微生物染色操作规程

5.4.1 原则

5.4.1.1 这种染色方法根据细菌保留初级染料（结晶紫）的能力或失去初级染料并吸收复染料（沙黄）的能力，将细菌区分成革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。革兰氏阳性菌在这种染色下会呈现蓝色或紫色，而革兰氏阴性菌则呈现红色。
5.4.1.2 结晶紫——主要染料
5.4.1.3 格兰氏碘（Gram’s iodine）——这种络合剂
5.4.1.4 酒精——用作脱色剂
5.4.1.5 藏红花素——复染剂

5.4.2 程序

5.4.2.1 将涂片进行空气干燥或热固定处理，然后用结晶紫染色液浸泡载玻片1分钟。
5.4.2.2 用温和且间接的水流冲洗涂片。
5.4.2.3 用碘（媒染剂）溶液浸泡涂片1分钟。
5.4.2.4 用清水冲洗。
5.4.2.5 用酒精逐滴加入，直至所有游离的蓝色完全消失。
5.4.2.6 用清水冲洗。
5.4.2.7 用藏红花素（复染剂）浸泡载玻片1分钟。
5.4.2.8 用清水冲洗后，在空气中晾干。
5.4.2.9 在油浸物镜下进行检查

5.4.3 结果与解释

5.4.3.1 革兰氏阳性细胞呈现紫色，而革兰氏阴性细胞呈现红色。

5.5 孢子染色程序

5.5.1 原则

5.5.1.1 形成内孢子是杆菌科（Bacillaceae）的一个显著特征。内孢子能够抵抗干燥、高温和营养不足等不利环境条件。内孢子在细胞中的位置可以是中央的、亚末端的或末端的。其直径可能与细胞相同，也可能比细胞小或大，这会导致细胞出现膨胀。
5.5.1.2 细菌内孢子对简单染料的染色具有很强的抵抗力，但一旦被染色后，它们也很难被脱色。这一特性提供了一种使内孢子结构可见的方法：如果使用简单的染色剂，细菌的细胞体会被染成深色，而内孢子由于未被染色，会在细菌体内呈现为透明区域。
5.5.1.3 通过强烈的染色程序，染料可以被引入到孢子中。经过这种染色处理后，孢子在遇到脱色剂时仍能保持染料的颜色。为了清晰地区分孢子和细胞的营养部分，通常会按照常规方法使用对比染色剂。最终得到的图像显示了孢子吸收的初始染料，而第二种染料则出现在细胞质中。因此，这是一种非常方便的方法，可以用来区分内孢子和营养细胞。

5.5.2 方法（Schaeffer-Fulton法）

5.5.2.1 用最小程度的火焰处理细菌涂片以进行热固定。
5.5.2.2 用本生灯或加热板加热载玻片的底部，直到有蒸汽产生（但不要让液体沸腾）。
5.5.2.3 用孔雀石绿溶液浸泡载玻片3分钟，同时让水继续沸腾。
5.5.2.4 用清水冲洗。
5.5.2.5 用番红花红（safranin）染色30秒。
5.5.2.6 在油浸物镜下进行检查。

5.5.3 结果与解释

5.5.3.1 可以看到含有绿色孢子的红色细胞。

5.6 真菌染色

5.6.1 原则

乳酚棉蓝湿装片制备法是用于染色和观察真菌的最常用方法。该制备方法包含三种成分：苯酚，可以杀死所有活的微生物；乳酸，可以保存真菌的结构；以及棉蓝，可以染色真菌细胞壁中的几丁质。

5.6.2 程序

5.6.2.1 滴入一滴 70%酒精 在...的基础上；基于... 显微镜 幻灯片。
5.6.2.2 将样品/材料浸入一滴酒精中。
5.6.2.3 在酒精干燥之前，加入一滴或最多两滴乳酚/棉蓝显色剂/染色液。
5.6.2.4 轻轻地将盖玻片放在液滴的边缘，避免产生气泡。

5.6.3 结果与解释

5.6.3.1 在遇到黑曲霉（Aspergillus niger）时，应按照以下方法比较其真菌孢子的特征。
5.6.3.2 阿尼格尔（A.niger）菌产生的菌落呈白色或黄色绒毛状，表面覆盖着深色的无性繁殖真菌孢子。其菌丝（呈线状）由隔膜分隔，且透明。

6.0 缩写词

6.1 标准操作规程（Standard Operating Procedure）