1.0 目的
制定用于检测待测材料中细菌内毒素（LAL）的试验程序。2.0 范围
适用于质量控制部门。3.0 责任
微生物学家4.0 责任追究
部门主管5.0 程序
5.1 在LAL（乳酸杆菌计数）测试过程中需采取的预防措施
5.1.1 检查 triobloc 的校准状态。
5.1.2 在将样品管放入孔中之前，请先检查 triobloc 的温度，其温度应保持在 37±1°C。
5.1.3 所有准备投入使用的玻璃器皿/配件都必须具备无内毒素质量的相应认证。
5.1.4 仅允许使用经过去热原处理的玻璃器皿进行该测试。
5.1.5 控制标准内毒素的储存与复溶过程 **溶菌液** 应遵循制造商的建议。
5.1.6 所有用于测试的试剂都必须在其有效期范围内。
5.1.7 在复溶过程中不要使用涡旋混合器来处理裂解液；请轻轻摇晃以充分混合。
5.2 玻璃器皿的去热原处理
5.2.1 LAL反应管/稀释管/配件的去热原处理
5.2.1 LAL反应管/稀释管/配件的去热原处理
5.2.1.1 撕下一块足够大的铝箔，将其折叠后用来覆盖需要包裹的试管/配件的数量。 无热原.
5.2.1.2 将准备好的试管/配件放在铝箔纸上，然后用铝箔纸将试管/配件完全包裹起来。
5.2.1.4 之后；随后 去热原处理 完成试管/配件的卸载后，检查包装；确保铝箔袋没有破损。 如果发现管子或配件有破损或渗漏，需要重新包装它们。 并进行去热原处理。
5.2.1.5 或者，已经过去热处理的试管/配件（可直接使用）也可以直接使用。
5.3 最大值的计算 有效的；合法的；经过验证的 稀释；冲淡 （MVD）和最低有效浓度 （MVC）
对于原材料，采用 MVC（Material Verification Control）管理方式。 = λ （欧盟）/ 毫升
EL（欧盟单位）/ 毫克（mg）
对于成品，MVD = EL 产品的效力；产品的活性
λ （欧盟）/ 毫升
对于成品，MVD = E.L.C.
λ
然而，
EL = 产品各专论中规定的内毒素限度值 欧盟/毫升（EU/ml）或欧盟/毫克（EU/mg）。
产品的效力；产品的活性 = 制剂的浓度，单位为毫克/毫升（mg/ml）
λ = 裂解产物的标记敏感性（Labelled sensitivity of lysate）。
E.L.C. = 内毒素限浓度：在药品专论中规定，以指定体积（ml）的产品计。
如果产品的细菌内毒素限度没有规定，或者对于新产品而言，应按照以下方法计算细菌内毒素限度：
内毒素限度 = K
M
K = 5.0 EU/kg for **注射制剂** （对于通过鞘内注射给药的药物，剂量为0.2 EU/kg。）
M = 最大人体剂量（毫克/千克/小时）
5.4 LAL试剂的复溶及储存条件。
5.5.1 按照制造商的指示储存冻干裂解物。
5.5.2 按照制造商提供的说明，使用 LAL 试剂水（LRW）重新配制裂解液。
5.5.3 复溶后的裂解物可按照制造商的指示进行储存。
5.5.4 复溶后的裂解物仅可冷冻和解冻一次后使用（请按照制造商的说明操作）。
5.5 受控标准内毒素（CSE）的复溶方法及储存条件。
5.5.1 根据制造商的说明，使用注射用水（LRW）重新配制CSE（化合物或溶液），并使用涡旋器搅拌指定的时间。
5.5.2 复溶后的CSE可以根据制造商规定的温度/时间要求进行储存。
5.5.3 在使用前，将 CSE 离心机旋转至少 5 分钟；同时，将用于检测内毒素的样品也必须旋转至少 1 分钟。
使用前最后一分钟，以及静置十分钟后。
5.6 确认 LAL 试剂的标示灵敏度。
5.6.1 用蒸馏水（LRW）稀释CSE，直至浓度达到2。λ, λ, λ/2, λ内毒素浓度为4 EU/毫升，或采用任何合适的稀释步骤。
5.6.2 增加100 微升（microliter） 将每种内毒素浓度加入标记为“2”的相应试管中。λ, λ, λ/2, λ/4. 为每个浓度准备四套样品。
5.6.3 增加100 每支试管中加入 µL 的裂解液。
5.6.4 对于阴性对照品，应添加100个单位（或样本）。 将 µL 的 LRW 加入试管中，然后加入 100 0.1 µL的裂解物。
5.6.5 轻轻摇晃每个试管，然后将其插入保持在37℃的三联块中。请提供需要翻译的英文术语/短语/句子。 C ± 将温度设置为1°C，然后孵育60分钟。 ± 2分钟
5.6.6 培养完成后，将试管从培养箱中取出，轻轻倒置180°观察结果：如果是阳性反应，则显示为阳性结果；如果是阴性反应，则显示为阴性结果。
5.6.7 如果形成的凝胶在180°翻转后仍能保持其完整性，则说明检测结果为阳性。
5.6.8 如果试管中未出现明显的凝胶现象，或者浊度或粘度有可见的增加，则报告结果为“阴性”。
5.6.9 记录下实验结果。确定阳性结果的最低浓度，这个浓度就是终点（endpoint）。同时，也要确定对数终点（log endpoint）。
5.6.10 按照以下方法计算几何平均值：
几何平均值 = **反対数（Antilog）** Ʃ
由于您提供的内容“f”是一个字母，没有具体的含义或上下文，我无法为您翻译它。请提供更多的信息或上下文，以便我能够为您提供准确的翻译。
Ʃ = 对数终点之和 f = 重复次数
5.6.11 当终点值的几何平均值在标签声明的灵敏度的0.5λ到2λ之间时，标签声明通过验证。记录结果。
5.7 测试程序
注意： 在遇到任何干扰因素的情况下，样品的制备应通过使用酸、碱或适当的物质进行pH值调整来完成。 缓冲区；缓冲溶液在处理粘稠产品时，需要使用分散剂；对于对试剂要求较高的情况，则应使用更敏感的试剂。
5.7.1 样品应按照要求进行稀释/制备，然后使用同一份样品进行进一步的检测。
5.7.2 50:50 方法
详细信息；详情
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测试溶液
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LRW
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C.S.E
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**裂解物**
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阴性对照品（NC）
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100微升
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100微升
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||
不合格产品控制（Negative Product Control, NPC）
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50微升
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50微升
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100微升
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阳性产品对照（Positive Product Control, PPC）
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50微升
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50微升（4λ）
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100微升
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阳性空白对照（Positive LRW control）
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50微升
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50微升（4λ）
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100微升
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NA: 不适用 µL：微升 LRW: LAL试剂水
5.7.3 热冲击法
详细信息；详情
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测试溶液
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LRW
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C.S.E
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**裂解物**
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阴性对照品（NC）
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100微升
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100微升
|
||
不合格产品控制（Negative Product Control, NPC）
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100微升
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100微升
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阳性产品对照（Positive Product Control, PPC）
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100微升
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10微升（20λ）
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100微升
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阳性空白对照（Positive LRW control）
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100微升
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10微升（20λ）
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100微升
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5.7.4 如5.7.1和5.7.2节所述，可以添加相应的试剂；或者，也可以添加任何合适的组合。
5.7.5 在将每个试管放入三联块（triobloc）之前，轻轻摇晃每个试管。
5.7.6 将试管插入保持在37°C的三联块中。 ± 在1°C的温度下孵育60分钟。 ± 2分钟。
5.7.7 孵育完成后，将试管从培养箱中取出，轻轻倒置180°观察结果。
5.7.8 如果形成的凝胶在180°翻转后仍能保持其完整性，则结果为阳性。
5.7.9 管子：如果管内没有形成牢固的凝胶，或者出现明显的浑浊度增加，则表示…… 粘度这些结果均被报告为阴性。
5.7.10 记录观察结果。
5.8 验证
5.8.1 根据规定，每种产品应进行3批次的验证。 验证方案验证工作应按照验证方案的要求进行。
5.8.2 验证结果视为合格，当两个系列的内毒素检测结果以及内毒素与溶菌液（LRW）的比值均不低于标签上声明的灵敏度（0.5λ）且不超过该灵敏度的两倍（2λ）时（根据验证方案要求）。
5.9 结果的解释
5.9.1 如果NPC管中的结果为阴性，且PPC管中的结果为阳性，则该产品符合LAL测试的要求。 阳性对照（PC）应在两个试管中均显示阳性结果，阴性对照（NC）也应在两个试管中均显示阴性结果。
5.10 仪器使用细节应记录在标准操作规程（SOP）中。6.0 缩写
6.1 标准操作规程（Standard Operating Procedure）
6.2 EU - 内毒素单位
6.3 EL - 细菌内毒素限度
6.4 NC - 阴性对照
6.5 MVD - 最大有效稀释度
6.6 MVC - 最大有效浓度
6.7 ELC - 细菌内毒素限度浓度
6.8 LRW - LAL试剂用水
6.9 CSE - 控制标准内毒素
6.10 GM - 几何平均数（Geometric Mean）
6.11 NPC - 负产品控制（Negative Product Control）
6.12 PPC - 阳性产品对照（Positive Product Control）
6.13 PC - 阳性对照