《小瓶微生物完整性检测的标准操作规程》

1.0 目标

检查小瓶的密封完整性。

2.0 范围

为确保新供应商提供的小瓶的密封完整性，以便获得批准。

3.0 责任

3.1 职位：技术助理
3.2 检查：执行人员/经理

4.0 责任制

部门负责人
**频率：在供应商变更时。**

5.0 程序/规程

5.1 要求：

**大豆酪蛋白消化培养基**
b. 大豆酪蛋白消化琼脂。
c. 无菌培养皿。
d. 微量移液器
e. 无菌微针头
f. 2升容量无菌烧杯（2个）。
g. 试管架
h. 无菌注射器及针头
i. 铜绿假单胞菌（P. aeruginosa）- ATCC 9027
j. 无菌生理盐水（0.9% w/v）
k. E.Coli-ATCC-8739

5.2 接种物制备：

5.2.1 将来自冻存管的1毫升P.aeruginosa-ATCC 9027和E.Coli-ATCC-8739菌株的冷冻培养物分别接种到2个20毫升的含有大豆酪蛋白消化培养基的试管中（每种菌株各接种一个试管）。将所有试管置于30°C-35°C的温度下培养24小时。
5.2.2 从每个试管中取1毫升培养液，分别涂布到含有SCD琼脂的培养板上。在30°C至35°C的温度下培养24小时。
5.2.3 在每种微生物的培养平板中加入5毫升0.9%的无菌生理盐水。
5.2.4 使用无菌移液管将培养物收集到无菌试管中。
5.2.5 从该样品中制备系列稀释液，并对每个稀释液进行两次活菌计数。
5.2.6 制备上述两种微生物的悬浮液，使其最终浓度达到 10^6 cfu/ml。将结果记录在附件-II 的 A 部分。
5.3 培养基灌装小瓶的预培养：
将已填充并密封的培养基小瓶在30-35°C下预培养2-3天，以确保小瓶内没有……（原文未明确“没有什么”，需根据上下文补充具体内容）。 污染；杂质.
5.4 取样数量：（每种微生物20支小瓶）

5.5 程序/步骤

5.5.1 将小瓶分别放入两个不同的烧杯中。 **倒置位置** 然后分别倒入适量的每种悬浮液，确保盖子和瓶颈都被完全覆盖。
5.5.2 保持30分钟。
5.5.3 逐个缓慢取出小瓶，并将它们倒置放置在支架上。对于两种不同的微生物，应使用不同的支架。
5.5.4 用塑料袋覆盖这两种微生物的培养皿，以防止外部污染。
5.5.5 在30°C至35°C的温度下孵育14天。
5.5.6 在测试前后对悬浮液进行活菌计数，并将结果记录在附录II的B部分和C部分中。
5.5.7 如果任何培养单元出现生长现象，应调查其原因：是来自用于测试的微生物本身，还是由于污染造成的。
5.5.8 将结果记录在附录I中。

5.6 生长促进试验：

5.6.1 在14天结束后，使用每种微生物分别进行两次到三次培养实验，每次使用两到三个小瓶进行生长促进测试。
5.6.2 将结果记录在附录I中。

6.0 缩写词

6.1 °C = 摄氏度

微生物名称	稀释	菌落数量		含义；意思	备注；说明；附言
铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）
大肠杆菌