式生物指示剂”，其组件包括一个装有培养基的安瓿瓶和一个装有特定数量测试微生物的接种载体（位于另一个小瓶中）。灭菌剂通过瓶盖上的过滤器进入和离开外瓶。这种生物指示剂与自含式培养基共同构成一个系统，整个系统能够抵抗灭菌过程的影响。
为了考虑到杀菌剂到达系统中微生物所需的时间延迟，应对整个系统（而不仅仅是自含单元的纸质载体）的D值（十倍减少值）、工艺终点、杀菌时间和存活时间进行测定。处理完成后，将含有生长培养基的安瓿压碎并与接种后的载体接触，这样就无需将载体无菌转移到另一个装有生长培养基的小瓶中了。
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其他自含型生物指示剂由密封的安瓿组成，其中含有悬浮在培养基中的测试微生物。培养基中通常还含有染料，通过观察培养后的颜色变化可以判断微生物是否生长。由于这种生物指示剂的特殊结构，它仅对温度敏感，主要用于监测液体的灭菌效果。这些生物指示剂可以在规定的条件下直接暴露于灭菌过程后进行培养。处理后的孢子是否生长可以通过视觉观察来确定（例如通过观察培养基中指示剂颜色的变化或通过浊度来判断）。 显微镜检查 接种培养基中的……
该自包含系统的设计确保在运输和操作过程中原始接种物的损失最小，并且其抗性特性符合该系统的标签说明。在……期间或之后 灭菌工艺在自包含系统中使用的材料不会保留或释放任何可能在培养条件下抑制少量存活指示微生物生长的物质。必须采取充分的措施来证明，该恢复培养基在经过灭菌处理后仍能保持其支持微生物生长的特性。
用于灭菌过程（SIP）或必要场所的定制生物指示剂，可以通过将一定量的孢子悬浮液加入待灭菌批次（即接种产品）的代表样品中来制备。如果无法将孢子直接加入实际产品中，也可以将孢子加入经过验证的模拟产品中，该模拟产品应能显示出与实际产品相似的耐受性。