1.0 目的
制定水分析的程序。2.0 范围
适用于水系统的所有取样点。3.0 责任
微生物学家4.0 责任制
部门负责人5.0 程序
按照水样采集的标准操作规程（SOP）进行采样，并根据相关规范对水样进行化学和微生物参数的分析。5.1 化学分析
准备用于化学分析的溶液/试剂。5.1.1 描述
对水质进行目视检查，包括观察其颜色和气味。5.1.2 硬度
取100毫升样品，加入2毫升…… 氨水缓冲液，pH值为10.0加入50毫克的mordant black 11混合物，并加入0.01摩尔的乙二酸钠，直到产生纯蓝色。测量所使用的乙二酸钠的体积，然后根据以下公式计算硬度。
硬度（以 mg/L 表示）= 使用的 EDTA 溶液的体积（ml）× 1000 mg/L
样品体积
5.1.3 总悬浮固体（Total Suspended Solids, TSS）
将坩埚清洗干净并晾干，然后在105°C的烤箱中烘烤一小时。将坩埚放入干燥器中冷却后，称量其空重。接着，使用适当的过滤方法从坩埚中过滤出30毫升的水样。 真空泵 并利用该公式计算总固体含量（Total Solid Content, TSS）。
TSS = W2-W1 × 1000（mg/L）
取了**毫升**的溶液。
W1 过滤前Gouch坩埚的重量
W2 过滤后高奇坩埚的重量
5.1.4 总溶解固体（Total Dissolved Solids, TDS）
使用经过校准的电导率仪在25°C下测量电导率，并根据以下公式将测量结果转换为总溶解固体（TDS）的含量。
TDS（总溶解固体）以 mg/L 为单位时，其计算公式为：电导率（mS）× 0.667（地理面积修正系数）。
5.1.5 酸度
取10毫升新鲜煮沸并冷却后的样品，加入0.05毫升…… 甲基红溶液 将……混合后，得到的溶液颜色不是红色的。
结果解读：如果溶液呈现红色，说明样品呈酸性。
5.1.6 碱度
取10毫升新鲜煮沸后冷却的样品，加入0.1毫升溴百里酚蓝溶液，然后混合均匀。
结果解读：如果溶液呈现蓝色，说明样品呈碱性。
5.1.7 氨（Ammonium）
取20毫升样品，加入1毫升碱性碘化汞钾溶液，静置5分钟。从垂直方向观察时，溶液的颜色不应更深（即不应呈现更明显的红色或紫色）。 彩色的；有颜色的 该溶液的纯度高于通过以下方法制备的溶液：向含有2.5毫升稀释氯化铵溶液和7.5毫升待检测液体的溶液中，加入1毫升碱性碘化汞钾溶液。
5.1.8 钙与镁
取100毫升样品，加入2毫升pH值为10.0的氨缓冲液、50毫克mordant black 11混合物以及0.5毫升0.01摩尔的乙二酸钠溶液，最终呈现纯蓝色。 颜色 该制剂是按照药品生产质量管理规范（GMP）的要求生产的。
5.1.9 重金属
在水浴中，将150毫升的样品在玻璃蒸发皿中蒸发至剩余15毫升。
标准溶液
将10.0毫升铅标准溶液（浓度为1ppm Pb）移入一个小型的内塞尔斯瓶（Nessler Cylinder）中。
测试溶液
用移液管吸取12毫升液体，注入一个小型的纳氏比色管中。
程序；步骤；操作规程
向装有标准溶液的圆筒中加入2.0毫升的测试溶液并混合。向每个圆筒中再加入2毫升pH值为3.5的醋酸盐缓冲液，混合后加入1.2毫升硫代乙酰胺试剂，静置2分钟后，在白色表面上观察：测试溶液产生的颜色不应比标准溶液产生的颜色更深。
5.1.10 氯化物
取10毫升样品，加入1毫升2摩尔/升的硝酸和0.2毫升0.1摩尔/升的硝酸银，溶液的颜色在至少15分钟内不会发生变化。
5.1.11 硝酸盐
在浸入冰块中的试管中取5毫升样品，加入0.4毫升10%（重量/体积）的氯化钾溶液和0.1毫升二苯胺溶液，然后边摇晃边逐滴加入5毫升硫酸。将试管转移到50°C的水浴中静置15分钟。如果溶液中出现蓝色，其颜色不得超过同时使用5.5毫升无硝酸盐水和0.5毫升硝酸盐标准溶液（2 ppm NO）混合液制备的溶液所呈现的蓝色强度。3).
5.1.12 硫酸盐
取10毫升样品，加入0.1毫升2摩尔/升的盐酸和0.1毫升氯化钡溶液。该溶液的外观在至少1小时内不会发生变化。
5.1.13 易氧化物质
取100毫升样品，加入10毫升1摩尔的溶液。 硫酸 加入0.1毫升0.02摩尔/升的高锰酸钾溶液，煮沸5分钟后，溶液应保持淡粉色。
5.1.14 蒸发残渣
将100毫升样品在热板上蒸发至干涸，然后在105°C下继续干燥至恒重。残留物的重量不得超过1毫克（0.001%）。
蒸发残渣：W2-W1 × 100 (mg/L)
取了……毫升的溶液。
W1 蒸发皿的重量
W2 蒸发皿重量 + 残留物重量
5.1.15 总有机碳（Total Organic Carbon）
分析样品中的总有机碳（Total Organic Carbon, TOC）含量。 校准后的总碳分析仪 按照标准操作规程（SOP）执行。
5.1.15.1 水系统中总有机碳的警戒限和行动限
S.No.
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水质类型
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警戒限（ppb）
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行动限（ppb）
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1
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纯化水
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300.0
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500
|
2
|
注射用水
|
250.0
|
500
|
3
|
纯蒸汽
|
250.0
|
500
|
5.1.15.2 如果目录（TOC）的结果超过了警戒限和行动限（alert and action limits），请按照标准操作规程（SOP）进行处理。
5.1.16 电导率
将100毫升样品置于合适的容器中，在温度保持在25°C ± 1°C的条件下搅拌该样品，然后使用经过校准的电导率仪测量其电导率。
温度以及相应的电导率。
温度（°C）
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电导率：µS·cm⁻¹ 1
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0
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0.6
|
5
|
0.8
|
10
|
0.9
|
15
|
1.0
|
20
|
1.1
|
25
|
1.3
|
30
|
1.4
|
35
|
1.5
|
40
|
1.7
|
45
|
1.8
|
50
|
1.9
|
55
|
2.1
|
60
|
2.2
|
65
|
2.4
|
70
|
2.5
|
75
|
2.7
|
80
|
2.7
|
85
|
2.7
|
90
|
2.7
|
95
|
2.9
|
100
|
3.1
|
5.1.17 pH值
取100毫升样品，加入0.3毫升饱和KCl溶液。充分混合后，使用pH计测量溶液的pH值。 校准过的pH计.
注意： 如果在水的化学分析中发现结果超出规定范围，请按照标准操作规程（SOP）进行处理。
5.2 微生物分析
根据规范要求，对水样进行微生物分析。
5.2.1 倾注平板法
将1毫升样品分装到两个培养皿中，然后向每个培养皿中加入大约15-20毫升的R溶液。2将平板计数琼脂倒入每个培养皿中。将培养基冷却至约45°C（用手背感受温度，应能忍受）。盖上培养皿盖，通过倾斜或旋转培养皿使样品与琼脂充分混合，然后让混合物在室温下固化。将培养皿倒置后，置于30-35°C下培养5天。培养结束后，观察培养皿中的菌落生长情况，计算两个培养皿中的菌落数量，并以每毫升培养基中的菌落形成单位（CFU）表示平均值。
相关： 用于培养真菌和细菌的常见培养基的孵育条件
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5.2.2 膜过滤技术
该程序规定使用一次性/可高压灭菌的过滤漏斗和过滤架，并采用MILLIFLEX系统。
过滤装置的准备
操作；运行；实施 按照 Milliflex 的标准操作规程（SOP）执行。按照规格要求，使用规定的样品量通过0.45微米过滤器进行过滤。
样品过滤完成后，用100毫升无菌水冲洗过滤器，然后用灭菌镊子取出过滤器，并立即将其转移到预先准备好的含有适当培养基的培养皿中。2琼脂计数平板。
将……放置于适当的位置。 膜过滤器 请小心操作，确保空气不会滞留在过滤器内部，因为这会阻碍营养培养基接触到整个膜表面。然后更换盖子。将平板（如果使用了过滤器的话）以直立状态置于30-35°C的温度下培养5天。之后计算膜上的菌落数量，并按照规定格式报告结果。
5.2.3 细菌内毒素检测
参考 细菌内毒素检测的标准操作规程（SOP）.5.2.4 病原体
该样品将接受以下四种特定病原体的检测。
(A) 沙门氏菌属
(B) 大肠杆菌
(C) 铜绿假单胞菌
(D) 金黄色葡萄球菌
将100毫升水样通过安装在Milliflex系统上的0.45微米膜过滤器进行过滤。过滤完成后，需无菌地取出过滤器，将其放入100毫升大豆酪蛋白消化培养基中，并在30-35°C的温度下培养24-48小时。
从大豆酪蛋白消化培养基中，取10毫升培养基，使用1毫升已接种的富集肉汤进行接种。
1. 硒代半胱氨酸肉汤（用于……） 沙门氏菌属.
2. 用于……的四硫代硫酸钠培养基 沙门氏菌属（Salmonella species）
3. MacConkey’s Broth 用于 大肠杆菌
4. 用于……的西曲米德培养基 铜绿假单胞菌
5. 吉奥利蒂·坎托尼培养基（Giolitti Cantoni Broth）用于 金黄色葡萄球菌 （在厌氧条件下使用无菌液体石蜡。）
将试管在30-35°C的温度下孵育24-48小时。
(A) 检测沙门氏菌属菌种：
如果在硒代半胱氨酸肉汤（Selenite Cystine Broth）和四硫代硫酸盐肉汤（Tetrathionate Broth）中观察到菌落生长，应将这些培养液接种到相应的选择性培养基平板上，并在30-35°C的温度下培养24-48小时，以初步鉴定病原体。
中等；中度
|
菌落描述
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木糖-赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基
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红色，带或不带黑色中心
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亚硫酸铋琼脂培养基
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黑色或绿色的菌落
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亮绿琼脂
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小型、透明、无色或粉白色至白色的不透明物质（通常周围有一圈粉红色至红色的区域）
|
确认试验
从选择性培养基平板上挑选出疑似菌落，然后通过以下生化检测和培养基反应以及革兰氏染色反应进行确认性测试。
使用接种环先在 Triple Sugar-Iron Agar 斜面的斜线上划线，然后用接种直针在培养基底部进行穿刺，以单独转移可疑菌落。
在30-35°C的温度下孵育24-48小时。
培养结束后，检查三糖铁琼脂培养基试管中是否有微生物生长，并观察其以下物理特性。
(a) 斜面：碱性反应（呈现红色） 颜色)
(b) Butt: 酸性反应（黄色） 颜色）和/或气泡（可能伴有或不伴有黑色斑点）。
如果Triple Sugar Iron Agar培养基上出现生长，并且其物理特性符合上述描述，那么就可以判断存在沙门氏菌属（Salmonella species）。
(B) 检测大肠杆菌
如果接种了麦康凯培养基的试管出现酸性和气体生成现象，需将样本接种到以下选择性培养基平板上，并在30-35°C的温度下培养24-48小时，以初步鉴定病原体。
中等；中度
|
菌落描述
|
麦康凯琼脂（MacConkey’s Agar）
|
砖红色物质周围可能有一层沉淀的胆汁。
|
伊红美蓝琼脂（Eosin Methylene Blue Agar）
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带有深灰色菌落的金属光泽
|
确认试验
从选择性培养基平板上挑选出疑似菌落，然后进行后续的生化检测和革兰氏染色反应以确认其身份。
将含有酸和气体的试管中的0.1毫升内容物加入含有10毫升蛋白胨水的试管中。
使用蛋白胨和水培养基，按照以下步骤进行吲哚试验。
向蛋白胨水试管中加入0.5毫升Kovac试剂，静置一分钟；如果试剂层出现红色，则说明存在吲哚。
在麦康凯培养基、蛋白胨水和吲哚培养基中检测到酸和气体，表明存在大肠杆菌（Escherichia coli）。
大肠杆菌的存在应通过革兰氏染色（革兰氏阴性杆菌）来确认，并通过将一环菌液划线接种到麦康凯琼脂（MacConkey’s Agar）平板上，观察其在麦康凯琼脂和莱文-伊红-亚甲蓝琼脂（Levine Eosin Methylene Blue Agar）平板上是否产生酸和气体来进一步验证。
将平板在30-35°C的温度下培养24-48小时。
如果在培养后，平板上出现具有以下特征的菌落，则可确认存在大肠杆菌（Escherichia coli）。
麦康凯琼脂：培养后会出现砖红色菌落，菌落周围可能伴有或不伴有沉淀物。
Levine Eosin Methylene blue Agar：在反射光下呈现金属光泽的菌落，在透射光下呈现蓝黑色。
(C) 检测铜绿假单胞菌
如果接种了头孢美唑（Cetrimide）培养基的试管出现绿色或蓝绿色的菌落生长，那么需要将菌株接种到以下选择性培养基平板上，并在30-35°C的温度下培养24-28小时，以初步鉴定病原体。
中等；中度
|
菌落描述
|
**Cetrimide Agar**
|
绿色菌落，在紫外光下会发出绿色荧光。
|
铜绿假单胞菌琼脂（用于检测铜绿假单胞菌产生的蓝绿素）
|
无色至淡黄色；在紫外光下呈现淡黄色。
|
假单胞菌琼脂（用于荧光素检测）
|
无色至淡黄色，在紫外光下呈现淡黄色。
|
确认试验
从选择性培养基平板上挑选出疑似菌落，然后进行确认性测试。
使用接种环在假单胞菌琼脂（Pseudomonas Agar）上划线接种疑似菌落，以检测荧光素（Fluorescenin, PAF）；同时在另一种假单胞菌琼脂（Pseudomonas Agar）上划线接种相同菌落，以检测脓绿素（Pyocyanin, PAP）。将培养皿置于培养箱中培养。 **逆向状态** 在30-35°C的温度下培养24-28小时。同时将疑似菌落接种到100毫升的豆酪蛋白消化培养基中，并在41°至43°C的温度下培养18至24小时。
培养结束后，检查大豆酪蛋白消化培养基的平板和试管中是否存在具有以下特征的革兰氏阴性杆菌菌落：使用荧光素检测的假单胞菌琼脂（Pseudomonas Agar）进行检测。 无色的 在...下会呈现黄绿色荧光。 紫外光用于检测铜绿假单胞菌的假单胞菌琼脂：菌落呈绿色，并在紫外光下发出蓝色荧光。大豆酪蛋白消化培养基：细菌能够在此培养基上生长。
如果发现符合上述描述的菌落，应进行氧化酶测试以确认其身份，具体步骤如下：
使用接种环，将疑似菌落转移到浸有 N、N-二甲基-p-苯二胺二盐酸盐（N,N-Dimethyl-p-phenylenediamine dihydrochloride）的滤纸条或滤纸片上。
如果在五到十秒内出现粉紫色，就可以确认存在铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）。
(D) 检测金黄色葡萄球菌
如果在 Giolitti Cantoni (G.C) 培养基中观察到生长现象（通常表现为在厌氧条件下培养基底部出现黑色沉淀物），则需要将样品接种到以下选择性培养基平板上，并在 30-35°C 下培养 24-28 小时，以初步鉴定病原体。
中等；中度
|
菌落描述
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甘露醇盐琼脂培养基
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黄色菌落，周围有黄色圈带
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沃格尔-约翰逊琼脂培养基（Vogel Johnson Agar Medium）
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被黄色区域包围的黑色部分
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贝尔德-帕克琼脂培养基（Baird Parker Agar Medium）
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黑色、有光泽，周围环绕着2-5毫米宽的透明区域。
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确认试验
从选择性培养基平板上挑选出疑似菌落，然后进行确认性测试。
如果发现符合上述描述的菌落，则... **识别；鉴定** 应按照以下方法通过凝乳酶试验进行检测。
使用接种环，将可疑菌落分别转移到含有0.5毫升哺乳动物血浆（最好是兔血浆或马血浆）的试管中。
在37℃的水浴/培养箱中孵育。0将样品在3至24小时内培养，同时设置使用已知金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）菌株的阳性对照和仅使用血浆的阴性对照。
在3小时后以及之后的适当时间间隔内，检查是否出现凝固现象。
如果观察到任何程度的凝固现象，说明存在金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）。然后需要进行革兰氏染色，以确认是否存在革兰氏阳性球菌（gram Positive cocci）。
5.2.5 大肠杆菌菌落
过滤100毫升的测试样品，将过滤后的液体转移到M-Endo琼脂培养基上，并在35°C下培养22-24小时。计数那些呈现粉红色至深红色、表面带有绿色金属光泽的菌落；这种光泽的强度可以从微小斑点到完全覆盖整个菌落表面不等。报告每100毫升样品中的大肠菌群菌落数量。
5.2.6 测试完成后，需准备一份测试报告。
5.2.7 如果获得的计数结果超过了以下规定的限值。 调查结果。 并按照标准操作规程（SOP）采取必要的行动。
5.3 水系统中总氨（TAMC）的警戒限和行动限
S.No
|
水质类型
|
警戒限（Alert Limit）
|
行动限（Action Limit）
|
1
|
原水
|
300
|
500
|
2
|
软水
|
200
|
500
|
3
|
饮用水
|
150
|
500
|
4
|
饮用水
|
100
|
500
|
5
|
纯化水
|
50
|
100
|
6
|
注射用水（100毫升）
|
3
|
10
|
7
|
纯蒸汽
|
3
|
10
|
6.0 缩写词
6.1 标准操作规程（Standard Operating Procedure）6.2 M - 摩尔浓度
6.3 mg - 毫克
6.4 TSS - 总悬浮固体
6.5 TDS - 总溶解固体
6.6 ppm（百万分之6.6）
6.7 TOC - 总有机碳
6.8% - 百分之六点八
6.9 ° - 摄氏度
6.10 PAF - 含荧光素的假单胞菌琼脂培养基
6.11 PAP - 含铜绿假单胞菌的琼脂培养基
6.12 G.C - Giolitti Cantoni肉汤
6.13 TAMC - 总需氧菌计数
6.14 毫升