无菌检查标准操作规程

1.0 目标

为了确保该批次产品是无菌的，或者已经经过了灭菌处理。

2.0 范围

该程序适用于所有……（The procedure is applicable to all……） 肠外给药制剂 以及任何在规格中提到需要进行该测试的特定材料。

3.0 责任

3.1 职位：技术助理（微生物学家）/执行职务
3.2 检查：执行者/经理

4.0 责任制

部门负责人。

5.0 程序

5.1 无菌检查用培养基的制备

5.1.1 根据规定使用硫代葡萄糖酸盐液体培养基 《培养基制备标准操作规程》.
5.1.2 使用SOP中规定的大豆酪蛋白消化培养基进行培养基制备。

5.2 培养基的生长促进试验

5.2.1 进行 促生长试验 按照该方法进行。

5.3 非胰岛素类材料及制剂的灭菌检测程序

5.3.1 根据标准操作规程（SOP），将所有用于无菌检验的配件在高压灭菌器中以121°C的温度下灭菌30分钟；同时，根据相关要求，将玻璃器皿以及镊子/切割工具在DHS设备中以180°C的温度下加热2小时进行灭菌。 玻璃器皿的清洗与灭菌标准操作规程.
5.3.2 进入无菌检测室，并按照标准操作规程（SOP）的要求穿戴防护服。
5.3.3 关闭无菌室的紫外线灯（UV light），然后打开管灯（tube light）。
5.3.4 按照标准操作规程（SOP）操作层流柜（LAF）。
5.3.5 用...擦拭 LAF 工作台。 70%过滤后的异丙醇（IPA）.
5.3.6 在测试之前，用70%的过滤过的一氧化碘（IPA）消毒样品容器的外表面，并让其干燥。
5.3.7 按照要求暴露培养基平板，并监测该区域。 环境监测标准操作规程.

5.3.8 用于无菌检查的样品数量

对于成品：每批或每批产品需准备20个容器。
对于散装样品：需要提供2个50毫升的样品，每个样品都应装在无菌容器中。
5.3.9 将过滤装置安装在层流洁净室（LAF）内，并将其与真空管线及真空泵连接起来。
5.3.10 使用无菌镊子将无菌的0.45微米滤膜放置在滤膜架上，并将其牢固地夹紧。
5.3.11 在另一个无菌操作区（LAF），使用无菌注射器从安瓿瓶/小瓶/瓶子中吸取样品溶液，并将其收集到无菌烧瓶中。对于干粉或冻干制剂，先加入无菌水/0.1%蛋白胨进行溶解，然后再将其收集到无菌烧瓶中。
5.3.12 将收集到的溶液通过0.45微米的过滤器进行无菌过滤。 膜过滤器 在真空的帮助下。
5.3.13 如果测试样品含有任何抗菌成分或防腐剂，应使用300毫升 freshly prepared sterile 0.1% peptone溶液进行过滤冲洗。
5.3.14 应同时进行0.1%蛋白胨水或其他用于冲洗过滤器的稀释液的无菌检查。
5.3.15 过滤完成后，打开装置，并使用无菌切割工具将膜过滤器切成两等份。
5.3.16 使用无菌镊子将一个半的膜过滤器接种到硫葡萄糖酸盐培养基（Thioglycollate medium）中，将另一个半的膜过滤器接种到大豆酪蛋白消化培养基（Soybean casein digest medium）中。每种培养基保留一支未接种的试管作为阴性对照（–ve control）。
5.3.17 将培养基试管通过舱门转移到步入式培养箱中。
5.3.18 孵育时间和温度如下所示。
A) 流动硫代甘醇培养基：根据药典要求，在30–35°C的温度下培养不少于14天。
B) 大豆酪蛋白消化培养基：根据药典要求，在20-25°C的温度下培养不少于14天。
5.3.19 这些产品 **终末灭菌的** 通过经过验证的湿热处理方法，将测试样品培养不少于7天。
5.3.20 每日观察培养基中是否存在（浑浊）或不存在（清澈）微生物生长，并根据附录I记录观察结果。
5.3.21 检查……的促生长特性 防腐剂 在按照5.5节的要求完成无菌试验的培养期后，记录观察结果，包括含有抑菌剂和抗真菌剂的产品情况。

5.4 胰岛素的灭菌检测程序

5.4.1 所有步骤均应按照 5.3.1 至 5.3.17 的要求执行。
5.4.2 如果胰岛素晶体发生沉淀，将其溶解在无菌的20%抗坏血酸溶液中（约50毫升）。
5.4.3 应按照规定的孵育时间和温度进行操作。
A) 流动硫代葡萄糖酸盐培养基：温度保持在30–35°C，培养时间不少于14天。
B) 大豆酪蛋白消化培养基：温度保持在20–25°C，培养时间不少于14天。
5.4.4 每日观察培养基中是否存在（浑浊）或不存在（清澈）微生物生长，并根据附录I记录观察结果。
**注意：对于胰岛素制剂，将检测结果记录在胰岛素制剂数据表中。**
5.4.5 根据5.5的要求，在培养期（14天）结束后，检查培养基的促生长性能。
5.5 在完成灭菌试验的培养期后，检查培养基的促生长特性。
5.5.1 在培养期结束后，将每种培养基分别分配到三个试管中。按照以下方法向各试管中接种测试菌株（约100 cfu/ml）。
1) 流动硫代葡萄糖酸盐培养基：（适用于需氧菌和厌氧菌培养）
铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）- ATCC 9027
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）- ATCC 6538
Cl.sporogenes - ATCC 1437
在30–35°C的温度下培养2–3天。
2) 大豆酪蛋白消化培养基：（用于细菌和真菌培养）
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）- ATCC 6538
**C. albicans – ATCC 10231**
A.niger - ATCC – 16404
在20–25°C的温度下培养5天。
5.5.2 接受标准：培养基应在其培养期内对微生物生长作出反应（即显示生长迹象）。
5.5.3 观察培养基试管中的生长情况，并记录观察结果。
**注意：对于胰岛素制剂，将检测结果记录在胰岛素制剂数据表中。**

5.6 盲测试验（对照试验）

5.6.1 使用注射用无菌水进行无菌检查。
5.6.2 按照步骤 5.3.1 至 5.5.4 进行操作。
5.6.3 记录观察结果。
5.6.4 频率：每周进行一次该测试，并由其他人员每六个月进行一次复核。
5.6.5 接受标准：测试样品必须通过无菌检查。
5.6.6 结果的解释：关于结合试验（bind test）的结果解读。
1) 如果样品的无菌检查通过，分析人员就有资格进行无菌检查。
2) 如果样品的无菌检查不合格，分析人员需要重新接受无菌检测方面的培训。
5.7 无菌检查的观察与结果解读
5.7.1 如果未发现生长迹象，则所检测的制剂通过无菌测试。
5.7.2 如果发现微生物生长的迹象，应保留含有这些微生物的容器。除非能够通过其他方式证明这些微生物的存在与被检测的制剂无关，否则该无菌检测结果无效，需要对相同数量的样品重新进行检测。
5.7.3 如果重新检测时未发现微生物生长的迹象，则所检测的制剂通过无菌性测试。
5.7.4 如果在重新检测中发现微生物生长的证据，该制剂的无菌测试将不合格。
5.7.5 根据IP（国际药典）的规定，如果未发现微生物生长的证据，则所检测的制剂符合无菌测试的要求。
5.7.6 如果发现微生物生长的证据，说明所检测的制剂不符合无菌检测的要求。除非能够明确证明检测失败是由于与被检测制剂无关的原因造成的，否则不得重复进行该检测。
5.7.7 该测试只有在满足以下一个或多个条件时才能被视为无效：
5.7.7.1 如果阴性对照中检测到微生物生长。
5.7.7.2 杀菌检测设施的微生物监测数据显示存在故障。
5.7.7.3 对所使用的检测程序进行审查后发现其中存在一处错误。
5.7.7.4 在确认从出现微生物生长的容器中分离出的微生物后，可以毫无疑问地将这种生长归因于用于进行测试程序的材料和/或技术上的缺陷。
5.7.8 如果测试结果被判定为无效，则需使用与原始测试相同的样品数量重新进行测试。如果在重复测试中未发现微生物生长，则所检测的制剂符合无菌测试的要求。如果在重复测试中发现了微生物生长，并且通过显微镜观察得到确认，则所检测的制剂不符合无菌测试的要求。

6.0 缩写词

6.1 ATCC = 美国典型培养物保藏中心（American Type Culture Collection）
6.2 IP = 印度药典
6.3 LAF = 层流空气（Laminar Air Flow）
6.4 UV = 紫外线
6.5 IPA = 异丙醇

附件一

质量控制部门

标准操作规程编号：___________

产品名称：
批次编号：-	生产日期：-		**Exp.Date.:-** （注：此为日期格式，通常翻译为“失效日期：-”或“ expiration date: -”）
批次规模：-	样品：- 散装品 / 成品		样品数量：-
S.T.R.No.:-	防腐剂：-		检测日期：-
LAF-I ID.No.: -		LAF-II ID.No.: -

中间名。	温度	pH值	批次；批号编号：[编号内容]
**培养基名称：** **Medium – A**：含硫葡萄糖酸盐液体培养基（100毫升），适用于需氧菌和兼性厌氧菌的培养。	30°C至35°C
中号 – B：大豆酪蛋白消化肉汤（100毫升），适用于需氧菌和真菌培养	20°C 至 25°C

天	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12	13	14	备注；说明；附言
日期：
**Medium A** 测试；检验 批次；批号
“Medium B” 测试；检验 批次；批号
中等控制水平
**蛋白胨** 控制；管理；操纵
抗坏血酸（维生素C）的控制
签名
阳性对照 _________
+ 观察到生长							未观察到生长。

备注：- 该制剂符合/不符合 IP/BP/EP/USP 中规定的无菌检查要求。
分析师 （日期及签名）	报告日期 （日期及签名）	由...审核/检查 （日期及签名）