1.0 目标
本文件描述了不同类型化学消毒剂效力的测试程序。
2.0 范围
本文件规定了用于验证制药生产及检测设施中所使用的消毒剂及其消毒流程的程序。
3.0 参考文件
微生物培养基制备的标准操作规程（SOP）消毒剂有效性测试
4.0 先决条件
在按照通用验证方案进行操作之前，必须确保以下各项准备就绪：
4.1 微生物标准菌株
4.1.1. 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）
4.1.2 大肠杆菌
4.1.3 金黄色葡萄球菌
4.1.4 白色念珠菌
4.1.5 黑曲霉（Aspergillus niger）
4.1.6 环境起到了隔离作用。
4.2 消毒剂： 该设施内使用的所有消毒剂。
4.3 微量移液器
4.4 消毒过的吸头和培养皿
5.0 责任
以下是参与《通用验证方案》相关活动的质量保证（QA）和质量控制微生物学人员的职责：
5.1 质量保证（验证）
5.1.1 协议的批准
5.2 质量控制
5.2.1 协议的制定
5.2.2 协议的审查
5.2.3 协议的执行
6.0 验证方法
A) 消毒剂验证中的悬浮法
B) 表面喷洒/浸泡或擦拭法（消毒方法验证）
6.1 悬浮法
6.1.1 目标：
6.2.1 目标：
9.1 沉降法检测
9.2 表面喷雾/擦拭法检测
10.0 验证矩阵
11.0 缩写
为了确定测试浓度和接触时间，通常会采用悬浮液测试方法。该测试能够在精确的实验条件下，评估消毒剂的体外杀菌活性，这些条件包括……
• 微生物菌株
• 接种液的制备
• 接种量与消毒剂用量
• 温度
• 消毒剂浓度及接触时间
• 干扰物质（例如无机物、有机物）
6.1.2 程序：
6.1.2.1 根据要求，从原始培养物中制备培养悬浮液。 微生物培养基制备的标准操作规程（SOP）.
6.1.2.2 选择一种稀释比例，使得最终浓度达到10。5 达到106 每毫升细胞数
6.1.2.3 准备10毫升用于检测的测试稀释液。 无菌蒸馏水.
6.1.2.4 将试管涡旋振荡1分钟。
6.1.2.5 添加0.1毫升的任意一种含有10个菌株的培养物。5 达到106 将每毫升细胞数加入到预定浓度的测试消毒剂中。
6.1.2.6 最终浓度应为10。4 达到105 每管中的细胞数量。请将准备时间设置为0分钟。
6.1.2.7 按照上述方法，为另外3个不同的时间间隔分别准备另外3组样品。
6.1.2.8 提供0分钟、5分钟、10分钟和15分钟的接触时间。
6.1.2.9 在规定的接触时间后，将样品通过0.45微米的过滤器进行过滤。 膜过滤器.
6.1.2.10 提供三个 清洗；洗涤 每瓶100毫升，含有0.1%的无菌蛋白胨水/无菌水。
6.1.2.11 在无菌镊子的帮助下取出膜过滤器，并将其放置在大豆酪蛋白消化琼脂培养基上。
6.1.2.12 将细菌培养物在30-35°C下培养24至48小时，将真菌培养物在20-25°C下培养72至120小时。
6.1.2.13 孵育后，统计膜上存在的菌落数量。
6.1.2.14 记录菌落的数量。
6.1.2.15 这将是暴露后的实际观察计数结果。
6.1.2.16 选择菌落计数最少或为零的平板。
6.1.2.17 以相同的方式对所有待检测的培养物进行处理。
6.2.1 目标：
为了确定通常使用的测试浓度和接触时间的有效性，悬浮液测试在精确的实验条件下评估了消毒剂的体外杀菌活性。这些实验条件包括……
• 微生物菌株
• **制备** **接种物；菌种**
• 接种量与消毒剂用量
• 温度
• 消毒剂浓度及接触时间
• 干扰物质（例如无机物、有机物）
采用喷涂/浸渍或擦拭方法，以下表面需要进行验证：
不锈钢（SS）
• 环氧树脂
• **小组；委员会**
• 聚氨酯涂料墙面（Poly Urethane Paint）
6.2.2 程序：
6.2.2.1 根据微生物培养基制备的SOP（标准操作规程），从原始培养物中制备培养悬浮液。
6.2.2.2 选择能够产生10的稀释比例。4 达到105 每毫升细胞数
6.2.2.3 取用不同表面材质的培养皿，例如不锈钢（SS）材质的培养皿。 环氧树脂洁净室内的PU涂料墙面，面积为25平方厘米。2
6.2.2.4 从之前确定的悬浮液中取出104 达到105 将每毫升细胞接种到上述不同表面上的一种培养物中。
6.2.2.5 使用无菌刮刀将培养物均匀涂抹在表面上。
6.2.2.6 将其放置在LAF（低温干燥箱）中进行干燥。
6.2.2.7 在干燥暴露时间结束后：(a) 喷洒消毒剂；(b) 用擦拭法对表面进行消毒。
6.2.2.8 给出0分钟、5分钟、10分钟和15分钟的接触时间。
6.2.2.10 使用一根湿润的无菌拭子，轻轻擦拭该表面的所有区域。
6.2.2.11 将拭子放入含有无菌生理盐水的试管中，并且不要…… **持拭子** 超过24小时。
6.2.2.12 将试管轻轻涡旋5.0分钟。
6.2.2.13 使用0.45微米滤膜对样品进行无菌过滤。
6.2.2.14 使用0.1%无菌蛋白胨水或无菌水，分别进行三次每次100毫升的洗涤。
6.2.2.15 在使用无菌镊子进行过滤后，取出膜并将其放置在大豆酪蛋白消化琼脂培养基上。
6.2.2.16 将细菌培养物在30-35°C下培养24至48小时，将真菌培养物在20-25°C下培养72至120小时。
6.2.2.17 孵育后，统计膜上存在的菌落数量。
6.2.2.18 对所有待测试的培养物，使用上述所有提到的消毒剂进行相同的处理。
7.0 接受标准
7.1 细菌负荷的减少表明，当在该区域使用该消毒剂时，该消毒剂能够有效减少污染物。这一效果至少应达到4-对数减少值（log reduction value） 对于非孢子形成微生物，应达到至少3-log的减少；对于孢子形成微生物（包括霉菌）以及特定浓度的霉菌，也应达到至少3-log的减少。
7.2 确定上述微生物数量对数减少所达到的接触时间。
8.0 观察结果
8.1 将悬浮液制备方法的观察结果记录在附录I中。
8.2 将表面喷雾/擦拭方法的观察结果记录在附录II中。
9.1 沉降法检测
9.2 表面喷雾/擦拭法检测
以下测试矩阵是为初始分析方法验证和再验证标准准备的。 消毒剂的效力。
高级编号
|
测试描述
|
初始验证 |
**重新验证（Revalidation）** |
1
|
悬浮法
|
所有使用的消毒剂
|
每种新的消毒剂
|
消毒剂浓度变化
|
|||
接触时间的变化
|
|||
2
|
表面喷洒/擦拭法
|
所有使用的消毒剂
|
每种新的消毒剂
|
消毒剂浓度变化
|
|||
接触时间的变化
|
标准操作规程（SOP）
°C：摄氏度
%：百分比
CFU：菌落形成单位
SCA：大豆酪蛋白消化琼脂
m: 微米
PU：聚氨酯
附件一
结果：悬浮法
消毒剂名称：
|
|||||
在接触时间内（以分钟计），观察到对数减少效果。
|
|||||
微生物名称
|
0
|
5
|
10
|
15
|
观察到对数减少幅度显著。
|
枯草芽孢杆菌
|
|||||
大肠杆菌
|
|||||
金黄色葡萄球菌
|
|||||
白色念珠菌
|
|||||
黑曲霉（Aspergillus niger）
|
|||||
环境分离株
|
|||||
附录II
结果：表面喷雾/擦拭法
**表面选定：**
**消毒剂名称：**
|
|||||
微生物名称
|
在接触时间内（以分钟计），观察到对数减少效果。
|
||||
0
|
5
|
10
|
15
|
观察到对数减少幅度显著。
|
|
枯草芽孢杆菌
|
|||||
大肠杆菌
|
|||||
金黄色葡萄球菌
|
|||||
白色念珠菌
|
|||||
黑曲霉（Aspergillus niger）
|
|||||
环境分离株
|
|||||