1.0 所需设备
LAF歧管支架组件
真空泵。
剪刀
所需材料 2.0
样品无菌0.45微米膜过滤器
无菌冻干粉（Sterile Freeze-Dried Powder）
无菌SCDM
无菌0.1%（重量/体积）蛋白胨水。
70%无菌异丙醇溶液。
燃气燃烧器
无菌过滤装置
无菌SCDA平板
无菌拭子
3.0 所需的公用设施
真空泵4.0 程序：
4.1 膜过滤法
4.1.1 制剂样品的采集：按照标准操作规程（SOP）采集用于无菌检测的样品。从每批样品中随机选取20件样品（符合药典要求），分别用于低体积注射剂（LVP）和高体积注射剂（SVP）的无菌检测。 终端灭菌产品 以及无菌灌装的产品。4.1.2 中间体样品的采集：从LVP瓶包装机中随机收集16个预先灭菌的瓶子样品进行无菌检测（在更换新产品时，需分别采集第一批生产的16个瓶子样品），确保每个瓶子样本能够代表瓶包装机模具中的每个腔室。
4.1.3 将样品转移到QC部门，并使用干净的塑料箱进行包装运输。
4.1.4 用拭子单独擦拭每个样品部件。 70%异丙醇溶液 将样品放入标有“产品名称”、“批号”和“批次号”的干净不锈钢托盘内，然后通过洁净区域将样品转移至无菌室。 **传递箱（Pass Box）** 用于执行无菌检查。
4.1.5 按照要求准备培养基试管（FTM和SCDM）。 培养基制备的标准操作规程（SOP）将100-100毫升的培养基分装到试管中并封口。按照规定，将培养基在121ºC和15 psi的压力下进行20分钟的高压灭菌处理。 《高压灭菌法用于培养基灭菌的标准操作规程》.
4.1.6 在高压灭菌后，需在试管上标注培养基的名称和培养基批次号。随后将培养基试管在适当的温度下进行预培养：SCDM试管在20至25ºC下培养，FTGM试管在30至35ºC下培养24至48小时，之后再进行无菌处理。
4.1.7 高压灭菌包布、不锈钢杯、容器、剪刀和镊子应放在……中。 不锈钢 根据标准操作规程（SOP），将容器在121ºC的温度和15psi的压力下加热30分钟。
4.1.8 经过灭菌处理后，将内容物冷却，并使用无菌容器在无菌条件下转移到已清洁的传递箱中。
5.4.1.9 将预培养的无菌培养基试管、SCDA平板、无菌拭子、已灭菌的歧管以及0.1%（重量/体积）蛋白胨水通过传递箱转移到无菌检测室。
4.1.10 按照规定进入无菌室。 无菌室进出程序的标准操作规程（SOP）.
4.1.11 按照LAF操作规程（SOP）启动LAF设备。
4.1.12 用70%的异丙醇溶液擦拭所有需要检测无菌性的样品。
4.1.13 在开始无菌检查之前，根据标准操作规程（SOP），将SCDA培养板放置在测试过程中规定的位置。
4.1.14 使用管道将过滤歧管支架组件与不锈钢储液罐正确连接，并将经过灭菌处理的不锈钢滤杯放入下方的无菌容器中。 层流空气装置检查工作用层流柜（LAF）的压力表读数，并同时监测温度。 湿度 属于无菌室（或无菌生产区域）的
4.1.15 工作状态下的 LAF（层流过滤）腔室压力应通过压力计读取，其数值应在 08 至 15 毫米水柱（mmH2O）之间。无菌室的温度应保持在 27ºC ± 2ºC 的范围内。
4.1.16 打开真空泵，但使用安装在各个歧管支架底座上的真空控制键来关闭歧管支架组件的真空状态。接下来，放入0.45毫升的无菌液体。 膜过滤器 使用无菌镊子，在过滤杯和接收容器之间操作。
4.1.17 向过滤器支架中加入约15毫升灭菌后的液体A（0.1%蛋白胨水），然后利用真空条件对液体进行过滤。
4.1.18 使用无菌不锈钢刀片在燃气燃烧器前切割瓶子/小瓶或安瓿的尖端，然后立即将LVP（低体积注射剂）的至少一半内容物以及SVP（高体积注射剂）的小瓶内全部内容物转移到膜过滤器上。
4.1.19 立即使用真空过滤溶液，并用100毫升灭菌的液体A清洗膜三次（如果使用的是注射用无菌水，则无需用液体A清洗）。
4.1.20 完成过滤后，使用歧管真空控制键停止歧管的真空状态。
4.1.21 使用无菌镊子小心地提起膜过滤器，用无菌不锈钢剪刀将其无菌地切成两半，然后将其中一半转移到FTM管中，另一半转移到SCDM管中（仅在气体燃烧器前断开连接）。
4.1.22 在每个试管上标注产品名称、批号、检测日期、完成日期以及检测人员姓名。
4.1.23 同时准备一个阴性对照：取100毫升0.1%蛋白胨水（而非产品样品）进行过滤处理，用无菌手术剪将滤膜切成两半，将其中一半转移到FTM培养基中，另一半转移到SCDM培养基中。然后将两个试管都标记为“阴性对照”。
4.1.24 在进行无菌操作时，同时准备一个对照样品：取两支试管，一支装有SCDM（无菌挑战物质），另一支装有FTM（无菌测试介质）。拔掉试管的棉塞，将其置于LAF（层流洁净室）中暴露于无菌环境中。无菌操作完成后，重新插上棉塞，然后将这两支试管作为对照样品进行培养。
4.1.25 在完成工作交接后，将所有接种过的培养基通过传送装置转移至微生物分析部门，同时将所有设备和暴露过的培养板也转移至该部门进行微生物分析。
4.1.26 按照《无菌室进出规程》（SOP）中规定的退出程序，立即离开无菌区域。
4.1.27 将FTM管在30ºC至35ºC的温度下孵育14天，将SCDM管在20ºC至25ºC的温度下孵育14天。
根据相关法规，最终灭菌产品的培养（孵育）时间不得少于7天，而无菌灌装产品的培养时间不得少于14天。如果产品符合美国药典（USP）或欧洲药典（BP）的标准，那么无论是最终灭菌产品还是无菌灌装产品，培养时间都应为14天。
4.1.28 按照标准操作规程（SOP）启动微生物分析实验室的工作流程，通过无菌操作将10至100个菌落形成单位（cfu）的S. aureus NCIM 2079、P. aeruginosa NCIM 2200、B. subtilis NCIM 2063以及环境菌株EF - 1接种到FTM培养基管中，制备四支阳性对照管。同样地，分别将约10至100个细胞接种到C. albicans NCIM 3471、A. niger NCIM 1196以及环境菌株EF - 2中，制备三支SCDM阳性对照管。将FTM阳性对照管置于30–35ºC下培养3天，SCDM阳性对照管置于20–25ºC下培养5天。
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4.2 结果的观察与解读
4.2.1 在实验期间，每天对培养基试管进行目视检查，直至实验结束，以观察是否有微生物生长的宏观迹象。4.2.2 如果在任何试管中均未观察到生长现象，则表明该制剂符合无菌测试的要求。
4.2.3 该测试结果无效，除非阴性对照在培养结束时仍呈阴性，且阳性对照在规定的培养时间内显示出生长现象。
4.2.4 在FTM和SCDM试管中确认出现生长后，销毁所有阳性对照样本（通常在24至48小时内会观察到生长现象）。
4.2.5 如果在任何试管中发现微生物生长的迹象，应按照相关要求调查其失败的原因。 无菌检查失败调查的标准操作规程如果调查报告认定该测试结果无效，需使用20个样品重新进行测试。
4.2.6 如果重复检测中没有发现微生物生长的迹象，则所检测的产品符合无菌测试的要求；如果重复检测中发现了微生物生长的迹象，则所检测的产品不符合无菌测试的要求。
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5.0 注意事项
5.1 在将样品瓶/小瓶转移到无菌室之前，应使用过滤后的70%异丙醇（IPA）进行彻底擦拭；在无菌室内进行操作之前，同样需要再次使用过滤后的70% IPA擦拭这些容器。此外，孵化箱（hatch box）也应用过滤后的70% IPA溶液进行清洁。5.2 所有用于无菌操作或无菌室内的材料都必须经过适当的高压灭菌处理。
5.3 在使用无菌加热切割刀片切割样品瓶/小瓶之前，应先在燃气燃烧器前适当加热瓶子/小瓶的瓶口部分。
5.4 在完成无菌操作后，立即清洁废液储存容器，并用经过过滤的70%异丙醇和无菌拖把擦拭容器的外表面。
6.0 频率
对于低分子量注射液（LVP）——按批次（Lot wise）处理。对于高级副总裁（SVP）而言——按批次进行
7.0 缩写
标准操作规程（SOP）IPA：异丙醇
SVP: 小容量注射剂
LVP：大容量注射剂
FTM：流体硫糖胶培养基
SCDM：大豆酪蛋白消化培养基