1.0 目标
描述紫外-可见分光光度计的校准程序。2.0 范围
本标准操作规程（SOP）适用于紫外-可见分光光度计（UV-Vis Spectrophotometer）的校准工作。3.0 责任
质量控制专员/主管4.0 责任制
质量控制经理。5.0 程序
5.1 校准
5.1.1 UV-VIS分光光度计的校准分为四个步骤。A] 波长控制
B] 吸光度的控制
[c] 杂散光限制
D] 分辨率
5.1.2 按照标准操作规程（SOP）操作仪器。
5.2 波长控制
5.2.1 精确称取1.0克氧化钬（Holmium Oxide），并将其溶解在1.4摩尔的过氯酸（Perchloric Acid）溶液中。然后用相同的溶剂将体积补足至25毫升。5.2.2 选择仪器中“波长控制（CONTROL OF WAVELENGTH）”的相关方法文件。
5.2.3 选择文件后，点击“Reference”按钮进行基线校正。
5.2.4 然后将比色皿（Cuvette）填充至1.4M的浓度。 高氯酸 将样品放入样品柜中，并将参考值设置为零。
5.2.5 在自动归零后，将高氯酸钬溶液放入样品室中，然后按下启动键。
5.2.6 使用高氯酸钬溶液的吸收最大值进行扫描并验证波长。允许的偏差范围如下表所示。
S.No.
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最大波长（纳米）
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公差（纳米）
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1.
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241.15纳米
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240.15纳米至242.15纳米
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2.
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287.15纳米
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286.15纳米至288.15纳米
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3.
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361.5纳米
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360.50纳米至362.50纳米
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4.
|
536.3纳米
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533.30纳米至539.30纳米
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5.3 吸光度的控制
5.3.1 将一定量的……干燥至指定程度。 重铬酸钾 通过在130°C下加热至恒重。5.3.2 精确称取约60毫克的干燥重铬酸钾，将其溶解在0.005摩尔的硫酸溶液中。用相同的溶剂将溶液体积补足至1000毫升。将此溶液标记为（A）。
3.3 精确称取约60毫克的干燥重铬酸钾，并将其溶解在0.005摩尔的硫酸溶液中。用相同的溶剂将溶液体积补足至100毫升。将此溶液标记为（B）。
5.2.7 选择仪器中“吸光度控制（CONTROL OF ABSORBANCE）”的相关方法文件。
5.2.8 选择文件后，点击“Reference”按钮进行基线校正。
5.2.9 然后向比色皿中加入0.005M的硫酸作为空白对照液，将其放入样品检测区，并将参考值设置为零。
5.2.10 在自动归零后，将标有“溶液A”的重铬酸钾溶液放入样品池中，然后按下启动键，分别测量“表I”中提到的前四个波长的吸光度值。
5.2.11 现在测量溶液‘B’在430纳米处的吸光度。
5.2.12 在不同波长下记录重铬酸钾溶液的吸收峰值，并计算其吸光度；容差值见下表。
表 I
S.No.
|
波长（纳米）
|
吸光度 E（1%1cm）
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最大容忍限度
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1.
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235
|
124.5
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122.9至126.2
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2.
|
257
|
144.0
|
142.8至145.7
|
3.
|
313
|
48.6
|
47.0至50.3
|
4.
|
350
|
106.6
|
104.9至108.2
|
5.
|
430
|
15.9
|
15.7至16.1
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5.4 杂散光限制
5.4.1 将一定量的……干燥至指定程度。 氯化钾 通过在130°C下加热至恒重。5.4.2 精确称取1.20克干燥的氯化钾，将其溶解在50毫升蒸馏水中。然后用相同的溶剂将体积补足至100毫升。
5.4.3 选择仪器中用于检测“杂散光限制”（LIMIT OF STRAY LIGHT）的方法文件。
5.4.4 选择文件后，点击“Reference”按钮进行基线校正。
5.4.5 使用水作为空白对照，在200纳米波长下测定上述溶液的吸光度。
5.4.6 吸光度应大于2.0。
5.5 分辨率
5.5.1 准备0.02%（体积比）的甲苯溶液，溶剂为己烷，用于紫外检测。5.5.2 选择仪器中 RESOLUTION POWER 的方法文件。
5.5.3 选择文件后，点击“Reference”按钮进行基线校正。
5.5.4 使用己烷紫外光作为空白溶液，在266 nm和269 nm波长下测量上述溶液的吸光度。
5.5.5 在269纳米处的吸光度最大值与266纳米处的吸光度最小值之比应大于1.5。
5.5.6 将报告记录在内部校准证书和仪器日志簿中。
6.0 缩写词
6.1 标准操作规程（SOP）6.2 nm - 纳米
6.3 VIS - 可见的
6.4 紫外线（UV）