凝胶凝块法（Lal Test）的标准操作规程（SOP）

1.0 目标

为了更好地使用凝胶凝块法（Gel-Clot Method）进行LAL测试，并确保测试过程的准确性无误，需要明确该测试的具体操作程序。

2.0 范围

该程序适用于采用凝胶凝块法（Gel-Clot method）进行LAL（细菌内毒素）检测。

3.0 责任

3.1 职位：技术助理/执行员
3.2 检查：执行人员/经理

4.0 责任制

部门负责人。

5.0 程序

5.1 所需材料
鲎变形细胞溶解物（浓度为0.125或0.06 EU/ml）
b. 受控标准的内毒素水平。
c. 无热原的水。
d. 搅拌混合（使用旋涡混合器进行）。
e. 加热块。
f. 微量移液器和无热原吸头
g. 烤箱。
h. pH 计
i. 温度计。
j. 体积瓶、锥形瓶、移液管、大试管、10个75毫米长的试管。
k. 冰箱。
5.2 除热原程序
5.2.1 根据标准操作规程（SOP），对所有用于测试的玻璃器皿进行去热原处理。
5.2.2 标准内毒素对照品的复溶
5.2.3 用...重新配制原料药中的细菌内毒素 热原 证书中规定的游离水分含量。有效期为4周。
5.2.4 在复溶后，将内毒素小瓶中的悬浮液使用涡旋混合器至少混合5分钟，使其均匀，然后记录在附录III中。该复溶后的溶液应储存在推荐的储存条件下，并在4周内使用（或按照标签上标注的时间使用），之后应予以丢弃。
5.2.5 准备内毒素稀释液，其浓度分别为标示灵敏度的1/2（λ/2）、2倍（2λ）和4倍（4λ）。
每次稀释后，使用涡旋混合器搅拌1分钟；该溶液可保存最多1周，之后需重新从储备液中配制新的溶液。
5.3 制剂稀释：
5.3.1 计算液态产品的最小批量（MVD）和原材料的最小批量（MVC）。

5.3.3 确定稀释比例，需要使用2 MVC还是4 MVC，根据实际情况选择。
5.3.4 使用无热原的水来复溶（CSE）裂解物，并稀释样品。
5.3.6 请对 10x75 毫米的试管进行适当标记，分别标注为阳性对照、产品阳性对照、阴性对照和样品。
5.3.7 该测试需重复进行两次（即进行两次实验）。
5.4 程序：
5.4.1 使用微量移液器和无热原吸头，在样品管和产品阳性对照管（PPC）中分别加入0.05毫升的样品（MVD/2或2 MVC，以实际需要为准）。
5.4.2 向样品管和阳性对照管中各加入0.05毫升的无热原水。
5.4.3 向PPC管和阳性对照管中加入0.05毫升浓度为2 λ的CS内毒素溶液。
5.4.4 在将内毒素稀释液加入试管之前，先将其涡旋混合1分钟。
5.4.5 从冰箱中取出裂解液试剂，按照标签上的说明使用无热原水进行复溶。

5.4.6 在加入无热原水后，用双手轻轻旋转裂解液1-2分钟，注意不要产生泡沫。
5.4.7 控制液：即 0.1 毫升空白缓冲液（LRW）+ 0.1 毫升裂解液
5.4.8 向每个试管中加入0.1毫升的裂解液，轻轻摇晃试管几秒钟，然后将试管放入预热好的加热块中。加热块应保持开启状态，温度控制在36°C至38°C之间。
5.4.9 将样品置于培养箱中孵育60至62分钟，期间保持不动（即不要移动或干扰样品）。
5.4.10 一小时后，通过将试管缓慢倒置（180°角度）来观察其变化。
5.4.11 如果观察到坚固的凝胶状物质：则结果为阳性。
5.4.12 如果未观察到半凝胶或凝胶的形成，则结果为阴性。
5.4.13 所有试管的检测结果应与阴性对照管一致，显示阴性结果；阳性对照管和产品阳性对照（PPC）管应显示阳性结果。
5.5 结果解读：

高级编号	变更控制		正向控制（Positive Control）		样品		PPC		解释；解读；说明
	1	2	1	2	1	2	1	2
1	-ve	-ve	“+ve”这个术语在制药行业中通常表示“积极的”或“正面的”含义，用于描述某种特性、结果或行为是符合质量标准或预期的。例如，在质量管理体系中，“+ve”可能用于表示某个过程或结果处于可接受范围内（即“符合规格”或“未超出趋势”）。这个术语通常用于非正式的沟通或内部报告中，以强调某种情况的正面性。	“+ve” （注：根据提供的上下文，“+ve”似乎是一个拼写错误或非标准术语。如果它代表“positive”（积极的、正面的），则可译为“积极的”；如果它是其他含义，需要更多信息才能准确翻译。）	-ve	-ve	“+ve” （注：根据提供的上下文，“+ve”似乎是一个拼写错误或非标准术语。如果它代表“positive”（积极的、正面的），则可译为“积极的”；如果它是其他含义，请提供更多背景信息以便准确翻译。）	“+ve”这个术语在制药行业中通常表示“积极的”或“正面的”含义，用于描述某种特性、结果或行为是符合质量标准或预期的。例如，在质量管理体系中，“+ve”可以用来描述某个过程或结果符合GMP（药品生产质量管理规范）的要求。	通过测试。
2	-ve	-ve	“+ve”这个术语在制药行业中通常表示“积极的”或“正面的”含义，类似于英文中的“positive”或“positive”（非正式用法）。它常用于描述某种特性、结果或态度是符合标准或预期的。例如，在质量管理体系中，如果某个检测结果被标记为“+ve”，则意味着该结果在质量标准范围内。	“+ve”这个术语在制药行业中通常表示“积极的”或“正面的”含义，类似于英文中的“positive”或“positive”（非正式用法）。它可能用于描述某种特性、结果或态度是积极的、符合标准的或令人满意的。例如，在质量控制（QC）或质量保证（QA）的上下文中，如果某个检测结果被标记为“+ve”，意味着该结果符合预设的合格标准。	-ve	“+ve”这个术语在制药行业中通常表示“积极的”或“正面的”含义，用于描述某种特性、结果或行为是符合质量标准或预期的。例如，在药品生产中，如果某个参数的检测结果处于“+ve”范围内，就意味着该参数是合格的。这个术语常用于质量管理体系（如GMP）中的评估和报告。	“+ve”这个术语在制药行业中通常表示“积极的”或“正面的”含义，类似于英文中的“positive”或“positive”（非正式用法）。它可能用于描述某种特性、结果或态度是积极的、符合标准的或令人满意的。例如，在质量管理体系中，如果某个检测结果符合规定标准，可能会被标记为“+ve”。	“+ve”这个术语在制药行业中通常表示“积极的”或“正面的”含义，类似于英文中的“positive”或“positive”（非正式用法）。它可能用于描述某种特性、结果或态度是积极的、符合标准的或令人满意的。例如，在质量控制（QC）或质量保证（QA）的上下文中，如果某个检测结果被标记为“+ve”，则表示该结果符合预期的质量标准。	**重复测试**
3	-ve	-ve	“+ve”通常表示“积极的”或“正面的”含义，类似于英文中的“positive”或“positive”。在制药行业中，这个术语可能用于描述某种特性、结果或态度是符合质量标准或预期的。例如，在质量管理体系中，“+ve”可以用来表示某个检测结果在规格范围内（即“OOS”或“OOT”为“-ve”），或者表示某个过程或操作是按照标准程序进行的（即“SOP”得到遵守）。	“+ve” （注：根据提供的上下文，“+ve”似乎是一个拼写错误或非标准术语。如果它代表“positive”（积极的、正面的），则可译为“积极的”；如果它是其他含义，需要更多信息才能准确翻译。）	“+ve”这个术语在制药行业中通常表示“积极的”或“正面的”含义，类似于英文中的“positive”或“positive”（非正式用法）。它可能用于描述某种特性、结果或态度是积极的、符合标准的或令人满意的。例如，在质量控制（QC）或质量保证（QA）的上下文中，如果某个检测结果被标记为“+ve”，则意味着该结果符合预设的合格标准。	“+ve”这个术语在制药行业中通常表示“积极的”或“正面的”含义，用于描述某种特性、结果或趋势是符合预期或标准的。例如，在质量控制（Quality Control, QC）的上下文中，如果某个检测结果被标记为“+ve”，则表示该结果在质量标准范围内，是可接受的。	“+ve” （注：根据提供的上下文，“+ve”似乎是一个拼写错误或非标准术语。如果它代表“positive”（积极的、正面的），则可译为“积极的”；如果它是其他含义，需要更多信息才能准确翻译。）	“+ve”通常表示“积极的”或“正面的”含义，类似于英文中的“positive”或“positive”。在制药行业中，这个术语可能用于描述某种特性、结果或态度是符合质量标准或预期的。例如，在质量管理体系中，“+ve”可以用来表示某个检测结果在规格范围内（即“within specification”），或者表示某个过程或操作是按照标准操作规程（SOP）进行的。	测试未通过。
4	-ve	-ve	“+ve”通常用于表示某种特性或状态是积极的、正面的或符合要求的。在制药行业中，这个术语可能用于描述产品、过程或数据符合质量标准或法规要求。例如，在质量管理体系中，“+ve”可以表示某个检测结果在规格范围内（即“Out-of-Specification”为“OOS”），或者表示某个过程或设备已经通过了确认（如“IQ、OQ、PQ”）。具体含义需要根据上下文来确定。	“+ve”通常表示“积极的”或“正面的”含义，类似于英文中的“positive”或“positive”。在制药行业中，这个术语可能用于描述某种特性、结果或态度是符合质量标准或预期的。例如，在质量管理体系中，“+ve”可以用来表示某个检测结果在规格范围内（即“OOS”或“OOT”为“-ve”），或者表示某个过程或操作是按照标准程序进行的（即“SOP”得到正确执行）。	-ve	-ve	-ve	-ve	使用 4 倍浓度的 CSE 重新进行测试。
5	“+ve” （注：根据提供的上下文，“+ve”似乎是一个拼写错误或非标准术语。如果它代表“positive”（积极的、正面的），则可译为“积极的”；如果它是其他含义，需要更多信息才能准确翻译。）	“+ve”通常表示“积极的”或“正面的”含义，类似于英文中的“positive”或“positive”。在制药行业中，这个术语可能用于描述某种特性、结果或态度是符合质量标准或预期的。例如，在质量管理体系中，“+ve”可以用来表示某个检测结果在规格范围内（即“OOS”或“OOT”为“-ve”）。	“+ve”这个术语在制药行业中通常表示“积极的”或“正面的”含义，类似于英文中的“positive”或“positive”（非正式用法）。它常用于描述某种特性、结果或态度是符合标准或预期的。例如，在质量管理体系中，如果某个检测结果被标记为“+ve”，则意味着该结果在质量标准范围内。	“+ve”通常表示“积极的”或“正面的”含义，类似于英文中的“positive”或“positive”。在制药行业中，这个术语可能用于描述某种特性、结果或态度是符合质量标准或预期的。例如，在质量管理体系中，“+ve”可以用来表示某个检测结果在规格范围内（即“OOS”或“OOT”为“-ve”）。	“+ve”通常用于表示某种特性或状态是积极的、正面的或符合要求的。在制药行业中，这个术语可能用于描述产品、过程或数据符合质量标准或法规要求。例如，在质量管理体系中，“+ve”可以表示某个检测结果在规格范围内（即“Out-of-Specification”为“OOS”），或者表示某个过程或设备已经通过了确认（如“IQ、OQ、PQ”）。具体含义需要根据上下文来确定。	“+ve”这个术语在制药行业中通常表示“积极的”或“正面的”含义，类似于英文中的“positive”或“positive”（非正式用法）。它可能用于描述某种特性、结果或态度是积极的、符合标准的或令人满意的。例如，在质量控制（QC）或质量保证（QA）的上下文中，如果某个检测结果被标记为“+ve”，则表示该结果符合预期的质量标准。	“+ve”通常用于表示某种特性或状态是积极的、正面的或符合要求的。在制药行业中，这个术语可能用于描述产品、过程或数据符合质量标准或法规要求。例如，在质量管理体系中，“+ve”可以表示某个检测结果在规格范围内（即“Out-of-Specification”为“OOS”），或者表示某个过程或设备已经通过了确认（如“IQ、OQ、PQ”）。具体含义需要根据上下文来确定。	“+ve”通常用于表示某种特性或状态是积极的、正面的或符合要求的。在制药行业中，这个术语可能用于描述产品、过程或系统的质量状态，例如“+ve results”（合格的结果）或“+ve compliance”（合规的状态）。具体含义需要根据上下文来确定。	用其他无热原的水重复进行测试。
6	-ve	-ve	-ve	-ve	-ve	-ve	-ve	-ve	使用新制备的CSE重新进行测试。

5.6 标记的LAL试剂灵敏度的确认
5.6.1 频率：每个新批次。
5.6.2 准备了三种内毒素稀释液：一种相当于标示灵敏度（λ）的稀释液，另一种是标示灵敏度的一半（λ/2），另一种是标示灵敏度的四分之一（λ/4），还有一种是标示灵敏度的两倍（2λ）。
5.6.3 取四个10x75mm的试管，每个试管分别装有四种不同灵敏度的样品，并分别标记为2λ、λ、λ/2和λ/4。
5.6.4 在试管中加入0.1毫升的无热原水作为阴性对照。
5.6.5 在每个试管中加入0.1毫升的每种CS内毒素稀释液，除了–ve对照管。
5.6.6 在每个试管中加入0.1毫升的LAL试剂（裂解液）。
5.6.7 将所有试管剧烈涡旋几秒钟，然后将其放置在预先开启并保持在36°C至38°C之间的加热块中。
5.6.8 将样品置于培养箱中孵育60-62分钟，期间保持不动（即不要移动或干扰样品）。
5.6.9 一小时后，将试管缓慢倒置（180°），观察结果并记录下来。
5.6.10 确定每种内毒素稀释液的终点（Endpoint），即在该灵敏度下测试能够首次显示出阳性结果（+ve result）的浓度。
5.6.11 使用以下公式计算几何平均值。
5.6.12 将结果记录在附录II中。
5.6.13 接受标准：
几何平均值是标记灵敏度的±1倍或2倍稀释值。也就是说，如果标记灵敏度为0.125，那么几何平均值将在0.06到0.25之间。

6.0 缩写

MVD = 最大有效稀释度
MVC = 最大有效浓度
CSE = 细菌内毒素控制标准
PPC = 产品阳性对照
SOP = 标准操作规程

附件一

质量控制部门

页码：1/2

附件一

质量控制部门

页码：2/2

附录 - II

质量控制部门

标记的LAL试剂灵敏度的构象