《无菌后促生长试验的标准操作规程》

1.0 目的

制定无菌检查完成后培养基进行促生长试验的程序。

2.0 范围

本标准操作规程（SOP）适用于在完成无菌处理后，对培养基进行无菌后促生长试验的操作。

3.0 责任

受过培训的微生物学家负责按照标准操作规程（SOP）进行测试，而部门负责人则负责确保所有操作均符合SOP的要求。

4.0 账户余额

部门主管

5.0 程序/步骤

5.1 频率

5.1.1 该测试必须每年对每个产品进行一次。
5.1.2 该测试应优先在较高剂量的制剂上进行；如果不需要对较低剂量制剂进行测试，则可以在较高剂量的制剂上进行。
5.1.3 如果三批产品的无菌检测需要在同一周内完成，可以同时检测这三批产品中的三组罐体。在这种情况下，应将罐体储存在25°C以下，直到检测开始。如果无法同时获得这三批产品，则可以分批进行检测：每次为每种培养基接种一种挑战菌株。

5.2 培养接种物

5.2.1 使用根据标准操作规程（SOP）制备的标准化接种物，针对每种培养基使用相应的微生物。
5.2.2 流动硫代葡萄糖酸盐培养基（FTM）： 5.2.4 除了上述微生物外，每种培养基还需使用一种环境分离株。
5.2.5 使用的接种物数量应为10至100 CFU（菌落形成单位）。

5.3 测试程序

5.3.1 完成后 无菌检查将介质罐放入生物安全柜中，并对附近的管路进行消毒。
5.3.2 在无菌注射器的帮助下，将10至100个菌落形成单位（CFU）的挑战微生物通过针头刺入容器管路中，接种到培养基中。
5.3.3 对于每种培养基，如果一次取三个批次样本，需重复上述步骤。如果只取了一组罐装样本，则根据5.2的要求，将一种微生物接种到SCM中，另一种接种到FTM中。在后一种情况下，接种的微生物种类应依次更换，以确保涵盖所有需要检测的微生物。
5.3.4 将罐体在相应的条件下进行培养：SCM 在 22.5 ± 2.5°C 下培养，FTM 在 32.5 ± 2.5°C 下培养，培养时间不得超过 5 天。
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5.3.5 观察接种后的罐体是否有生长现象。
5.3.6 接受标准与结果解读
5.3.6.1 在3天内应观察到明显的生长现象。 细菌培养 以及对于酵母和真菌培养物，需在5天内完成处理。
5.3.6.2 如果细菌和真菌培养在5天内均未出现明显的生长现象，则该测试结果无效。
5.3.6.3 如果无菌后的促生长试验结果无效，可以重新进行一次试验；如果重复试验中仍未观察到任何生长现象，则…… 无菌检查方法 应当进行修改并重新验证。

**无菌后促生长试验（Stasis Test）**：该试验用于评估无菌培养基在培养14天后，当接种少量微生物时是否仍能促进微生物生长或恢复。其目的是验证培养基在整个培养期间能够为微生物提供适宜的生长环境。

6.0 缩写词

6.1 标准操作规程（Standard Operating Procedure）
6.2 CFU – 菌落形成单位