紫外-可见分光光度计（仪器及校准）

除非另有规定，否则应在1 cm的光程长度下、24°至26°的角度处测定规定波长处的吸光度。除非另有规定，所有测量均应以相同的溶剂或相同的溶剂混合物为参照进行。

仪器设备

一种适用于紫外光和可见光波段测量的分光光度计，由能够产生200纳米至800纳米范围内单色光的光学系统，以及用于测量吸光度的检测装置组成。

用于待测溶液和参比液的两个空样品池必须具有相同的光谱特性。若使用双光束检测仪器，则溶剂样品池应置于参比光束中。

波长控制

应使用高氯酸钬溶液的吸收最大值、氢灯或氘灯的谱线，或是汞蒸气的谱线来验证波长刻度。在200纳米至400纳米的范围内，允许的偏差为±1纳米；在400纳米至600纳米的范围内，允许的偏差为±3纳米。

吸光度控制

应使用合适的滤光片或表1中规定的波长下的重铬酸钾紫外溶液来检测吸光度，该表格列出了各波长下特定吸光度的精确数值及允许范围。吸光度的容差为±0.01。

应使用在130℃下预先干燥至恒重后的重铬酸钾UV溶液。为控制235 nm、257 nm、313 nm和350 nm处的吸光度，将57.0-63.0 mg的重铬酸钾UV溶解于0.005 M硫酸中，再用相同浓度的硫酸稀释至1000.0 ml。为控制430 nm处的吸光度，将57.0-63.0 mg的重铬酸钾UV溶解于0.005 M硫酸中，再用相同浓度的硫酸稀释至100.0 ml。

杂散光限度

通过使用合适的滤光片或溶液，即可在特定波长处检测到杂散光；例如，以水作为参比液时，置于1cm比色皿中的1.2%（w/v）氯化钾溶液在约200纳米波长处的吸光度应大于2.0。

分辨率

若专论中有规定，则需记录甲苯在己烷中按0.02%（v/v）比例配制的溶液的紫外光谱。除非专论另有说明，否则该溶液在约269 nm处的最小吸光度与在约266 nm处的最大吸光度之比不得小于1.5。

光谱狭缝宽度

在测量吸收峰处的吸光度时，光谱狭缝宽度必须小于吸收带的半宽，否则会导致测得的吸光度出现异常偏低的数值。对于某些物质需格外谨慎，所使用的仪器狭缝宽度应确保进一步缩小不会使吸光度读数上升。

细胞

盛装待检测溶液与参比液的比色皿在注入相同溶剂后，其吸光度应保持一致。若出现差异，则必须进行适当的校正。所用比色皿的光程长度允许偏差为±0.005厘米。比色皿需经过彻底清洁，并在操作时格外小心。

溶剂

在测定特定波长下溶液的吸光度时，参比池及其内物质的吸光度不应超过0.4；若以相同波长下的空气作为参比，则该数值宜低于0.2。参比池中的溶剂应与用于配制溶液的溶剂为同一批次，且在测定波长下不得具有荧光特性。用作溶剂的95%乙醇、乙醇、甲醇和环己烷，在以水为参比的254 nm波长、1 cm比色皿条件下的吸光度应不超过0.10。

吸光度测定

除非另有规定，否则应在24°至26°的入射角下，以1 cm为光程长度测定规定波长处的吸光度。如有必要，在证明在该范围内仍符合比尔定律的前提下，可调整光程长度。

在检测或试验中关于最大吸收波长值的表述，意味着该最大吸收值恰好出现在给定波长处，或位于该波长±2纳米的范围内。

同样，对于在特定波长或约规定波长处的最大吸收度A的检测结果而言，这意味着实测吸收度处于该规定值的±3%范围内。

当某项测定或检测要求使用对照物质时，应首先按照官方规定用对照物质配制的溶液进行分光光度测量，随后再用待测物质配制的相应溶液进行测量。第二次测量需在第一次测量之后尽快完成，且必须使用相同的比色皿及相同的实验条件。

除非另有规定，各专论中关于检测和测定过程中光吸收的要求均适用于干燥或无水状态的材料，此类情况下会分别给出水分失重的标准值；对于溶剂含量的标准值，也适用类似的考量原则。在计算结果时，应 干燥失重 或 水分含量 需考虑专论中规定的方法所确定的溶剂等因素。

导数分光光度法

导数光谱法是指将吸收光谱（零阶）转换为一阶、二阶或更高阶的导数光谱。

一阶导数光谱是将吸光度曲线斜率（吸光度随波长变化的速率，即dA/dλ）与波长作图得到的图形。

二阶导数光谱是将吸收光谱的曲率（d²A/dλ²）与波长作图得到的图形。若吸光度符合比尔-朗伯定律，则任意波长下的二阶导数值A可通过以下公式与浓度建立关联。

d²A/dλ² = d²A（1%，1厘米）× cd/dλ²
其中，A = 波长A处的吸光度。
A值（1%，1厘米）= 波长λ处的比吸光度
c = 以w/v百分比表示的吸收性溶质的浓度。
d = 电磁波中吸收层的厚度。

仪器设备

应按照制造商的说明，使用符合上述波长控制与吸光度控制要求的分光光度计，并配备模拟式电阻电容微分模块、数字微分器或其他能够生成二阶导数光谱的装置。某些生成二阶导数光谱的方法会导致光谱波长相对于零阶光谱发生偏移，在必要时需将此因素考虑在内。除非各药品专论中有其他规定，否则可变式分光光度计的光谱狭缝宽度应按照上文“光谱狭缝宽度”部分所述进行设置。所使用的比色皿及溶剂也应符合相应章节中关于比色皿与溶剂的要求。

试剂

试验中使用的所有溶液的温度差异不得超过0.5°。

分辨率

若专论中有相关规定，则需记录浓度为0.020%（v/v）的甲苯溶液在255 nm至275 nm波长范围内的二阶导数光谱，且参比池中应使用甲醇。在约261 nm和268 nm处的两个较大负值极值（或低谷）之间，应能清晰观察到一个小负值极值（或低谷）。

程序/步骤

配制待测物质的溶液，按照制造商说明书的要求调整各类仪器参数，并根据各药品标准中的规定计算待测物质的含量。