《培养基灌装小瓶检验标准操作规程》及《检验员资格确认程序》

1.0 目的

制定培养基灌装小瓶的检验程序以及检验人员的资格确认要求。

2.0 范围

本标准操作规程（SOP）适用于培养基填充小瓶的检验以及检验人员的资格认证。该SOP不涵盖对已填充小瓶中颗粒物及其他物理缺陷的检验。

3.0 责任

3.1 一名经过培训且具备资质的微生物学家应负责对负责培养基灌装小瓶检验的微生物学家进行培训，并确保其具备相应的专业能力。
3.2 经过培训并具备相应资质的微生物学家应负责对培养基填充小瓶的检验工作。

4.0 责任制

部门负责人

5.0 程序

5.1 媒体填充小瓶的检验

5.1.1 媒体填充的小瓶应在培养的第7天和第14天至少进行两次检查，检查结果应记录在批生产记录中。 **媒体填充（Media Fill）**.
5.1.2 将装有培养基的西林瓶（按托盘为单位）转移到检验区域，并根据批生产记录的要求记录相关信息。
5.1.3 每位执行检验的人员连续进行检验的时间不得超过2小时，每检验2小时后必须至少休息15分钟。
5.1.4 从顶部用手挑选一个瓶子，确保手部不会遮挡视线。在提起瓶子的过程中，不要旋转或晃动瓶子。
5.1.5 将小瓶放在黑白背景上，轻轻旋转它们，观察是否有漩涡从瓶底升起。
5.1.6 将小瓶倒置，轻轻旋转，然后在黑白背景下观察是否有微生物生长。
所有观察结果应首先在黑色背景上记录，然后在白色背景上补充。
5.1.7 如果发现任何有微生物生长或浑浊现象的小瓶，应将其放入带有适当标识的拒收托盘（托盘编号：...）中。

5.2 培训微生物学家以胜任培养基灌装检查工作

5.2.1 先决条件
5.2.1.1 微生物学家至少应每年接受一次培训或再培训，以掌握识别不同类型和程度的微生物生长的方法。此类培训也应作为任何纠正与预防措施（CAPA）的一部分进行。
5.2.1.2 微生物学家每年至少应接受一次由合格医疗专业人员进行的眼科检查，视力需达到6x6（辅助或非辅助视力测试），并且不得患有其他眼科疾病。
5.2.2 培训方法：培训应按照以下步骤进行：
5.2.2.1 应通过课堂培训来讲解检验的方法、重要性及其相关技术。
5.2.2.2 为了使检查员熟悉并能够识别不同类型和程度的生长/浑浊现象，需使用根据5.3节准备的含有阳性培养基的小瓶，并借助《培养基目视检查培训手册》进行演示。 污染 “由微生物学家完成”。
5.2.2.3 按照第5.1节的要求，演示培养基填充小瓶的检验技术。
5.2.3 培训评估 - 检查员的评估应按照以下标准进行：
5.2.3.1 书面测试评估：准备一份关于介质填充检查的问卷，并要求受训者进行回答。受训者应至少获得80%的分数。
5.2.3.2 检验技术的评估 – 要求受训者演示该检验技术。受训者应能够按照第5.1节中规定的正确技术对小瓶进行检验。
5.2.3.3 检测受污染的小瓶：要求受训者按照5.1的要求，从每包选定的小瓶中检查500个小瓶（每包包含10个受污染的小瓶，这些受污染的小瓶是根据5.3的方法制备的）。选择的标准是：最小尺寸、最大尺寸以及一个中间尺寸的小瓶。将检测到的受污染小瓶与标准样品表进行比对。受训者必须以100%的准确率识别出受污染的小瓶，并区分出合格的小瓶和受污染的小瓶。
5.2.3.4 如果培训生能够满足上述所有标准，他将被视为有资格执行培养基灌装小瓶的检验工作。
5.2.3.5 培训评估的记录应保存在“Media Fill Inspection Training Evaluation”文件中。

5.3 媒体填充阳性对照品的制备：

5.3.1.1 取一定量的标准培养物，用无菌生理盐水配制成悬浮液。 5.3.1.2 对于每种选定的微生物，取5个培养基填充的小瓶，每个小瓶中接种0.1毫升的微生物培养液。 培养悬浮液 从0.1毫升开始，逐步增加至0.5毫升，以此来观察不同密度下的微生物生长情况。
或者
或者，将制备好的菌种接种到小瓶中。 培养接种物 将小瓶放入培养箱中培养，并在不同时间点取出小瓶，观察其生长情况或浊度的变化（例如：生长不良、生长良好或生长旺盛）。将这些小瓶储存在2–8°C的温度下，并在培训时使用。
5.3.1.3 使用至少三种不同类型的培养瓶来展示各种生长情况，例如均匀浑浊、沉淀生长、漂浮生长、沉淀/絮凝生长以及真菌生长，以此来说明不同类型的微生物生长现象。

6.0 缩写词

6.1 标准操作规程（Standard Operating Procedure）