色谱分析中的杂峰

色谱法是一种常用的分析技术，它根据化合物的性质及其与色谱柱中固定相的相互作用来分离这些化合物。当化合物混合物通过色谱柱时，不同化合物会形成各自的色谱峰，从而实现分离。

某些化合物在分离过程中会以不同的方式干扰色谱系统，从而在色谱图上产生不必要的峰。这些不必要的、未被识别的峰被称为“杂峰”。识别这些峰非常重要，因为它们可能会影响实验结果的准确性。本文将解释杂峰产生的原因以及如何轻松识别它们。

什么是外来峰（extraneous peaks）？

在色谱图中，如果出现一个并非由被分析化合物产生的峰，而是由于其他原因无意中产生的，那么这个峰被称为“外来峰”（extraneous peak）。这类峰不属于样品的成分，它们在图上表现为凸起的部分，而不是平滑的基线。这些外来峰可能会影响色谱分析的结果，使得难以得出准确的结论。有时这些峰的宽度较大，在图上看起来更像是一个凸起，而不是一个典型的峰形，从而增加了判断样品中存在哪些化合物的难度。

色谱分析结果中出现杂峰是非常常见的现象。这种现象可能由多种原因引起，具体取决于样品本身以及所使用的分析设备。如果在分析过程中使用了碳氢化合物溶剂，这些溶剂可能会从空气中吸附一些碳氢化合物杂质，从而导致色谱图中出现未知的峰。杂峰的其他常见原因还包括空气中的污染物，如灰尘、溶剂蒸气，甚至是操作人员指尖上的油脂。此外，用于样品稀释的溶剂也可能影响样品的保留时间，从而在色谱图上显示为“泵信号”而非真正的峰。

哪些峰可以被归类为外来峰（extraneous peaks）？

最常见的非目标峰（extraneous peaks）实际上是设备本身的成分，而非样品中的化合物。这些被认定为非目标峰的峰包括：

1. 溶剂峰：这些峰是由用于制备样品的流动相或稀释剂引起的。它们可能是由于流动相中存在甲醇、乙腈或水而产生的。
2. **试剂或辅料峰**：有时，配方中使用的辅料可能会在色谱分析中以峰的形式出现。
3. 污染峰：这些异常峰可能是由于前一次注射的残留物或玻璃器皿的污染造成的。
4. **柱渗漏峰（Column Bleed Peaks）：**柱渗漏是指高效液相色谱（HPLC）色谱柱中的分解产物。这种由色谱柱固定相引起的污染通常发生在气相色谱（GC）色谱柱或使用时间较长的HPLC色谱柱中。
5. 环境污染物：大气中的空气或样品处理过程中可能引入污染物，这些污染物会在色谱分析中表现为额外的色谱峰（即“外来峰”）。
6. 流动相杂质：如果流动相没有经过适当的过滤或脱气处理，可能会导致基线噪声或出现意外的色谱峰。

识别异常峰值的最佳方法是将当前样品的色谱图与之前分析过的产品色谱图进行比较，这样就可以轻松找出新出现的峰值。可以通过注入溶剂或流动相（不含分析物）来运行系统空白或溶剂空白实验。如果出现任何峰值，这些峰值可能来源于溶剂、玻璃器皿污染、流动相或系统残留。这样做有助于排除所有与样品无关的峰值来源。

你也可以注射安慰剂来检测除活性成分以外的其他峰或干扰物质。你可以注射原料药（API）、已知杂质或溶剂的标样，并将它们的保留时间与未知峰进行比较。如果这些保留时间与任何已知标准都不匹配，那么就可以认为这些峰是外部来源的。
目前，针对色谱图中出现的“外来峰”（extraneous peaks），尚无具体的监管指南来帮助制药行业识别这些峰。制药企业对于这些外来峰的检测和报告也没有统一的阈值标准。有些企业会关注那些面积占主峰1%以上的外来峰；而另一些企业则将面积低于1%的外来峰忽略不计。此外，不同企业设定的报告阈值也不尽相同（有的为1%，有的为2%）。因此，目前并没有明确的判断标准来界定这些外来峰的检测和报告要求，这些阈值的选择也没有相应的依据或理由。

ICH 指南 ICH Q3A(R2)，“新药活性成分中的杂质” 以及 ICH Q3B(R2)，“新药制剂中的杂质” 这些指南中虽然提供了关于杂质和降解产物的详细信息，但并未涉及外来峰（extraneous peaks）的问题。

FDA仅在“……”中提到了外来峰（extraneous peaks）。审核员指南 - 色谱方法的验证该标准发布于1994年，但其中并未规定任何报告的阈值（即没有设定需要报告的具体偏差或问题的最低限度）。

然而，如今监管机构对此非常重视，如果对异常峰值的调查不够彻底，FDA 会发出警告信。以下是 FDA 就异常峰值调查发出的一些警告信。

维加生命科学有限公司（Vega Life Sciences Pvt Ltd）
Windlas Healthcare Pvt Ltd
迈兰制药公司（Mylan Pharmaceuticals Inc.）

因此，制药行业需要来自 FDA 或 ICH 的适当监管指导，以明确关于“外来峰”（extraneous peaks）及其报告阈值的规范。请在评论区分享您对此问题的看法。