1.0 目的
制定微生物培养基的储存、制备和检测程序。2.0 范围
本标准操作规程（SOP）适用于用于各种检测目的的培养基的储存、制备和检测工作。3.0 责任
受过培训的微生物学家负责根据制造商提供的培养基使用说明书来配制培养基。4.0 责任制
部门主管5.0 程序/步骤
5.1 通用说明
5.1.1 使用干净的玻璃器皿和配件进行培养基的制备。5.1.2 在开始制备培养基之前，请确保 称重天平 以及 pH计 这些设备已经过校准。
5.1.3 使用 纯化水（Purified Water）或注射用水（Water for Injection，WFI） – 用于制备培养基的原料（或物料）。
5.1.4 在使用日期之前，检查脱水培养基容器的使用说明。确保所使用的培养基仍在有效期内，并且培养基中没有结块现象。
5.1.5 不要将培养基容器长时间敞开，因为干燥的培养基具有吸湿性。
5.1.6 按照制造商的说明准备培养基；切勿过度加热培养基，也不要重新熔化已经固化的培养基以便再次使用。
5.1.7 将脱水培养基和制备好的培养基储存在推荐的储存条件下。
5.1.8 在制备培养基时，尤其是那些可能含有有毒成分的选择性培养基时，必须佩戴适当的手套和口罩。
5.2 脱水培养基或即用型培养基的采购、检测与储存
5.2.1 从 HiMedia 或其他信誉良好的培养基制造商处采购用于微生物检测的脱水培养基或即用型培养基。5.2.2 将培养基的寄送详情录入到脱水培养基消耗记录中。
5.2.3 在收到...后 脱水培养基 或者，对于已经准备好使用的媒介，需要检查以下内容：
- 媒体名称
- 批号
- 《媒体法典》
- 储存条件
- 使用说明
- 使用截止日期/失效日期前
- 检验报告书（COA）
5.2.5 外观：观察其外观，并与制造商提供的检验报告书（CoA）进行比对；外观应符合制造商检验报告书中的描述。
5.2.6 溶解度：按照制造商的说明准备培养基，将其溶解在纯化水中或注射用水（WFI）中；如有需要，可进行加热或煮沸处理。溶解度应符合制造商提供的检验报告书（CoA）中的要求。
5.2.7 制备好的溶液/培养基的外观：观察上述制备好的溶液/培养基，并与制造商提供的检验报告书（CoA）进行比较。制备好的培养基的外观应符合制造商检验报告书中的要求。
5.2.8 培养基的pH值：在制备前后，需检测培养基的pH值是否在规定的范围内。 高压灭菌培养基的 pH 值应符合制造商提供的检验报告书（COA）中的要求。
5.2.9 生长促进与抑制特性测试：进行 促生长试验 根据5.7条的要求，包括抑制性微生物在内的所有微生物都应符合验收标准。
5.2.10 记录观察结果；如果上述参数符合要求，则允许使用该培养基。按照以下格式对容器进行标记，并将其储存在推荐的储存条件下。
收到日期：
打开日期：
容器编号：
签名：
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5.2.12 当打开培养基用于实验时，首先观察其外观；如果外观合格，则可将其用于实验。随后将相关使用细节记录在培养基消耗记录中。
5.3 培养基的制备
5.3.1 按照要求执行。 洁净玻璃器皿 在制备每种类型的培养基之前，需要先准备好相应的容器和配件。5.3.2 取出所需的脱水培养基容器，核对其批号及使用有效期。将相关信息记录在培养基制备记录中。
5.3.3 阅读培养基制备的使用说明，并计算配制所需体积培养基所需的每种成分的总量。将每种成分的重量（以克或毫升为单位）乘以所配制的批次规模，从而得出该批次所需的总材料量。
5.3.4 在用于培养基制备和分装的玻璃器皿上标注以下详细信息：
媒体名称：
制备日期：
签名：
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5.3.6 将称量好的培养基转移到一个干净的容器中，并加入所需体积的纯化水或注射用水（WFI）。如果需要，可以使用加热后的注射用水来帮助培养基充分溶解。
5.3.7 在玻璃棒的帮助下…… 磁力搅拌器 将培养基完全溶解。如有需要，可以使用加热板或水浴加热培养基以帮助溶解（但不要过度加热培养基）。
5.3.8 从制备好的培养基中取一个代表性样本，并按照标准操作规程（SOP）测量其pH值。
5.3.9 如果pH值不在可接受范围内，使用1N盐酸或1N氢氧化钠溶液（调整量不超过制备体积的0.1%）来调整pH值，以确保灭菌后培养基的pH值仍在可接受范围内。
5.3.10 使用量筒或移液管将培养基分配到所需的玻璃器皿（试管、锥形瓶或瓶子）中。
5.3.11 使用不吸水的棉塞或合适的盖子封闭容器。对于需要通过罐体进行无菌测试的培养基，应使用橡胶塞封闭瓶子，并用铝封条密封。
5.3.12 按照经过验证的装载方式将准备好的培养基容器放入高压灭菌器中，并根据标准操作规程（SOP）在121°C下灭菌15分钟。对于不耐热的培养基，不需要进行高压灭菌，应按照制造商的说明通过加热或煮沸的方式进行灭菌处理。
5.3.13 完成后 灭菌卸下培养基容器，让液体培养基冷却。对于无菌琼脂平板的分装操作，请执行步骤5.5。
5.3.14 当灭菌后的培养基冷却至室温后，从每个培养基批次中取一个容器，按照标准操作规程（SOP）进行pH值测量。对于琼脂平板，应在琼脂凝固后使用平探针电极进行pH值测定。
5.3.15 将所有详细信息记录在介质制备记录中。
5.4 阿伽培养基的分发
5.5.1 在琼脂培养基灭菌后，让其冷却至约45至50°C。如果需要用于倾注平板法，应将烧瓶置于50至60°C的水浴或培养箱中保存，直至使用。请勿长时间保存培养基，也不要重新熔化培养基。5.5.2 按照操作规程，通过使用生物安全柜（BSC）来准备用于分装的琼脂培养基。 层流空气（LAF）标准操作规程将所需的无菌培养皿排列在生物安全柜（BSC）或层流洁净室（LAF）内。
5.5.3 如果培养基需要添加任何补充剂，请向每个培养瓶中加入所需量的补充剂，然后轻轻摇晃以确保补充剂均匀混合。
5.5.4 90毫米培养皿的制备：将约20毫升培养基无菌倒入无菌培养皿中，然后在室温下让培养基固化。
5.5.5 制备55毫米接触平板：在无菌条件下，将琼脂培养基轻轻倒入无菌接触平板中，使琼脂表面形成凸起的形状。确保培养基不会从平板中溢出。让平板在室温下固化。
5.5.6 M空气采样器的试剂盒制备：将约15毫升培养基无菌倒入75毫米的无菌试剂盒中，然后在室温下让培养基平板固化。
5.5.7 在琼脂完全固化后，收集培养皿，并使用铝箔将它们按适当的数量堆叠起来进行包装。
5.5.8 准备斜面培养基：将含有琼脂培养基的试管放置成倾斜状态，以形成适当的斜面。让斜面在室温下固化。
5.5.9 在培养基固化后，使用代表该批次的平板/容器，用平头探针测量其pH值。
5.5.10 在介质制备记录中填写详细信息。
5.5 培养基的预孵育
5.5.1 琼脂培养基的预培养
5.5.1.1 将所有琼脂培养基平板的100%在30–35°C下预培养48小时，但以下情况除外：- 专用于真菌和酵母的培养基（Sabouraud Dextrose Agar），需在20–25°C的温度下培养48小时。
- 新鲜制备并使用的培养基，或者用于平板接种的培养基；在这种情况下，必须保留阴性对照平板。
- 板/盖子破损
- 体积减少，出现脱水/裂纹，以及颗粒或气泡过多。
- 微生物污染
- 在55毫米接触板的情况下，会出现凸起的表面。
5.5.1.4 微生物污染的验收标准：受污染的平板数量不得超过制备的平板总数的5%。如果观察到的受污染平板数量超过5%，则应废弃该批次产品，并进行调查。
5.5.1.5 如果预培养的结果令人满意，将培养皿重新包装后投入使用。按照推荐的条件储存这些培养皿。
5.5.2 液体培养基的预培养
5.5.2.1 如果批次规模小于50个容器，则需预培养至少2个容器；如果批次规模大于50个容器，则需预培养4个容器。这些容器装有制备好的培养基，在30至35°C的温度下培养48小时，但5.5.1.1中规定的情况除外。5.5.2.2 接受标准：代表该批次的预培养容器中不应观察到任何污染现象。如果发现污染，则应丢弃该批次产品，并重新进行……（后续操作未在文本中提供）。 调查；审查 应当进行。
5.5.2. 如果预培养的结果令人满意，则可以放行该培养基投入使用。将培养基储存在推荐的条件下。
5.6 培养基的无菌检查
5.6.1 无菌状态；无菌性 **琼脂平板检查：** 在完成培养基的预培养后，如果批次数量少于100个平板，则需培养2个平板；如果批次数量超过100个平板，则需培养5个平板，且培养条件应符合预定的测试温度及最长的测试时间。例如，大豆酪蛋白消化琼脂平板应在30–35°C下培养5天，沙氏葡萄糖琼脂平板应在20–25°C下培养5天。对于生化培养基和选择性培养基，则需在30–35°C下培养3天。5.6.2 液体培养基的无菌检查：完成培养基的预培养后，将用于预培养的容器在规定的培养温度下进行培养，直至测试的最长时间。例如，大豆酪蛋白消化培养基应在20–25°C下培养14天，液体硫糖胶培养基应在30–35°C下培养14天。对于生化培养基和选择性培养基，则应在30–35°C下培养3天。
5.6.3 接受标准：不应观察到任何污染或微生物生长现象。如果发现任何生长或污染情况，必须进行调查。
5.6.4 在培养基制备记录中填写测试详细信息。
5.7 生长促进试验和抑制性质试验
5.7.1 对每一批制备好的培养基以及即用型培养基，均需进行促生长试验和抑菌性试验（针对选择性培养基）。5.7.2 应使用哪些微生物，每种培养基的培养条件及验收标准是什么，必须按照规定执行。
5.7.3 使用按照规定方法制备的标准接种物。 培养物接种液的制备标准操作规程.
5.7.4 固体培养基的促生长试验
5.7.5.1 将每种指定微生物接种10至100 CFU（菌落形成单位），每种微生物接种两份样本，分别采用倾注平板法或涂布平板法进行接种。然后在规定的条件下进行培养。5.7.5.2 在培养完成后，统计回收到的菌落数量。
5.7.5.3 接受标准
5.7.5.3.1 通用琼脂培养基：应在规定的时间内观察到菌株生长，且回收的菌落形成单位（CFU）数量与标准化接种物的计算值相比，差异不应超过2倍。回收；恢复；复苏；挽回 （含量在50%到200%之间。）
5.7.5.3.2 选择性培养基和鉴别培养基：应在规定的时间内观察到特征性或指示性的生长现象。
5.7.5 液体培养基的促生长试验
5.7.5.1 将每种指定微生物接种10至100 CFU（菌落形成单位），每种微生物接种两份样本，并在规定的条件下进行培养。5.7.5.2 在培养完成后，观察是否有生长现象。
5.7.5.3 接受标准：在规定的时间内，应观察到清晰可见的（浑浊的）生长现象。选择性培养基和鉴别培养基应显示出特征性或指示性的生长结果。
5.7.6 选择性/鉴别培养基的抑菌性测试
5.7.6.1 对每种指定的微生物至少接种100个菌落形成单位（CFU），每个菌种接种两份样本，并在规定的条件下培养至少规定的时间。5.7.6.2 在培养完成后，观察是否有生长现象。
5.7.6.3 接受标准：不应出现指定微生物的生长。
5.7.7 在培养基制备记录中填写测试详细信息。
5.8 制备好的培养基的标签标注与储存
5.8.1 为每批培养基分配批次编号，格式为 ABCXXX，其中 ABC 代表培养基的唯一三位字母代码，XXX 代表每年从 001 开始的批次编号。5.8.2 例如，每年制备的第一批亚硫酸铋琼脂的批号为 BSA001。
5.8.3 在准备好的培养皿或试管的包装或支架上标注以下详细信息：
媒体名称：
制备日期：
在有效期内使用。
签名：
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6.0 缩写词
6.1 标准操作规程（Standard Operating Procedure）6.2 LAF - 层流空气
6.3% - 百分之六点三
6.4 °C - 摄氏度
6.5 克
6.6 ml - 毫升
6.7 CFU - 菌落形成单位