1.0 目标
制定人员手部拭子采样及后续微生物负荷分析的程序。2.0 范围
本标准操作规程（SOP）适用于所有在取样、配药及生产过程中直接接触原材料和成品的部门人员。3.0 责任
微生物学家4.0 责任制
质量保证高级经理5.0 程序
5.1 棉签的制备
5.1.1 取约2克吸水棉，将其缠绕在玻璃棒的一端。5.1.2 将该拭子转移到一个带有刻度的、带塞子的试管中，试管内预先装有5毫升蒸馏水。
5.1.3 通过高压灭菌进行灭菌处理。 在15磅的压力下（121ºC），持续15分钟。
5.1.4 将已灭菌的拭子带到采样区域。
5.2 手掌擦拭采样
5.2.1 取出无菌棉签，将其浸入无菌蒸馏水中，然后擦拭被检查者的手掌。每个手掌需擦拭5×5平方厘米的区域，擦拭方向应保持单向，避免来回移动。5.2.2 将拭子更换到含有10毫升无菌蛋白胨水的试管中。
5.2.3 轻轻摇晃试管，然后让其静置。 站立15分钟.
5.2.4 从试管中取出拭子，按照以下方法对蛋白胨水进行总微生物计数、大肠杆菌（E.coli）和沙门氏菌（Salmonella）的检测分析。
相关： 拭子样本采集标准操作规程
5.3 总微生物计数
5.3.1 取四个无菌培养皿，将1毫升样品无菌地转移到每个培养皿中。5.3.2 向上述两个培养皿中各加入20毫升无菌的、熔化的大豆酪蛋白消化琼脂（Soybean Casein Digest Agar），冷却至40-45ºC，然后让其凝固。
5.3.3 向另外两个培养皿中加入20毫升无菌的、熔化的Saborauds琼脂（温度控制在40-45ºC之间），然后让其凝固。
5.3.4 将大豆酪蛋白消化琼脂平板在30-35ºC下培养5天（用于细菌计数），将Saborauds琼脂平板在20-25ºC下培养5天（用于真菌计数）。
5.3.5 在培养期结束时，统计形成的菌落数量并报告结果。
5.4 大肠杆菌检测
5.4.1 将1毫升样品转移到50毫升无菌营养肉汤中，然后在37ºC下培养24小时（富集培养I）。5.4.2 将1毫升的富集培养液I转移到含有5毫升无菌Mac Conkey肉汤的试管中，并加入一个倒置的Durham管，然后在35-37ºC下培养48小时。
5.3.3 如果观察到酸的产生和气体的释放（试管内容物变黄，并且在Durhams试管中看到气泡），则需要进行二次测试。
5.4.4 如果没有观察到酸和气体的产生，则该测试结果符合大肠杆菌不存在的要求。
5.4.5 在二次测试中，将1毫升一次测试的样品加入以下培养基中： a) 一个含有5毫升无菌麦康凯培养基的无菌试管中，并加入一个倒置的杜汉姆管（Durham tube）； b) 5毫升蛋白胨水（Peptone Water）中。
5.4.6 将试管在43.5º至44.5º的温度下孵育24小时，并分别检查试管a)是否产生酸和气体，以及试管b)是否产生吲哚。
5.4.7 为了检测吲哚的存在，加入0.5毫升Kovac试剂，充分摇匀后静置1分钟；如果试剂层出现红色，则说明含有吲哚。
5.4.8 在第二次测试中检测到酸、气体以及吲哚的存在，表明存在大肠杆菌（E. coli）。
相关： 不同类型的培养基
5.5 沙门氏菌检测
5.5.1 将1毫升的富集培养液I转移到两个无菌试管中，每个试管中分别加入10毫升的Selenite F培养基和Tetrathionate Brilliant Green Bile培养基。5.5.2 将试管在36-38ºC的温度下孵育24小时。
5.5.3 从试管中取出一环培养物，接种到以下任意两种培养基上：i. 硫酸铋琼脂（Bismuth Sulphite Agar）；ii. 果糖-赖氨酸-脱氧胆酸盐琼脂（Xylose Lysine Deoxycholate Agar）；iii. 荧光绿琼脂（Brilliant Green Agar）；iv. 脱氧胆酸盐-柠檬酸盐琼脂（Deoxycholate Citrate Agar），然后在36-38ºC下培养24小时。
5.5.4 寻找典型的沙门氏菌菌落特征……
5.5.5 如果没有一种菌落符合描述要求，那么该测试结果可判定为“无沙门氏菌存在”。
5.5.6 如果观察到符合表1描述的菌落，则需要进行二次测试。
5.5.7 对于第二次检测，需对典型的沙门氏菌菌落进行传代培养： (a) 在三糖铁琼脂斜面上进行传代培养，首先将菌种接种在斜面表面，然后进行穿刺接种； (b) 将菌种接种到含有5毫升尿素肉汤的试管中。
5.5.8 将接种后的培养基在36-38ºC下培养24小时。
5.5.9 如果在穿刺培养中产生酸和气体（无论是否伴随黑色物质），且TSI斜面表面没有酸味，这表明存在沙门氏菌。
5.5.10 如果尿素培养基中没有出现红色，说明存在沙门氏菌。