紫外-可见吸收光谱法是一种测量化学物质溶液对单色辐射吸收的方法。这种辐射的波长范围分别是 185 纳米到 380 纳米(紫外区)以及 380 纳米到 780 纳米(可见光区)。
溶液的吸收程度用吸光度(A)来表示,吸光度定义为单色辐射的透射率(T)的倒数的以10为底的对数:
为了便于参考和计算,本药典中对于多种物质采用了1%(重量/体积)溶液的特定吸光度值,除非另有说明。该吸光度值是指在1厘米光程的比色皿中,使用指定波长测量得到的1%(重量/体积)溶液的吸光度。
它是通过某种表达方式来评估的。
1%(1厘米)= A/cl
其中,c 表示吸收物质的浓度,以 w/v(重量/体积)百分比表示;I 表示吸收层的厚度,单位为厘米。在特定波长下,A 的值(1%浓度、1厘米厚度)是该吸收物质所具有的特性。
设备;仪器
一种适用于测量紫外和可见光谱范围内的分光光度计,由能够产生200纳米至800纳米范围内单色光的光学系统以及用于测量吸光度的设备组成。
用于检测样品溶液和参比液体的两个空白样品池必须具有相同的光谱特性。当使用双光束记录仪器时,溶剂样品池应放置在参比光束路径中。
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波长控制
使用高氯酸钬溶液的吸收最大值来校准波长刻度;可选的光源包括氢灯或氘灯的谱线,或者汞蒸气灯的谱线。在200纳米至400纳米的范围内,允许的波长偏差为±1纳米;在400纳米至600纳米的范围内,允许的波长偏差为±3纳米。
吸光度控制
使用适当的滤光片或在表1中指定的波长下使用重铬酸钾溶液进行吸光度检测。该检测能够提供每个波长的具体吸光度值及其允许的限度。吸光度的容差为±0.01。
使用在130°C下预先烘干至恒重后的重铬酸钾(UV)溶液。为了测定235 nm、257 nm、313 nm和350 nm处的吸光度,将57.0-63.0 mg的重铬酸钾(UV)溶解在0.005 M硫酸中,并用相同浓度的硫酸稀释至1000.0 ml。为了测定430 nm处的吸光度,同样将57.0-63.0 mg的重铬酸钾(UV)溶解在0.005 M硫酸中,并用相同浓度的硫酸稀释至1000.0 ml。
杂散光限
使用适当的滤光片或溶液,可以在特定波长下检测到杂散光;例如,当以水作为参考液时,1.2%(w/v)的氯化钾溶液在1厘米比色皿中的吸光度在约200纳米波长处应大于2.0。
分辨率
当在专论中有所规定时,记录0.02%(体积比)的甲苯溶液在己烷中的光谱。
另请参阅: 紫外/可见分光光度计的校准
