微生物限度检测(MLT)验证

MLT (Microbial Limit Test) Validation

2011年1月28日Ankur Choudhary (noreply@blogger.com)AI 专业翻译
验证测试是按照以下方法进行的:
A. 培养悬浮液的制备
B. 活菌的回收

A. 测试悬浮液的制备

1. 请删除以下带有文化倾向的表述…… 冰箱 并让其达到室温。
• 枯草芽孢杆菌
• 白色念珠菌
2. 将每个斜面培养物接种到10毫升无菌生理盐水中(0.9%氯化钠溶液),每个斜面分别接种一份。
3. 将1.0毫升的溶液转移到9.0毫升的无菌生理盐水中(0.9%氯化钠溶液),以获得10倍的稀释浓度。-1.
4. 取10毫升的溶液,转移1.0毫升到另一个容器中。-1 将药物稀释至9.0毫升的无菌生理盐水中,以获得10毫克/毫升的浓度。-2 稀释。
5. 同样地,按顺序进行系列稀释。 培养悬浮液 获得10倍的稀释度。-3, 10-4, 10-5, 10-6, 10-7  以及10-8.
6. 取1.0毫升来自10倍稀释液的培养液,接种到平板上。-3 达到10-8 将样品分两份放入无菌培养皿中。
7. 倒入大约15-20毫升的无菌液体。 大豆 酪蛋白消化琼脂 将每个培养皿冷却至约45°C,然后在32.5 ± 2.5°C的温度下孵育24至48小时。
8. 计算每个平板上的菌落数量,并选择能够使活菌回收数量在 10 到 100 cfu 之间的稀释度。

B. 活菌的回收

对于总细菌计数:
步骤编号
阴性对照
阳性对照
产品控制
阳性产品对照
1
向100毫升的大豆酪蛋白消化培养基中加入1.0毫升的无菌水。
向100毫升无菌水中加入1.0毫升的培养悬浮液(含有10到100个枯草芽孢杆菌细胞)。 大豆 酪蛋白消化培养基。
将10克待测产品溶解在100毫升溶剂中,制备样品。 大豆 酪蛋白消化培养基。

将10克待测产品溶解在100毫升溶剂中,制备样品。 大豆 酪蛋白消化培养基中加入1毫升含有10至100个枯草芽孢杆菌(B.subtilis)细胞的培养液。
2
用无菌移液器将预处理后的样品无菌地移取1毫升,分两份分别置于无菌培养皿中。
用无菌移液器将预处理后的样品以1毫升的量分两次无菌地移入无菌培养皿中。
用无菌移液器将预处理后的样品以1毫升的量分两次无菌地移入无菌培养皿中。
用无菌移液器将预处理后的样品无菌地移取1毫升,分两份置于无菌培养皿中。
3
在每个培养皿中加入大约20毫升的液体。 大豆 酪蛋白消化琼脂(HiMedia 编号 M290),混合后让其固化。
在每个培养皿中加入约20毫升的液体。 大豆 酪蛋白消化琼脂(HiMedia 编号 M290),混合后让其固化。
在每个培养皿中加入约20毫升的液体。 大豆 酪蛋白消化琼脂(HiMedia 编号 M290),混合后让其固化。
在每个培养皿中加入约20毫升的液体。 大豆 酪蛋白消化琼脂(HiMedia 编号 M290),混合后让其固化。
4
将培养皿倒置,然后在30°C至35°C的温度下培养五天。
将培养皿倒置,然后在30°C至35°C的温度下培养五天。
将培养皿倒置,然后在30°C至35°C的温度下培养五天。
将培养皿倒置,然后在30°C至35°C的温度下培养五天。
5
计算培养结束后形成的菌落形成单位(Colony Forming Units, CFU)的数量,并记录下来。 结果。

计算培养结束后形成的菌落形成单位(Colony Forming Units, CFU)的数量,并记录结果。

计算培养结束后形成的菌落形成单位(Colony Forming Units, CFU)的数量,并报告平板中获得的最高菌落形成单位数值。将最高的菌落形成单位数值乘以10,然后将这个结果报告为每克样品中的总细菌计数(Total bacterial Count per 1 gm of the sample)。
计算培养结束后形成的菌落形成单位(Colony Forming Units, CFU)的数量,并报告平板中获得的最高菌落形成单位数值。将最高的菌落形成单位数值乘以10,然后将这个结果报告为每克样品中的总细菌计数(Total bacterial Count per 1 gm of the sample)。



对于总真菌计数:  
步骤编号
阴性对照
阳性对照
产品控制
阳性产品对照
1
向100毫升的大豆酪蛋白消化培养基中加入1.0毫升的无菌水。
向100毫升无菌水中加入1.0毫升的培养悬浮液(含有10到100个白色念珠菌(C. albicans)细胞)。 大豆 酪蛋白消化培养基。
将10克待测产品溶解在100毫升溶剂中,制备样品。 大豆 酪蛋白消化培养基。

将10克待测产品溶解在100毫升溶剂中,制备样品。 大豆 酪蛋白消化培养基中加入1毫升含有10至100个白色念珠菌(C. albicans)细胞的培养液。
2
用无菌移液器将预处理后的样品以1毫升的量分两次无菌地移入无菌培养皿中。
用无菌移液器将预处理后的样品以1毫升的量分两次无菌地移入无菌培养皿中。
用无菌移液器将预处理后的样品无菌地移取1毫升,重复操作两次,分别置于无菌培养皿中。
用无菌移液器将预处理后的样品以1毫升的量分两次无菌地移入无菌培养皿中。
3
在每个培养皿中加入约20毫升的Sabouraud Dextrose Agar(HiMedia培养基)。 代码编号M063,混合后让其固化。
在每个培养皿中加入约20毫升的Sabouraud Dextrose Agar(HiMedia产品代码M063),搅拌均匀后让其固化。
在每个培养皿中加入约20毫升的Sabouraud Dextrose琼脂(HiMedia代码编号M063),搅拌均匀后让其固化。
在每个培养皿中加入约20毫升的Sabouraud Dextrose Agar(HiMedia代码编号M063),搅拌均匀后让其固化。 
.
4
将培养皿倒置,然后在20°C至25°C的温度下培养五天。
将培养皿倒置,然后在20°C至25°C的温度下培养五天。
将培养皿倒置,然后在20°C至25°C的温度下培养五天。
将培养皿倒置,然后在20°C至25°C的温度下培养五天。
5
计算培养结束后形成的菌落形成单位(Colony Forming Units, CFU)的数量,并记录下来。 结果。
计算培养结束后形成的菌落形成单位(Colony Forming Units, CFU)的数量,并记录结果。
计算培养结束后形成的菌落形成单位(Colony Forming Units, CFU)的数量,并报告平板中获得的最高菌落形成单位数值。将最高的菌落形成单位数值乘以10,然后将这个结果报告为每1克样品的总真菌计数(Total Fungal Count)。
计算培养结束后形成的菌落形成单位(Colony Forming Units, CFU)的数量,并报告平板中获得的最高菌落形成单位数值。将最高的菌落形成单位数值乘以10,然后将这个结果报告为每克样品的总真菌计数(Total Fungal Count)。

验收标准

如果在规定的测试条件下,满足以下条件,则认为被测试产品对微生物没有抑制作用。
  • 该测试结果是有效的,即阴性对照没有显示任何生长现象。 
  • 从阳性产品对照中回收的微生物数量应不低于从阳性对照中回收的微生物数量的75%。


📌 本文由 AI 翻译自 pharmaguideline.com,仅供内部参考查看英文原文