培养基制备及促生长试验的标准操作规程（Standard Operating Procedure for Media Preparation and Growth Promotion Test）

1.0 目标

制定用于培养基制备和促生长试验的程序。

2.0 范围

该程序适用于微生物分析中的培养基制备和促生长试验。

3.0 责任

微生物学家 - 质量控制部门

4.0 责任制

质量控制经理

5.0 程序

5.1 一般预防措施

5.1.1 根据培养基的用量，取一个干净、干燥的玻璃锥形烧瓶，其体积应符合要求。
5.1.2 使用不同的刮刀来处理不同的培养基，以避免交叉污染。 交叉污染.
5.1.3 在连续称重之前，先清洁天平。
5.1.4 使用纯化水进行培养基的制备。
5.1.5 媒体（培养基）的制备和废弃处理将在不同的地点/时间进行。

5.2 培养基的制备

5.2.1 按照培养基的要求，取一个干净且干燥的锥形瓶。将培养基体积的一半转移至该锥形瓶中。 纯化水 在锥形瓶中加入所需量的物质。称量该物质的重量。 脱水培养基 按照所需体积，将样品转移到锥形瓶中，并根据制造商的说明进行重新水化处理。然后用剩余的水补足体积至规定要求。
5.2.2 使用...方法检查培养基的pH值。 校准过的pH计根据需要，使用0.1M HCl或0.1M NaOH来调节pH值。
5.2.3 在称量和重新水化培养基的过程中，必须严格遵守制造商提供的所有说明和预防措施。
5.2.4 记录以下详细信息：
介质名称，批号，有效期，制备日期，制备人，制备前的pH值 灭菌 在灭菌处理后（使用肉汤培养基），培养基的体积等应按照附录II的规定进行调整。
5.2.5 根据要求将培养基分装到单独的容器中，然后用棉塞或螺旋盖密封容器。
5.2.6 对培养基进行灭菌处理。 在121°C和15 psi的压力下加热20分钟，或按照经过验证的时间要求进行操作。

5.3 杀菌培养基的生长促进试验。

5.3.1 根据附录I选择合适的微生物菌株，用于促进生长的测试。
5.3.2 定量培养的微生物应至少培养24小时，或者达到验证确定的培养时间。 微生物培养 可用于促进生长，其菌落数量为10-100 cfu/ml。
5.3.3 对于琼脂培养基的生长促进试验，需将微生物培养物无菌地转移到两个无菌培养皿中，然后加入15至20毫升的琼脂培养基（在加入培养基之前，需将培养基的温度保持在40-45°C）。
5.3.4 在30°C-35°C的温度下培养培养皿24-48小时，以检测细菌数量；在20°C-25°C的温度下培养5-7天，以检测真菌数量。
5.3.5 在培养期结束后，统计微生物的菌落数量。根据附录II记录平均结果。
5.3.6 对于肉汤培养基的促生长试验，需在相应的培养基试管中加入规定的菌种（10 cfu–100 cfu），然后在30°C–35°C下培养24–48小时以测定细菌数量；在20°C–25°C下培养5–7天以测定真菌数量。
5.3.7 在培养期结束后，通过观察浊度来检测微生物的生长情况。根据附录II的要求记录观察结果。
5.3.8 菌落计数应恢复到添加到培养基中的微生物总数的70%以上。
5.3.9 通过生长促进试验的培养基可用于样品的分析。
5.3.10 必须始终对培养基进行阴性对照测试，以确认其无菌状态。

6.0 缩写词

6.1 标准操作规程（Standard Operating Procedure）
6.2 WFI - 注射用水
6.3 LAF - 层流空气
6.4 HCl - 盐酸
6.5 NaOH - 氢氧化钠
6.6 毫升
6.7 Cfu - 菌落形成单位（Colony Formation Unit）
6.8 °C - 摄氏度