1.0 目的
制定用于验证消毒/清洁程序有效性的逐步操作流程。2.0 范围
这适用于微生物实验室。3.0 责任
微生物学家4.0 责任制
部门主管5.0 程序
5.1 悬浮液制备方法
5.1.1 为了确定测试浓度和接触时间，通常采用悬浮法。悬浮法能够在精确的实验条件下估算消毒剂的体外杀菌活性，这些条件包括……- 微生物菌株
- 接种液的制备
- 接种量与消毒剂用量
- 温度
- 消毒剂浓度与接触时间
- 干扰物质（如有）
5.1.2 培养液的制备
准备以下微生物的稀释液：枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、白色念珠菌（Candida albicans）和黑曲霉（Aspergillus niger）。 环境隔离 这将产生10个。5 达到106 从原始培养悬浮液中计算，每毫升含有多少个细胞。5.1.3 悬浮液检测
5.1.3.1 准备10毫升用于测试的稀释液。 无菌蒸馏水.5.1.3.2 将试管剧烈振荡（涡旋）1.0分钟。
5.1.3.3 向含有10毫升的测试样品中加入0.1毫升的任意一种培养物。5 达到106 细胞最终浓度应为104 达到105 每管细胞数。
5.1.3.4 将来自第一支试管的测试结果视为“0”分钟，并分别记录5分钟、10分钟和15分钟的接触时间。
5.1.3.5 在规定的接触时间后，将样品通过0.45微米的过滤器进行过滤。 膜过滤器.
5.1.3.6 使用0.1%无菌蛋白胨水或无菌水，分别进行三次每次100毫升的洗涤。
5.1.3.7 使用无菌镊子将膜取出后，将其放置在大豆酪蛋白消化琼脂培养基上。
5.1.3.8 将细菌培养物在30-35°C下培养48小时，将真菌培养物在20-25°C下培养3至5天。
5.1.3.9 孵育后，统计膜上存在的菌落数量。
5.1.3.10 记录菌落的数量。
5.1.3.11 这将是暴露培养物的最终计数结果。
5.1.3.12 选择那些菌落计数最少或为零的平板。
5.1.3.13 对所有待检测的培养物均采用相同的方法进行操作。
5.1.3.14 使用时的接触时间 消毒剂 将根据结果来制定相应的措施，这些结果将显示最低的计数值。
5.1.4 表面喷洒/擦拭法
5.1.5.1 为了确定……的有效性 抗菌活性 采用喷雾/擦拭方法进行检测。以下表面将用于测试。- 不锈钢
- 环氧树脂
- **小组；委员会**
- 地板；地面
- PU漆墙面
- 玻璃表面
5.1.5 培养悬浮液的制备
参考第5.1.2点。5.1.6 通过表面喷洒/擦拭方法确定消毒剂的效力
5.1.6.1 取一块具有不同表面的板子，例如不锈钢（SS）表面…… 环氧树脂洁净室内的工作台面板，其表面积为25平方厘米。2
5.1.6.2 从之前确定的悬浮液中取出10个样本（或单位）。5 达到106 将每毫升细胞接种到上述不同表面上的一种培养物中。
5.1.6.3 使用无菌刮刀将培养物均匀涂抹在表面上。
5.1.6.4 保持原样；不要更改。 LAF bench 用于干燥。
5.1.6.5 在干燥暴露时间结束后：(a) 喷洒消毒剂；(b) 用擦拭法对表面进行消毒。
5.1.6.6 允许表面在通常的存放时间内保持被消毒的状态。 **洁净室** 在...期间；在...时候 卫生；清洁；消毒 （在洁净室内，必须严格遵守规定的卫生操作程序。）
5.1.6.7 使用一根湿润的无菌拭子，轻轻擦拭该表面的所有区域。
5.1.6.8 将拭子放入含有无菌生理盐水的试管中。 立即分析.
5.1.6.9 将试管轻轻涡旋5.0分钟。
5.1.6.10 使用0.45微米滤膜对样品进行无菌过滤。
5.1.6.11 使用0.1%无菌蛋白胨水或无菌水，分别进行三次每次100毫升的洗涤。
5.1.6.12 在使用无菌镊子进行过滤后，取出膜并将其放置在大豆酪蛋白消化琼脂培养基上。
5.1.6.13 将细菌培养物在32.5 ± 2.5 °C下培养2天，将真菌培养物在22.5 ± 2.5 °C下培养5天。
5.1.6.14 孵育后，统计膜上存在的菌落数量。
5.1.6.15 对所有待测试的培养物及各种消毒剂，均按照相同的方法进行处理。
6.0 缩写词
6.1 标准操作规程（Standard Operating Procedure）6.2% - 百分之六点二
6.3 °C - 摄氏度
另请参阅： 消毒剂效力的验证方案