HPLC柱接收、检查及再生标准操作规程

1.0 目标

制定用于检查色谱柱性能的程序，该程序基于从供应商处获得的证书，并按照内部方法进行性能测试。同时，还需描述色谱柱的再生程序。

2.0 范围

该程序适用于所有反相（C8、C18、氰基、苯基）柱和正相（Si）柱的再生操作。

3.0 责任

3.1 职位：技术助理，行政职位
3.2 检查：执行人员/经理

4.0 责任制

4.1 部门负责人

5.0 程序

5.1 新HPLC柱的检测与验证

5.1.1 在收到供应商提供的新色谱柱后，使用甲醇以0.5 ml/min的流速对色谱柱进行条件处理（即对色谱柱进行清洗和活化）。
5.1.2 根据检验报告书（COA）检查该柱子的背压、保留时间等参数是否符合要求。 理论板数（theoretical plates） 使用供应商提供的材料，并按照供应商指定的方法和列进行操作。将结果记录在附件I中。
5.1.3 使用以下色谱条件进行柱性能测试（理论板数、拖尾现象、分离度及背压）。将测试结果记录在附录I中。

5.1.4 反相色谱柱的性能。

流动相：甲醇：水（70:30）体积比
流速：1.0毫升/分钟。
波长：254纳米
注射体积：20微升
灵敏度：0.005 AUFS
C8和C18的测试溶液：流动相中为苯和甲苯的混合物（浓度为0.1%）。
氰基和苯基的测试溶液：由苯（0.1%）和萘（4毫克）组成的混合物，溶解在100毫升的流动相中。
5.1.5 检查完成后，用甲醇以1.0 ml/min的流速反向冲洗色谱柱20分钟，然后将色谱柱储存在甲醇中。

5.1.6 正相（硅胶）色谱柱的性能

流动相：异丙醇（IPA）：己烷（40:60）（体积比）
流速：1.0毫升/分钟。
波长：254纳米
注射体积：20微升
灵敏度：0.005 AUFS
测试溶液：流动相中甲苯（0.5 µl/ml）和邻苯二甲酸二乙酯（2 µl/ml）的混合物。
5.1.7 检查完成后，用己烷以2.0毫升/分钟的流速冲洗色谱柱20分钟，然后将色谱柱储存在己烷中。

5.2 按照以下方式分配列号。

XXX YYY
当 XXX 表示列的缩写时，它可以是 2 到 4 位数字。
ODS Column = 正相色谱柱
BDS Column = BDS（具体含义需结合上下文确定，可能是某个产品型号、设备名称或术语缩写）
胺柱 = NH
硅胶柱 = SI
蛋白质包装 = PP
高分子量蛋白（High Mol. Weight Protein）
YYY 表示从 001 开始的序列编号。
5.2.1 在附件I中填写该列的详细信息。

5.3 反相色谱柱的再生处理

5.3.1 用温水（55°C）以0.7 ml/min的流速冲洗色谱柱10分钟。冲洗过程中，将色谱柱保持在柱温箱内的（55°C）温度下。
5.3.2 每隔2分钟注射100微升DMSO，共注射4次。
5.3.4 用甲醇以0.7毫升/分钟的流速反向冲洗70分钟。
5.3.5 在用甲醇冲洗后，再用氯仿以0.7 ml/min的流速反向冲洗色谱柱70分钟。
5.3.6 最后，用甲醇以0.7 ml/min的流速反向冲洗色谱柱70分钟。
5.3.7 在色谱柱再生后，按照步骤5.1.4至5.1.5的要求进行色谱柱性能测试。
5.3.8 将该色谱柱储存在甲醇中，在正常流动方向下以1.0毫升/分钟的流速用甲醇冲洗20分钟后进行储存。
5.3.9 在分析过程中，必须按照附录II的要求，维护色谱柱的使用历史记录卡。

5.4 正相色谱柱的再生处理

5.4.1 用己烷以2.0 ml/min的流速冲洗色谱柱60分钟。
5.4.2 用己烷冲洗后，以2.0毫升/分钟的流速用二氯甲烷清洗色谱柱60分钟。
5.4.3 用二氯甲烷冲洗后，用异丙醇以2.0 ml/min的流速冲洗色谱柱60分钟。
5.4.4 最后，使用甲醇以2.0 ml/min的流速冲洗该柱子60分钟。
5.4.5 在色谱柱再生完成后，需进行以下操作： **柱性能** 按照步骤 5.1.6 至 5.1.7 进行测试。
5.4.6 将该柱子储存在己烷中，在正常流动方向下以2.0 ml/min的流速用己烷冲洗20分钟后进行储存。
5.5 如果 系统适用性 如果出现故障，只需要进行列再生（column regeneration）即可恢复正常运行。

6.0 缩写词

6.1 ml = 毫升
6.2 分钟 = 一分钟
6.3 °C = 摄氏度
6.4 IPA = 异丙醇
6.5 µl = 微升
6.6 DMSO = 二甲基亚砜

序号	**组件；部件**	根据检验报告书（COA）中的数据。		观察数据
		平板（用于培养细菌、细胞等的培养基表面）	RT	板；盘子；平板	RT
1
2
3
4
**背压阀**

内部检查

		数量；数目  理论上的；假设的  板；平板；盘子		**Tailing** （注：根据提供的术语“Tailing”，在制药行业技术文档中通常没有直接对应的标准术语或通用翻译。如果是指“尾部数据”或“尾随现象”，可以译为“尾部数据”或“尾随效应”；如果是指某种特定的工艺步骤或质量控制术语，可能需要根据上下文进一步确定。以下为两种可能的翻译：） 1. **“尾部数据”（指数据序列的末尾部分）**： *例如：* “The analysis focused on the ‘tailing’ of the mass spectrum to identify unknown components.”（分析重点关注质谱图的“尾部数据”以识别未知成分。） 2. **“尾随效应”（指某种系统或过程的持续影响）**： *例如：* “The ‘tailing’ effect in the production process could affect the quality of the final product.”（生产过程中的“尾随效应”可能会影响最终产品的质量。） 请根据具体上下文选择合适的翻译。		分辨率；分辨率度
日期 性能；表现；功效 检查；核对；核实	背压	苯 甲苯	甲苯/萘 邻苯二甲酸二乙酯	苯 甲苯	甲苯/萘 邻苯二甲酸二乙酯