1.0 目的
制定采用膜过滤法对样品进行无菌检查的程序。2.0 范围
适用于质量控制微生物实验室中对声称无菌的样品进行无菌检测。3.0 责任
受过培训的质量控制微生物学官员负责执行无菌检查，而微生物学实验室负责人则负责确保标准操作规程（SOP）得到正确执行。4.0 责任制
部门负责人5.0 程序/规程
5.1 一般说明与注意事项
5.1.1 请遵循标准操作规程（SOP），进行微生物检测区域的进出操作。 无菌检查 领域；范围；方面
5.1.2 确保所有无菌或已灭菌的物品都在其有效期/使用期限内，并且包装完好无损。如果发现任何包装损坏或完整性受到破坏，切勿使用这些物品。
5.1.3 确保所有将要使用的培养基和稀释剂都经过预培养处理。检查培养基的质量是否合格。 污染；杂质 或者造成物理损坏。对于 Fluid Thioglycollate Medium（流体硫糖胶培养基），如果培养基颜色变为粉红色（出现罗丹明环），且变色面积超过总量的三分之一，则不得再使用该培养基容器。
5.1.5 在每次无菌检查过程中，必须执行以下操作： 环境监测 按照标准操作规程（SOP）执行。
5.2 将材料转移至无菌检测区域和cRABS（封闭式洁净空气生物安全柜）
5.2.1 用于无菌测试的材料，如培养基、冲洗液或稀释剂，以及测试工具（如镊子、剪刀、带管路的平衡架排水盘、排水收集容器等），必须经过高压灭菌处理，然后从灭菌设备中取出并存放在无菌区域（缓冲室）内。
5.2.2 其他所有材料应按照以下方式进行转移：
5.2.2.1 将所有与无菌检测相关的材料，如样品、容器以及其他无菌配件，都存放在培养箱房间与LAL检测房间相连的传递箱内。
5.2.2.2 从LAL房间卸下材料，并将其存放在LAF中。
5.2.2.4 使用过滤后的消毒液对罐装包装及其他无菌配件的外表面进行消毒。
5.2.2.5 将所有材料转移到动态传递箱的开口处。 **缓冲区；缓冲空间** 确保动态传递箱处于开启状态。
5.2.2.6 从缓冲室卸下物料，并将其转移到无菌检测室。
5.2.3 按照标准操作规程（SOP）操作封闭式洁净室（cRABS）。
5.2.4 请准备好所有所需的材料，包括罐子、培养基容器、已灭菌的配件、以及过滤后的消毒液等。 70% IPA 将产品样品送至无菌检测室进行检测。
5.2.5 将除产品样品外的所有材料存放在 cRABS 传递箱中。
5.2.6 关闭 cRABS 传递箱，使用过滤后的 70% 异丙醇（IPA）擦拭材料的外表面进行消毒。然后打开紫外线灯，将材料暴露在紫外线下至少 15 分钟。
5.2.7 至少等待15分钟后，将材料从cRABS传递箱通过提供的通道转移到cRABS中。
5.2.8 对于样品，请将其存放在 cRABS 传递箱中，关闭传递箱，并使用过滤后的 70% 异丙醇对外部表面进行擦拭消毒。切勿开启（设备或系统）。 紫外线（UV light）让消毒剂彻底干燥。
5.2.9 将样品从 cRABS 传递箱通过提供的通道转移到 cRABS 中。
5.2.10 在测试之前，请确保每件物品上的消毒剂已经完全干燥，并且包装完好无损。
5.2.11 将排水收集容器牢固地连接到cRABS的排水端口上。
5.3 样品要求
5.3.1 容器数量
· 不超过100个容器的批次：需进行10%的抽样检查，或者至少检查4个容器，以数量较多者为准。
· 批量数量在100至500个容器之间：每批10个容器
· 批量超过500个容器时，需要召回2%的数量，或者至少20个容器，以较少者为准。
5.3.2 待检测样品的体积
容器内物
|
每种培养基的最低检测数量
|
少于1毫升
|
总内容
|
1至40毫升
|
内容减半，但总量不少于1毫升。
|
超过40毫升但少于100毫升
|
20毫升
|
100毫升或以上
|
含量为10%，但不少于20毫升。
|
注意：如果灌装体积超过10毫升，则需要将3个小瓶中剩余的样品合并用于细菌内毒素检测（检测前需将样品混合）。
5.4 使用 Steritest Equinox 系统进行无菌检查
5.4.1 按照标准操作规程（SOP）操作 Steritest Equinox 系统。确保所有连接都按照要求完成。
5.4.2 将已消毒的排水盘（带有连接的管路）安装在 Steritest Equinox 泵的右侧。将其侧向插入支撑结构中，直到听到咔嗒声，确认其已牢固固定。然后将管路连接到排水收集容器上。
5.4.3 按下开关按钮来启动泵。启动屏幕会显示出来，然后泵头会打开。
5.4.4 初始化完成后，通过旋转旋钮选择“手动测试”模式，选中该模式后再次按下旋钮以确认选择。
5.4.5 将 Steritest 采样罐从包装中取出，然后将两个罐子直立放置在排水托盘上。
5.4.6 将管子安装在泵头中：双手握住管子，轻轻向下拉，使其插入槽中。确认两根管子分别位于盖子右侧和左侧的凸起部分两侧。
5.4.7 确保导管位置正确，可以通过从左向右滑动再从右向左滑动来实现。如果导管无法自由滑动，请重新操作。
5.4.8 调整管子，确保管子在罐体一侧没有过度弯曲，并且在另一侧有足够的长度可以自由移动。
5.4.9 通过按下按钮来关闭泵头。 打开/关闭 按钮。
5.4.10 转动旋钮以改变泵的旋转速度：顺时针转动旋钮可提高速度，逆时针转动则降低速度。冲洗、产品过滤以及添加SCDM时，应将泵转速设置为55转/分钟或更低；而添加FTM时，转速应设置为45转/分钟以下。
5.4.11 在测试过程中，通过按下旋钮或使用脚踏开关来控制泵的开启/关闭状态。
5.4.12 打开装有瓶盖、塞子和管路夹子的包装袋，然后将它们放入空罐子的塑料托盘内。
5.4.13 如果待测试的产品是冻干制剂，那么请取下稀释管上LVP型通气针头的保护盖。在无菌条件下，将LVP型针头插入装有无菌稀释液的瓶子中。如果稀释管的滚轮夹子是打开的，请将其关闭。将稀释液瓶放置在瓶架中。 **倒置位置**.
5.4.14 **预润湿** 膜过滤器
5.4.14.1 请取下产品测试针头的保护帽，然后将针头插入装有100毫升冲洗液或稀释液的瓶子中。
5.4.14.2 使用脚踏开关启动泵，然后倒置瓶子，将瓶子中的所有内容物转移到两个罐中。
5.4.14.3 将红色盖子无菌地盖在每个罐子的排气口上，以便冲洗液能够开始通过膜进行过滤。
5.4.15 产品检测 – 小瓶中的液体制剂
5.4.15.1 在膜预润湿完成后，将针头从冲洗液瓶中取出，并插入第一个产品小瓶中。
5.4.15.2 将小瓶倒置，用脚踏开关启动泵，然后将内容物转移到储罐中。
5.4.15.3 从第一个小瓶中取出针头，将其插入第二个小瓶中，然后倒置第二个小瓶，并通过脚踏开关启动泵，将所有内容物转移到储罐中。
5.4.15.4 重复上述步骤，直到该批次中的最后一个样品小瓶完成过滤。
注意：如果需要，需在产品小瓶上插入排气针，以便空气流通并防止产生真空。
5.4.16 产品检测 – 小瓶装可溶性粉末冻干产品)
5.4.16.1 在膜预润湿完成后，将针头从冲洗液瓶中取出，并插入第一个产品小瓶中。
5.4.16.2 将小瓶保持直立状态，打开稀释液管路的滚轮夹子，让所需体积的液体与制剂混合（即进行复溶），然后关闭夹子。
5.4.16.3 摇晃小瓶，彻底将产品重新溶解（或配制）。
5.4.16.4 将小瓶倒置，用脚踏开关启动泵，然后将所有内容物转移到罐中。
5.4.16.5 从第一个小瓶中取出针头，将其插入第二个产品小瓶中。重复上述的溶解和过滤步骤。
5.4.16.6 重复上述步骤，直到该批次中的最后一个样品小瓶完成过滤。
5.4.17 管路、罐体和膜的冲洗
5.4.17.1 将针头插入第一瓶冲洗液（0.1% 肽水）中，并将瓶子竖立放置。 如果需要，可以在产品小瓶上插入空气排放针头，以便释放空气并防止形成真空。
5.4.17.2 将罐体顶部通风口的红色盖子取下，然后放入罐体袋中或放在工作台上。
5.4.17.3 打开泵，然后将瓶子倒置放置，或者将其倒置放入瓶架中。
5.4.17.4 将100毫升的冲洗液泵入每个罐中，然后关闭泵。将装有冲洗液的罐子直立放置在操作台上。
5.4.17.5 请无菌地将红色盖子重新安装到罐子的顶部通风口上。同时，将针头保留在瓶子里。
5.4.17.6 如果需要，将罐子从排水盘上取出，并轻轻旋转，以清除罐内壁附着的任何产品残留物。
5.4.17.7 启动泵，让100毫升的冲洗液缓慢通过空罐子进行过滤。
5.4.17.8 重复上述步骤，对总共300个冲洗液过滤器进行操作，这些过滤器需要通过管道、储罐和膜进行冲洗。
如果冲洗液及其用量与验证结果不符，应按照验证结果的要求进行更换。
5.4.18 向罐体中添加培养基（或介质）
5.4.18.1 请将罐体通风口上的红色盖子去掉。
5.4.18.2 从排水盘上取下一个罐子，将一个黄色塞子无菌地插入罐子的底部出口端口。在插入塞子的同时，将其旋转半圈以牢固地固定它。然后将罐子放回排水盘，并对另一个罐子重复此操作。
5.4.18.3 用连接在管子上的夹子夹住其中一根管子。将这个夹子尽可能靠近针刺装置的Y型连接器放置。
5.4.18.4 将针头从冲洗液瓶中取出，插入第一个培养基瓶中。如有需要，将空气排放针头插入培养基瓶中以释放空气。
5.4.18.5 打开泵，将瓶子倒置或将其放入倒置瓶架中。（对于流式硫糖胶体培养基，保持泵速低于45转/分钟以减少气泡产生。）
5.4.18.6 当将100毫升培养基转移到罐中时，需将瓶子直立放在工作台上，并在管内无培养基残留时关闭泵。
5.4.18.7 松开被夹住的管子，然后像之前一样夹住另一根管子（即介质刚刚流过的那根管子）。
5.4.18.8 首先取出第一个培养基瓶中的针头，将其插入第二个培养基瓶中。将培养基转移到第二个容器中，然后当管路中不再有培养基时关闭泵。
5.4.18.9 将两条管线的连接点固定在距离罐体入口大约6厘米的位置。
5.4.18.10 通过按下“打开/关闭”按钮来启动泵，然后将管子从泵头上取下。
5.4.18.11 使用无菌剪刀，在夹子上方约2厘米的位置剪断管子。
5.4.18.12 将管子折叠后插入罐体的顶部通风口；然后将罐体从排水盘上取下并放在一旁。
5.4.18.13 将针头从瓶子里取出，然后将管子放入废弃物品箱中。
5.4.18.14 在罐子上标注产品名称、批号/活性成分批号、培养基批次号、日期以及分析人员的姓名首字母。并将这些详细信息记录下来。
5.5 制剂阴性对照试验
5.5.1 在每次无菌检查过程中，需进行一次阴性对照测试，以验证培养基和稀释剂的无菌状态以及检查过程中的环境条件是否合格。
5.5.2 按照以下步骤进行测试：将100毫升0.1%无菌蛋白胨水视为产品，并执行测试过程中可能发生的所有最大程度操作：
5.5.2.1 如果在测试过程中对冻干产品进行的最大操作量是允许的，那么所有与冻干产品测试相关的步骤都必须针对阴性产品对照品（即未受污染的产品）来进行。
5.5.2.2 如果测试过程中对液体产品的最大操作次数是有限的，那么对于阴性产品控制，也必须执行所有与液体产品相关的步骤。
5.6 物料的转移与处置
5.6.1 测试完成后，将所有配件、已使用的样品容器以及空的培养基稀释剂容器转移至…… 高压灭菌器 从缓冲室通过传递箱到高压灭菌室的区域
5.6.2 将罐子通过动态传递箱从缓冲室转移到LAL测试室，然后再通过传递箱从LAL测试室转移到培养室进行培养。
5.6.3 使用过滤后的消毒剂清洁 cRABS（封闭式洁净室辅助系统）。通过将足够量的消毒剂溶液输送到端口和管道中，对用于收集废液的端口和管道进行消毒，确保所有表面都接触到消毒剂溶液。
5.6.4
如果排水收集管发生泄漏或连接断开，请立即关闭阀门。 不锈钢 通过打开TC夹具来取出容器，然后将其转移至高压灭菌器中进行灭菌处理。 **传递箱（Pass Box）** 从缓冲室取出。
5.6.5 通过添加适当的失活剂使容器中的溶液失活，并按照标准操作规程（SOP）进行处置。
5.7 孵育与观察
5.7.1 将大豆酪蛋白消化培养基（SCM）的无菌测试容器置于22.5 ± 2.5°C的温度下培养14天，将流体硫糖胶培养基（FTG）的无菌测试容器置于32.5 ± 2.5°C的温度下培养14天。
5.7.2 在14天的培养期间，每天都要检查是否有微生物生长的迹象，并记录结果。如果14天内没有发现微生物生长，则认为产品符合要求。由于“th”并不是一个常见的英文单词或短语，在标准的语言资源中无法找到其准确的中文翻译。如果您能提供更多的上下文或说明它的具体含义，我将很乐意帮助您进行翻译。 如果某天是每周的休息日或节假日，那么可以在下一个工作日进行相应的操作或检查。
5.7.3 在观察过程中，如果发现任何明显的生长迹象（如浑浊度增加、出现沉淀物、棉絮状生长物，或者与阴性对照相比，培养基在旋转时从底部产生漩涡状物质），则应立即移除这些培养罐，并继续进行后续操作。 识别/调查 按照当天观察时的标准操作规程（SOP）执行。
5.7.4 培养完成后，按照规定处置培养基。 培养基处置的标准操作规程.
5.8 接受标准
5.8.1 如果在培养期结束时，任何无菌测试培养基中都没有检测到微生物生长的迹象，那么被测试的样品/产品就符合无菌要求。
5.8.2 如果在任一培养基中检测到微生物生长的迹象，那么被测试的样品/产品不符合无菌测试的要求，除非能够明确证明测试失败是由于与被测试样品/产品无关的原因造成的。只有满足以下一个或多个条件时，该测试才可被视为无效：
5.8.2.1 无菌检测区域的微生物监测结果显示存在问题。
5.8.2.2 对所涉及测试过程中使用的检测程序进行审查后发现了一个缺陷。
5.8.2.3 在阴性对照样本中检测到了微生物生长。
5.8.2.4 在确定从测试样品中分离出的微生物的身份后，该微生物（或这些微生物）的生长情况可以明确归因于进行无菌检查程序时所使用的材料或技术存在缺陷。
5.8.3 如果测试结果被判定为无效，则必须使用与原始测试相同数量的样品重新进行测试。
5.8.4 如果在重复测试中没有发现微生物生长的证据，则所检测的产品符合无菌测试的要求。
5.8.5 如果在重复测试中发现微生物生长，则该制剂不符合无菌测试的要求。
相关： 用于培养真菌和细菌的常见培养基的孵育条件
6.2 cRABs - 封闭式限制访问屏障系统
6.3% - 百分之六点三
6.4 UV - 紫外线
6.5 °C - 摄氏度
6.6 毫升
6.7 SCA - 大豆酪蛋白消化琼脂
6.8 SCM - 大豆酪蛋白消化培养基
相关： 用于培养真菌和细菌的常见培养基的孵育条件
6.0 缩写词
6.1 标准操作规程（Standard Operating Procedure）6.2 cRABs - 封闭式限制访问屏障系统
6.3% - 百分之六点三
6.4 UV - 紫外线
6.5 °C - 摄氏度
6.6 毫升
6.7 SCA - 大豆酪蛋白消化琼脂
6.8 SCM - 大豆酪蛋白消化培养基