清洁验证中的回收率研究：实用指南

清洁验证在药品生产中起着至关重要的作用，它能确保所有生产设备均按照既定的清洁标准进行清洁。清洁验证的成效取决于所选分析方法的可靠性，以及采样技术从设备表面去除残留物的有效性。
在清洁验证中至关重要却常被忽视的一个方面是回收率研究。根据我在监管检查中的经验，许多企业虽在确定残留限量及验证有效分析方法上投入了大量精力，却在确立清洁效率方面缺乏足够重视。

通过回收因子研究，可以科学地证明采样方法（通常为拭子采样或冲洗采样）的有效性，这类方法能够高效地从工艺设备表面回收残留物。这些研究结果有助于生产商在需要时对分析数据进行调整，并增强其对新的清洁验证方案的信心。

什么是回收率？

回收率 指通过公认的采样技术或流程，从指定设备表面成功检测出的特定残留物量的比例。

例如，若有意将100微克的活性成分沉积在某块材料的表面之上 不锈钢 后续的设备检测与实验室分析显示存在85微克的同一成分，据称回收率为85%。

回收因子研究的重要性

采样技术无法实现从所有表面完全回收残留物。不同产品、设备材质以及采样技术对应的回收率存在差异。开展回收率研究的好处包括：

• 证明取样方法的有效性
• 对拭子采样方法进行验证
• 确认冲洗取样方法的有效性
• 确保分析结果的可靠性
• 协助进行科学合理的残留量计算。
• 满足所有监管要求

未开展回收率研究意味着存在残留物检测结果具有误导性的风险。

监管要求

相关法规极少对必要的回收率百分比设定具体要求。不过，生产商须为所选采样方法提供科学依据。在开展检查时，必须考虑以下因素：

• 回收率研究方案
• 表面材质选择的依据
• 产品选型的依据
• 回收率的计算
• 统计分析
• 验证报告
• 分析人员培训文件

回收率研究应与常规检测同步开展。 清洁验证 作为工艺流程的一部分，而非独立的实验室操作。

何时应当开展回收率研究？

在启动常规清洁验证流程之前，应先进行回收率研究。

在某些情况下需要进行此类研究，这些情况包括新清洁验证方法的开发、新产品投产、新设备安装、表面材料更换以及采样方法变更等。

每次采样效率的变动都应引发回收率的评估。

选择具有代表性的设备表面

表面材质的选择对研究的可靠性至关重要。常见的药品生产设备表面材质包括：

• 316L不锈钢
• 玻璃器皿
• 聚四氟乙烯
• 硅胶管
• 聚丙烯
• 聚乙烯
• 哈斯合金

在选择表面材质时，应充分理解其预期用途并将其体现出来。若存在多种表面材料，则可能需要开展单独的回收率研究。

选定用于回收率研究的产品

必须选择在清洁难度上最为苛刻的制剂作为测试对象。可选定的依据可能包括：

• 溶解度极低
• 效力极高
• 由难以清洁的配方制成
• 残留有黏性物质
• 极高毒性
• 清洁工艺的最坏情况验证矩阵

以我的经验来看，那些采用科学方法选定 最差情况制剂 能够在确保符合相关法规要求的前提下，大幅减少涉及回收率研究的检测项目数量。

采样方法的选定

拭子采样与冲洗采样是两种应用极为广泛的采样方式。 取样方法.

拭子采样

拭子采样 其合理性在于能够直接测定设备表面残留的杂质量。采用拭子法的优点包括：

• 取样位置的特异性
• 高灵敏度
• 适用于难以清洁的表面
• 提升残留物定位精度

需注意的是，拭子采样效率在很大程度上取决于操作人员的技术水平以及样品表面的特性。

2. 冲洗取样

冲洗取样法用于测定通过使用能够溶解相关残留物的试剂对系统进行冲洗后所去除的残留量。需要采用冲洗取样的环节包括：

• 大型储罐
• 管道系统
• 封闭系统
• 无法进行拭子检测的场所

除非有科学证据予以证明，否则不得用冲洗取样替代拭子取样。

回收因子研究实用操作规程

采用标准的研究方案能够提升重复性。

第一步：制备检测试样

在制备测试样片时，需确保其无污染物，并由生产过程中所使用的合适材料制成。推荐的样片尺寸为：

• 25平方厘米
• 50平方厘米
• 100平方厘米

表面光洁度必须与工艺设备的表面光洁度保持一致。

步骤2：加入已知量的残留物

下一步是称取规定量的待测产品，将固定量的残留物涂于试样上，然后在指定条件下让其干燥。

第3步：回收残留物

待残留物干燥后，采用特定的清洁验证方法进行残留物回收。控制以下参数至关重要：

• 所使用的拭子类型
• 拭子涂抹模式
• 所用溶剂的体积
• 取样压力
• 投料次数

第4步：分析样品

样品分析的第一步是对回收的样品采用已通过验证的分析方法进行检测。常见的分析操作包括：

• 高效液相色谱法
• 紫外光谱法
• 总有机碳分析
• 气相色谱法
• ICP（必要时）

在开展回收试验之前，务必确保相关标准操作规程已制定完备。

第5步：计算回收率

回收率是通过以下计算得出的：
回收率 = （回收量 / 加入量）× 100

鉴于以下情况：
使用量 = 100 mg
回收量 = 88 mg
上述计算结果表明，该案例中的回收率为88%。

回收因子是如何应用的

在讨论检测过程中发现的8 µg残留物时，应应用回收率因子。此时的计算公式如下：

校正后残留量 = 实际残留量/回收因子
= 8/0.80
= 10微克
请注意，回收因子的应用如何使得对表面污染的实际估算更具现实适用性。

验收标准

尽管存在一些相关指导原则，监管机构并未规定必须设定具体的百分比数值。大多数制药企业仍会坚持自身的要求，例如：

• 拭子法的回收率为70%
• 每次重复实验的回收率均保持一致
• 标准偏差应处于可接受范围。
• 该变异性必须具有科学依据。

因此，审核人员了解该工艺的一致性显得更为重要。

影响回收率的因素

有多种因素会影响回收率。其中包括：

• 表面纹理
• 该物质的溶解度
• 拭子由何种材料制成
• 用于取样的化合物是什么？
• 干燥持续时间
• 操作人员如何开展工作
• 环境条件
• 分析方法的灵敏度

这些因素非常重要，因为它们有助于确保取样的一致性。

文件编制要求

必须对所有回收率测试进行记录。典型的记录应包括：

• 已获批的方案
• 试块制备记录
• 待检测表面的记录
• 标准制备相关记录
• 原始分析数据
• 计算
• 统计分析
• 色谱图（如有）
• 最终报告
• 质量保证部门批准

相关文件应便于在检查时重现回收率测试的全过程。

进行回收率分析时需避免的事项

在采用回收率法的过程中存在诸多常见问题。 药品生产质量管理规范（GMP）审计常见的错误包括：

• 在设备上使用非代表性表面
• 使用普通清洁产品替代最差情况清洁产品
• 拭子取样操作的不一致性
• 采样量不足
• 统计评估质量较差
• 未在使用前对分析方法进行验证
• 在缺乏合理科学依据的情况下使用回收率因子
• 文件记录不全

据我所知，操作人员操作技术的不稳定性属于回收率变异中那些看似微不足道的因素。同时，通过标准化也能提升相关性能。 员工的培训与确认.

回收率研究最佳实践

已建立清洁验证体系的机构需遵循以下规则：

• 对最不利的样品进行仔细筛选。
• 列出生产过程中使用的代表性物料
• 制定标准的清洁与检测规程
• 在对清洁工艺进行验证之前，需先对操作人员开展培训。
• 对检测项目进行充分的重复试验。
• 在评估过程中采用已通过验证的分析技术。
• 进行统计评估
• 对验证过程的每一步骤均予以记录。
• 每当更换产品或设备时，均需报告回收率。
• 将回收率研究纳入清洁验证计划中。

回收因子研究是清洁验证过程中的重要组成部分，因为它能够表明可从待检测表面实际清除多少残留物。若缺乏合理的回收因子数据，将导致清洁验证文件无效，因为这会低估实际的残留物水平，进而增加风险。 交叉污染 以及相关的监管问题。

根据我的经验，规划完善的恢复研究能够对整个清洁验证流程进行全面评估。首先，必须选择合适的测试表面，充分考虑最难清洁的污染物类型，采用具有代表性的取样方法，并严格执行记录规范。

法规参考文献

FDA关于清洁工艺验证检查的指南
https://www.fda.gov/inspections-compliance-enforcement-and-criminal-investigations/inspection-guides/validation-cleaning-processes-793 的翻译：FDA关于工艺清洁验证的检验指南
2. FDA工艺验证：通用原则与实践
https://www.fda.gov/media/71021/download
3. 《欧盟药品生产质量管理规范指南》第4卷，附录15：确认与验证
https://health.ec.europa.eu/medicinal-products/eudralex/eudralex-volume-4_en