1.0 所需设备
LAF菌落计数器
培养箱
DHS
高压灭菌器
所需材料2.0
脱水培养基无菌生理盐水溶液
无菌培养皿
量筒
测试菌种包括：大肠杆菌（E. coli）、金黄色葡萄球菌（Staph. aureus）、铜绿假单胞菌（Ps. aeruginosa）、白色念珠菌（C. albicans）、黑曲霉（A. niger）、沙门氏菌（Salmonella）、枯草芽孢杆菌（B. subtilis）、产孢梭菌（Cl. sporegenes）以及表皮葡萄球菌（S. epidermidis）。
3.0 所需的公用设施
力量；权力；能量4.0 程序
4.1 收到后 脱水培养基在收货登记簿中做必要的记录，包括以下内容：B. 生产日期以及使用截止日期。
4.2 从每个收到的包装中（即每个批次）收集至少5.0克的样品，并充分混合。
4.3 按照要求准备培养基并进行灭菌处理。 培养基制备的标准操作规程（SOP）.
4.4 杀菌完成后，将培养基转移到微生物分析室，并在40至45℃的条件下冷却。°C.
4.5 按照标准操作规程（SOP）启动层流空气（LAF）系统，然后在层流空气环境下继续进行后续操作。
4.6 固体培养基的生长促进性测试
4.6.1 在培养皿的底部标注培养物名称、培养基名称（Media B）以及培养日期。
4.6.2 将1.0毫升含有10至100 cfu/ml（具体浓度见表-I）的特定培养物悬浮液加入两个无菌培养皿中。
4.6.3 将冷却后的培养基在40至45℃的温度下进行无菌倾倒。°将C物质加入两个标记好的培养皿中，然后通过轻轻旋转培养皿来混合它们。 顺时针方向 “and anti-” 这个短语在制药行业中通常用于表示“和……抗性的”或“具有……抗性的”。例如，“drug resistant and anti-bacterial”表示“耐药的且具有抗菌性的”。具体含义需要根据上下文来确定。逆时针方向 方向；指导方针；指示
4.6.4 允许平板在室温下固化。 层流空气.
4.6.5 同时进行阴性对照实验，以验证测试条件。使用与测试微生物相同的稀释液（例如1.0毫升生理盐水溶液）进行操作。
4.6.6 在表1中列出的指定温度和时间内培养平板。
4.6.7 观察培养皿中的菌落数量，统计两个培养皿上的总菌落数（cfu），并按照公式计算最终结果。
P1 + P2 / 2
其中，P1 和 P2 分别代表平板1和平板2。
4.6.8 通过公式计算微生物回收率（以百分比表示）–
%回收率 = “Mean cfu”指的是“平均菌落形成单位（Mean Colony Forming Units）”。在制药行业中，这个术语用于表示从样品中检测到的细菌或微生物的平均数量。 观察到的；发现的 X 100
%回收率 = “Mean cfu”指的是“平均菌落形成单位（Mean Colony Forming Units）”。在制药行业中，这个术语用于表示从样品中检测到的细菌或微生物的平均数量。 观察到的；发现的 X 100
接种的菌落形成单位（cfu）/毫升（ml）
4.6.9 恢复率应不低于75%。
4.7 固体培养基中抑菌特性的检测
4.7.1 在培养皿的底部标注培养物名称、培养基名称（Media B）以及培养日期。
4.7.2 将含有100 cfu/ml的特定培养物悬浮液（具体浓度见表I中的生长抑制特性要求）加入两个无菌培养皿中，每培养皿加入1.0 ml。
4.7.3 将冷却后的培养基在40至45℃的温度下进行无菌倾倒。°将C物质加入到两个标记好的培养皿中，然后通过轻轻旋转培养皿来混合它们。 顺时针方向 “and anti-” 这个短语在制药行业中通常用于表示“和……抗性的”或“具有……抗性的”。例如，“drug resistant and anti-inflammatory”（耐药的且具有抗炎作用的）。具体含义需要根据上下文来确定。逆时针方向 方向；指导方针；指示
4.7.4 将平板在层流空气条件下于室温下固化。
4.7.5 在表1中列出的指定温度和时间内进行培养。
4.7.6 观察培养皿中的菌落数量：测试微生物未出现生长。
4.8 检测促生长和抑生长特性，液体培养基
4.8.1 准备所需量的液体培养基，将100毫升分装到试管中，并按照规定进行灭菌处理。 制造商的 指令；指示；说明
4.8.2 之后 灭菌将培养基转移到微生物分析室，并让其在室温下冷却。
4.8.3 按照标准操作规程（SOP）启动层流空气（LAF）系统，然后在层流空气环境下继续进行后续工作。
4.8.4 向肉汤试管中加入1.0毫升具有促进生长特性的阳性培养物（含有100个细胞，详见表1），并贴上标签，标注为“培养基B”以及阳性培养物的名称和接种日期。
4.8.5 在生长抑制试验中，向肉汤试管中加入1.0毫升具有生长抑制特性的阳性培养物（含100个细胞，详见表1），并标注为“培养基B”。同时标注阳性培养物的名称和接种日期。
4.8.6 同时进行阴性对照实验，以验证测试条件。使用与测试菌株相同的稀释液（例如1.0毫升生理盐水溶液）进行操作。
4.8.7 将所有试管在表1中规定的特定温度下进行培养。
4.8.8 每日观察试管中的培养物是否有浑浊现象，以判断是否发生生长。
4.8.9 在培养开始后的3天内应观察到满意的生长情况。在抑菌试验和阴性对照中不应出现生长现象。
4.8.10 如果培养基通过了促生长测试，应在培养基容器上贴上已批准的标签，之后应使用该标签进行后续分析。
4.8.11 如果用于促进生长的培养基出现故障，应在容器上贴上“不合格”的标签，该容器应被拒收，并相应地在库存记录中进行拒收登记。
4.8.12 被拒收的培养基应当被…… 被丢弃的；废弃的 或者退回给供应商。
4.8.13 收货标签、取样标签、批准标签和拒收标签的样本均附在附件中。
5.0 注意事项
5.1 这些脱水培养基及其成分具有很强的吸湿性，必须存放在阴凉干燥处，远离强光。这些培养基仅适用于实验室使用，严禁用于人类或动物的食用。
5.2 每次转移操作都应使用新的无菌移液器。
5.3 倒入培养皿中的培养基温度应控制在40至45摄氏度之间。°C.
5.4 这些平板应在……条件下进行培养（或：这些平板需要在……环境中进行培养）。 **倒置位置** 为了防止冷凝水在板面上聚集。
5.6 微生物实验室内的所有操作都应在层流罩内进行，并使用气体燃烧器。
5.7 检查脱水培养基的物理性质。如果发现任何异常的颜色、气味或外观变化，应立即丢弃该培养基。
5.8 在称量脱水培养基时，必须始终使用干燥的勺子或铲子。称量操作应尽快完成，以防止吸湿性物质吸收水分。在称量过程中，请佩戴口罩，以避免吸入培养基中的细小颗粒。
5.9 所有脱水培养基必须在释放后三个月内重新进行检测；最终，这些培养基必须在释放后一年内被丢弃。
表1
媒体名称
|
用于生长促进试验的阳性培养物
|
用于生长抑制试验的阳性菌株
|
测试微生物在相应培养基中的预期生长特性
|
培养温度
|
培养期；潜伏期
| ||||
流式硫代葡萄糖酸盐培养基
|
B. subtilis NCIM 2063
铜绿假单胞菌 NCIM 2200
金黄色葡萄球菌（S.aureus）NCIM 2079
|
NA
|
- 生长（浊度）
在……中观察到
相应的媒体
试管；管子
|
三十到三十五°C
|
72小时
| ||||
大豆酪蛋白消化培养基
|
B. subtilis NCIM 2063
C.albicans NCIM 3471
A. 尼日尔 NCIM 1196
|
NA
|
在相应的培养基试管中观察到的生长（浑浊度）现象。
|
二十到二十五°C
|
72小时
| ||||
大豆酪蛋白消化琼脂
|
大肠杆菌 NCIM 2065
铜绿假单胞菌 NCIM 2200
金黄色葡萄球菌 NCIM 2079
|
NA
|
在SCDA平板上出现不透明的白色菌落。
在SCDA培养基平板上出现了大量灰白色的菌落。
SCDA平板上出现细小的白色菌落。
|
三十到三十五°C
|
48小时
| ||||
麦康凯琼脂（MacConkey Agar）
|
大肠杆菌 NCIM 2065
|
金黄色葡萄球菌 NCIM 2079
|
在麦康凯琼脂平板上出现砖红色菌落。
|
三十到三十五0C
|
48小时
| ||||
麦康凯培养基（MacConkey broth）
|
大肠杆菌 NCIM 2065
|
金黄色葡萄球菌 NCIM 2079
|
- 黄色变色
|
三十到三十五°C
|
48小时
| ||||
甘露醇盐琼脂
|
金黄色葡萄球菌 NCIM 2079
|
大肠杆菌 NCIM 2065
|
**甘露醇盐琼脂平板上的黄色菌落**
|
三十到三十五°C
|
48小时
| ||||
**西曲米德琼脂（Cetrimide agar）**
|
铜绿假单胞菌 NCIM 2200
|
大肠杆菌 NCIM 2065
|
**青绿色菌落出现在头孢美唑琼脂平板上**
|
三十到三十五°C
|
48小时
| ||||
抗生素测定培养基11号
|
S. epidermidis NCIM 2493
|
NA
|
在相应的培养基平板上，生长出了茂盛的菌落。
|
三十到三十五°C
|
24小时
| ||||
蛋白胨水
|
大肠杆菌 NCIM 2065
|
NA
|
浑浊的；不透明的
各培养基试管中的生长情况
|
三十到三十五°C
|
48小时
| ||||
萨博劳德葡萄糖琼脂（Sabourauds Dextrose Agar）
|
C.albicans NCIM 3471
|
NA
|
- 在沙氏葡萄糖琼脂平板上出现白色菌落
|
二十二到二十五°C
|
120小时
| ||||
硒酸盐F培养基
|
沙门氏菌 abony NCIM 2257
|
金黄色葡萄球菌 NCIM 2079
|
在硒酸盐F培养基中观察到的红色PPT（现象/物质）。
|
三十到三十五°C
|
24小时
| ||||
EMB琼脂
|
大肠杆菌 NCIM 2065
|
金黄色葡萄球菌 NCIM 2079
|
- 在EMB琼脂平板上，呈现蓝色至黑色的菌落，并带有金属光泽。
|
三十到三十五°C
|
24小时
| ||||
亮绿色琼脂
|
沙门氏菌 abony NCIM 2257
|
金黄色葡萄球菌 NCIM 2079
|
在亮绿色琼脂平板上，出现不透明的粉红色至白色菌落。
|
三十到三十五°C
|
48小时
| ||||
营养肉汤
|
大肠杆菌 NCIM 2065
|
NA
|
- 生长旺盛（但溶液浑浊）
已观察到。
|
三十到三十五°C
|
24小时
| ||||
三糖铁琼脂
|
沙门氏菌 abony NCIM 2257
|
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus） NCIM 2079
|
红色和黄色的屁股（可能伴有或没有变黑现象）
|
三十到三十五°C
|
48小时
| ||||
**Vogel Johnson Agar**
|
金黄色葡萄球菌 NCIM 2079
|
大肠杆菌 NCIM 2065
|
**沃格尔-约翰逊琼脂平板上的黑色菌落**
|
三十到三十五°C
|
48小时
| ||||
巴氏琼脂（Baired Parker Agar）
|
金黄色葡萄球菌 NCIM 2079
|
大肠杆菌 NCIM 2065
|
黑色菌落周围有清晰的无菌区
|
三十到三十五°C
|
48小时
| ||||
荧光假单胞菌琼脂培养基
|
铜绿假单胞菌 NCIM 2200
|
金黄色葡萄球菌 NCIM 2079
|
**假单胞菌琼脂平板上出现黄色菌落**
|
三十到三十五°C
|
72小时
| ||||
铜绿假单胞菌琼脂（用于检测铜绿假单胞菌产生的蓝绿素）
|
铜绿假单胞菌 NCIM 2200
|
金黄色葡萄球菌 NCIM 2079
|
**假单胞菌琼脂平板上出现绿色菌落**
|
三十到三十五°C
|
72小时
| ||||
尿素培养基
|
沙门氏菌 abony NCIM 2257
|
金黄色葡萄球菌 NCIM 2079
|
在相应的培养基试管中，观察到植物生长茂盛，且颜色没有发生变化。
|
三十到三十五°C
|
24小时
| ||||
四硫代硫酸盐亮绿胆汁培养基
|
沙门氏菌 abony NCIM 2257
|
金黄色葡萄球菌 NCIM 2079
|
在结核分枝杆菌（TBGB）肉汤培养管中观察到了白色沉淀物。
|
三十到三十五°C
|
24小时
| ||||
亚硫酸铋琼脂
|
沙门氏菌 abony NCIM 2257
|
金黄色葡萄球菌 NCIM 2079
|
在亚硫酸铋琼脂平板上出现的黑色或绿色菌落
|
三十到三十五°C
|
48小时
| ||||
木糖-赖氨酸-脱氧胆酸盐琼脂
|
沙门氏菌 abony NCIM 2257
|
金黄色葡萄球菌 NCIM 2079
|
**在木糖-赖氨酸-脱氧胆酸盐琼脂上出现的红色菌落**
|
三十到三十五°C
|
48小时
| ||||
6.0 频率
6.1 对于每一批货物：
7.0 缩写
标准操作规程（SOP）
QA：质量保证
QC：质量控制
NA：不适用
WFI：注射用水
LAF：层流空气