1.0 目标
制定用于对设备表面拭子样本进行微生物分析的程序。2.0 范围
本标准操作规程（SOP）适用于质量控制部门。3.0 责任
微生物学家4.0 责任制
质量保证高级经理5.0 程序
5.1 按照相关程序，从设备表面采集拭子样本。 拭子样本采集的标准操作规程（SOP） 以及 立即进行分析。.5.2 下面给出了用于检测拭子样本中总微生物数、酵母菌和霉菌数量以及病原体的分析方法。
5.3 总微生物计数
5.3.1 取四个无菌培养皿，然后以无菌操作将1毫升样品分别转移到每个培养皿中。5.3.2 向上述两个培养皿中各加入20毫升无菌的、熔化的大豆酪蛋白消化琼脂（Soybean Casein Digest Agar），冷却至40-45ºC，然后让其凝固。
5.3.3 向另外两个培养皿中加入20毫升无菌的、熔化的Saborauds琼脂（温度控制在40-45ºC之间），然后让其凝固。
5.3.4 将大豆酪蛋白消化琼脂平板在30-35ºC下培养5天（用于细菌计数），将Saborauds琼脂平板在20-25ºC下培养5天（用于真菌计数）。
5.3.5 在培养期结束时，统计形成的菌落数量，并报告所得结果。
5.4 酵母和霉菌计数
5.4.1 采用与总菌数计数相同的方法，但此次使用的培养基为无菌的、熔融的马铃薯葡萄糖琼脂（sterile, molten Potato Dextrose Agar）。5.4.2 在培养期结束时，统计形成的菌落数量，并报告所得结果。
5.5 大肠杆菌检测
5.5.1 将1毫升样品转移到50毫升无菌营养肉汤中，然后在37ºC下培养24小时（富集培养I）。5.5.2 将1毫升的富集培养液I转移到含有5毫升无菌MacConkeys肉汤和一支倒置的Durham管的无菌试管中，然后在35-37ºC下培养48小时。
5.5.3 如果观察到酸的产生和气体的释放（试管内容物变黄，并且在杜汉姆管中看到气泡），则需要进行二次测试。
5.5.4 如果没有观察到酸和气体的产生，则该测试结果符合大肠杆菌不存在的要求。
5.5.5 在二次测试中，将1毫升一次测试的样品加入以下培养基中： a) 一个含有5毫升无菌Mac Conkeys肉汤的无菌试管中，并加入一个倒置的Durrham管； b) 一个含有5毫升Peptone Water的试管中。
5.5.6 将试管在43.5º至44.5º的温度下孵育24小时，然后检查试管(a)是否产生酸和气体，以及试管(b)是否产生吲哚。
5.5.7 为了检测吲哚的存在，加入0.5毫升Kovac试剂，充分摇匀后静置1分钟；如果试剂层出现红色，则说明含有吲哚。
5.5.8 在第二次检测中，如果检测到酸、气体以及吲哚的存在，说明样品中存在大肠杆菌（E. coli）。
5.6 沙门氏菌检测
5.6.1 将1毫升的富集培养液I转移到两个无菌试管中，每个试管中分别加入10毫升的Selenite F培养基和Tetrathionate Brilliant Green Bile培养基。5.6.2 将试管在37ºC下孵育24小时。
5.6.3 从试管中取出少量培养物，接种到以下任意两种培养基上：(i) 硫酸铋琼脂；(ii) 木糖-赖氨酸-脱氧胆酸盐琼脂；(iii) 荧光绿琼脂；(iv) 脱氧胆酸盐-柠檬酸盐琼脂。然后在35-37ºC下培养24小时。
5.6.4 寻找典型的沙门氏菌菌落及其特征。
5.6.5 如果没有一种菌落符合描述要求，那么该测试结果可判定为“无沙门氏菌存在”。
5.6.6 如果培养出的菌落符合描述要求，则进行二次测试。
5.6.7 对于第二次检测，需对典型的沙门氏菌菌落进行传代培养： (a) 在三糖铁琼脂斜面上进行传代培养，首先将菌种接种在斜面表面，然后进行穿刺接种； (b) 将菌种接种到含有5毫升尿素培养基的试管中。
5.6.8 将接种后的培养基在36至38摄氏度下培养24小时。
5.6.9 如果在穿刺培养中产生酸和气体，而斜面培养基上没有酸的生成，这表明存在沙门氏菌。
5.6.10 如果尿素培养基中没有出现红色，也说明存在沙门氏菌。
5.7 检测金黄色葡萄球菌
5.7.1 将1毫升样品转移到100毫升无菌大豆酪蛋白消化培养基中，然后在35-37ºC下培养24小时（富集培养II）。5.7.2 将富集培养物 II 的一环接种到预先灭菌的 Vogel Johnson 球脂、甘露醇盐琼脂和 Baird Parker 球脂平板上。
5.7.3 寻找典型的金黄色葡萄球菌（S. aureus）菌落及其特征。
5.7.4 如果发现任何符合描述的菌落，应进行凝固酶试验。
5.7.5 在进行凝固酶试验时，将一个典型的金黄色葡萄球菌（S.aureus）菌落转移到含有0.5毫升哺乳动物血浆的试管中。
5.7.6 将样品置于37ºC的水浴中孵育24小时。
5.7.7 如果观察到凝血现象，说明存在金黄色葡萄球菌（S.aureus）。
5.8 检测铜绿假单胞菌
5.8.1 将一环富集培养物II转移到预先培养好的无菌Cetrimide琼脂平板上，并在35-37ºC下培养24小时。5.8.2 寻找典型的铜绿假单胞菌（P.aeroginosa）菌落及其特征。
5.8.3 如果发现任何符合描述的菌落，应进行色素测试。
5.8.4 在色素检测中，将典型的菌落划线接种到无菌的Pseudomonas Agar培养基平板上，以检测荧光素的存在；同时将相同的菌落接种到Pseudomonas Agar培养基平板上，以检测绿脓素的存在。
5.8.5 将平板在33至37ºC的温度下培养不少于3天。
5.8.6 在紫外光下观察平板，寻找典型的菌落特征并进行描述。
5.8.7 对于氧化酶试验，将2-3滴 freshly prepared 1% N,N,N1,N1-四甲基-4-苯二胺二盐酸盐溶液滴在滤纸上，然后用可疑菌落进行涂抹。
5.8.8 如果溶液颜色从粉红色变为紫色，说明存在铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeroginosa）。
5.9 记录并报告所获得的结果。
5.10 总微生物计数不得超过 100 cfu/100 cm²，真菌计数不得超过 10 cfu/100 cm²，并且不应检出任何病原体。
6.0 缩写词
6.1 标准操作规程（SOP）6.2 质量保证（QA）
6.3 质量控制（Quality Control）
6.4 部门：部门