方法：琼脂杯法
培养基 营养琼脂
**检测方法；培养基** :
序号
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原料药；配料
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数量
/ 100 毫升
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1
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二钾磷酸氢盐（纯度等级：G.R）
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0.7克
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2
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磷酸二氢钾（纯度等级：G.R）
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0.3克
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3
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柠檬酸钠（化学纯）
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0.05克
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4
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硫酸镁（化学纯）
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0.01克
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5
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硫酸铵（化学纯）
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0.1克
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6
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**氯化钠（纯度等级：A.R）**
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0.005克
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7
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蒸馏水
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100毫升
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将各成分分别溶解，以避免沉淀；然后摇匀并混合溶液。如有必要，将溶液的 pH 值调整至 7.0 ± 0.1。接着加入 1.5 克琼脂粉。 对...进行灭菌处理 在15磅的压力下保持20分钟。
葡萄糖溶液 使用蒸馏水配制40%（重量/体积）的葡萄糖（A.R.）溶液。
在15磅的压力下进行15分钟灭菌处理，然后冷却并储存在冰箱中。
接种物；培养基 :
营养肉汤 – 1.3克
蒸馏水 - 100毫升
将溶液的 pH 值调整至 7.0 ± 0.1，然后分装到带螺旋盖的试管中。接着在 15 磅的压力下进行高压灭菌 15 分钟，之后冷却并储存在 4°C 的环境中。
种子菌种的制备：
使用细菌接种环，从新鲜的琼脂斜面上取生长菌株接种到含有培养基或NB（营养琼脂）的试管中，然后在37°C下培养16-18小时。之后将样本储存在4°C下。需要将接种后的培养基在2200转/分钟的速度下离心20分钟，再将细胞悬浮在5毫升的无菌生理盐水中，同样在2200转/分钟的速度下离心10分钟，然后弃去上清液。重复此过程。最后，将细胞悬浮在1毫升的无菌生理盐水中并充分混合，作为接种液使用。
制备检测板：
向100毫升已灭菌并冷却至45°C的维生素B12测定培养基中，加入1.0毫升40%的无菌葡萄糖溶液，充分摇匀。然后加入1毫升大肠杆菌（E. coli）的接种物。200 达到所需的厚度。轻轻但彻底地混合。将25至30毫升的接种培养基分配到无菌培养皿中。让培养基凝固后，将其储存在冰箱中直至使用。培养皿应在当天或次日使用。
（*补充说明：此为实验操作步骤的详细说明。） the 接种物悬浮液 将；愿意；将会 应依赖于微生物学家进行的验证结果。
琼脂杯的制备：
使用直径为8.0毫米的标准钻头。将钻头浸入...
异丙醇 将钻孔器中剩余的异丙醇用火焰烧掉，
充分冷却钻孔器后，在预先接种了菌种的琼脂平板上钻孔。每个平板上钻四个孔。
标准储备溶液的制备：
准确称取10毫克结晶状的氰钴胺粉末（深红色），将其转移到10毫升容量瓶中，并补足体积至10毫升。取1毫升该溶液，用水稀释至100毫升。在361纳米波长下测量该溶液的吸光度值，根据相关公式计算其浓度。1 将维生素B的浓度精确计算为0.207%。12/毫升（milliliter）
计算：
O.D. at 361
mcg/ml.
0.207
根据上述要求，计算出约10毫升的溶液，然后将其稀释至100毫升，以获得1微克/毫升的浓度。这是1微克/毫升的储备溶液，需在一个月内使用完毕。
标准稀释液的制备：
取5毫升标准储备溶液，稀释至50毫升，作为高浓度标准品（Standard High, SH）；再取5毫升高浓度标准品稀释液，稀释至50毫升，作为低浓度标准品（Standard Low, SL）。
**测试稀释液的制备**
称取样品，使其重量等于5微克（mcg），然后转移到一个50毫升的容量瓶中。接着加入（其他成分）。 蒸馏水**翻译结果：**
剧烈摇晃后，用蒸馏水（TH）将溶液稀释至50毫升；再取5毫升该溶液，用蒸馏水进一步稀释至50毫升[TL]。**标准稀释液和测试稀释液的使用方法：**使用无菌微量移液器吸取100微升不同稀释度的溶液，分别加入不同的培养皿中。在每个培养皿上标注相应的稀释度，并将培养皿置于低温环境（约10°C）下放置10-20分钟以促进扩散。
平板培养：将平板在30-37°C的温度下培养过夜（18-24小时）。
直径测量
从三个不同的方向测量每个生长区域的直径。记录下每一个测量结果。
计算：
总结三次单独稀释实验的结果。
配方；配方成分
**含量百分比（Assay %）= Antilog(2 ± a log I)**
“Where...”
(TH + TL) - (SH + SL)
a =
(TH - TL) + (SH - SL)
稀释比例 = I = 1:10
log I = 1
计算；核算
实际百分比（Actual %）
= 平均值百分比（Mean %） × 时间因子（Ft） × 系数因子（Fs）
待采集的样本
Ft = --------------------------
取样完成
标准待采用
Fs = ---------------------
标准已采纳。
实际百分比 × 实际含量（考虑到超量情况，例如2.5%）
mcg /
5ml =
100
微克（mcg）/ 5毫升（5ml）
洛杉矶的百分比 = ---------------------
X × 100
L.A.[1]
mcg
稀释方案
A 10毫克 → 10
毫升（ml） → 1毫克/毫升（1 mg/ml）
B
1毫升（A） ------->
100毫升 10微克/毫升
库存：
10毫升（B）→ 100
毫升 1微克/毫升
SH
5 ml（库存）----------> 50
ml
0.1 mcg/ml
SL 5 毫升
(SH) ----------> 50
毫升 0.01 微克/毫升
测试
稀释液：
TH
样品浓度调整至5微克（mcg）→ 50微克
体积：0.1毫升（ml）
浓度：0.1微克/毫升（mcg/ml）
**TL**
（注：根据提供的信息，“TL”似乎是一个缩写或特定术语，没有明确的中文对应词。如果它是某个特定领域（如技术、行业术语）的缩写，建议提供更多上下文以便提供更准确的翻译。如果它是一个普通词汇，可能需要根据具体含义进行翻译。） 5 毫升（TH）
----------------> 50
毫升 0.01 微克/毫升