1.0 目的
制定培养物接种液的制备程序。2.0 范围
本标准操作规程（SOP）适用于制备已知密度的培养物接种液，这些接种液将用于各种测试目的。3.0 责任
受过培训的微生物学家负责根据标准操作规程（SOP）制备培养接种物。4.0 责任制
部门负责人5.0 程序/步骤
5.1 通用说明
5.1.1 所有操作必须在生物安全柜内进行。5.2 程序
5.2.1 取所需微生物的工作培养物（斜面或试管），并将其放置在工作台上。5.2.2 取所需数量的培养基平板或试管，并将其放置在操作台上。
5.2.3 在培养皿/试管上标注微生物的名称和培养日期。
5.2.4 将工作培养物中适量接种物接种到适当标记的培养管中。 大豆酪蛋白消化培养基 使用试管进行厌氧培养时，应使用煮熟的肉培养基代替大豆酪蛋白消化培养基。培养条件如下：
• 在30至35°C的温度下培养24小时，以进行需氧细菌培养。
• 在30至35°C的温度下培养24至48小时，用于厌氧菌的培养。
• 酵母培养的温度为20–25°C，培养时间为48至72小时。
• 在30至35°C的温度下培养120小时，用于霉菌培养。
5.2.5 在培养完成后，检查试管中是否有……的迹象。 污染；杂质.
5.2.6 假设肉汤培养物的数量为109 每毫升中的微生物数量（适用于需氧条件） 细菌和108 在厌氧菌、酵母和霉菌的情况下，需检测的微生物数量为每毫升（ml）中的微生物数量。
5.2.7 准备8个稀释管（或根据需要稀释至每毫升含有10-100个菌落形成单位（CFU）），每个稀释管中加入9毫升0.1%蛋白胨盐水。按照以下顺序标记每个稀释管：培养物名称和稀释倍数——例如“10”。-1 达到10-8.
5.2.8 取1毫升每种培养物，加入标记为“10”的稀释管中。-1 并制备系列稀释液，以获得浓度约为10-100 CFU/ml的稀释液。 确保在稀释过程中每个稀释液都充分混合均匀，然后进行计数（即微生物计数或活性成分的定量分析）。5.2.9 通过倾注平板法进行计数。
5.2.9.1 从每种培养物中取8个无菌90毫米培养皿，分别标明培养物名称、稀释倍数（最后四个稀释度，每个稀释度重复两个培养皿）、日期以及操作人员的姓名首字母。
5.2.9.2 将最后四次稀释液的各1.0毫升分别接种到标记适当的平板上（每组重复两次）。
5.2.9.3 向每个培养皿中加入约20毫升冷却至约45°C的无菌大豆酪蛋白消化琼脂，并轻轻旋转以使培养液均匀混合。
5.2.10 通过涂布平板法进行计数。
5.2.10.1 对每种培养物取八块大豆酪蛋白消化琼脂平板，并在上面标注培养物名称、稀释倍数（最后四个稀释度，每个稀释度重复两份）、日期以及操作人员的姓名首字母。
5.2.10.2 将最后四个稀释液的各0.1毫升接种到适当标记的平板上（每个稀释液接种两份）。
5.2.10.3 使用无菌涂布器进行涂布操作。
5.2.11 在以下条件下培养平板。
• 在30至35°C的温度下培养24至48小时，以进行需氧细菌培养。
• 在30至35°C的温度下培养24至48小时，用于厌氧菌的培养。
• 酵母培养的温度为20–25°C，培养时间为48至72小时。
• 将温度控制在30至35°C之间，培养时间为72至120小时，用于霉菌培养。
5.2.12 将稀释液储存在2-8°C的温度下。
5.2.13 孵育完成后，统计平板上的菌落数量，并选择菌落浓度为 10–100 CFU/ml 及其前一稀释度（10–100 CFU/0.1ml）的样本。将这些样本标记好，然后储存在 2–8°C 的温度下。
5.2.14 如果10–100 CFU的稀释液用完了，应从之前保存的稀释液中重新配制新的稀释液：取1 ml稀释液加入9 ml无菌蛋白胨盐水中。如有需要，也可以直接使用0.1 ml之前的稀释液来接种10–100 CFU的菌株，例如在…… 琼脂培养基的生成过程（GPT of Agar Media） 采用涂布平板法。
5.2.16 以规定的格式记录接种物制备的详细信息。
相关： 用于培养真菌和细菌的常见培养基的孵育条件
6.0 缩写词
6.1 标准操作规程（Standard Operating Procedure）6.2 CFU – 菌落形成单位