1.0 目标
用于描述微生物制备的程序。2.0 范围
本标准操作规程（SOP）适用于微生物繁殖力测试的准备工作。3.0 责任
微生物学家 - 质量控制部门4.0 责任制
质量控制经理5.0 程序/规程
5.1 在无菌条件下，开启该微生物的冻干培养物。 层流气流 将内容悬浮在10毫升的胰蛋白酶大豆肉汤（Trypticase Soya Broth，也称为Soyabin-Casein Digest Broth - SCDB）中（用于细菌培养），或悬浮在Sabouraud葡萄糖肉汤（Sabouraud Dextrose Broth）中（用于酵母和真菌培养），然后使用涡旋仪搅拌约15秒。将细菌培养物分别在32.5 ± 2.5ºC和22.5 ± 2.5ºC下培养48小时和5天（某些微生物的培养基和培养条件可能有所不同）。5.2 对于细菌，将24小时培养的菌液接种到胰蛋白酶大豆琼脂（TSA）斜面上，在30至35ºC下培养48小时；对于真菌，将48小时至5天培养的菌液接种到沙氏葡萄糖琼脂（SDA）斜面上，在20至25ºC下培养5天。同时，将菌液划线接种到含有相应培养基的平板上并培养。有关培养基、温度和培养时间的更多详细信息，请参见表1。
5.3 如果培养物不纯，应从选定的分离菌落中进行传代培养，然后将其划线接种到适当的培养板上（参见表1）。按照要求进行培养。观察菌落形态，并从选定的菌落中进行革兰氏染色反应。如果结果不符合要求，需将菌株重新接种到TSA或SDA斜面上，然后重复步骤5.2。
5.4 清晰地标记所有斜面的名称、微生物批次编号以及传代培养的日期。
5.5 将该斜面培养物储存在2°C至8°C的温度范围内，并用作种子培养或母培养物。
5.6 从母培养物中应制备出三种主斜面，即 M1、M2 和 M3。
5.7 在前六个月里，每个月（即W1、W2、W3、W4、W5、W6和W7）应分别准备七个工作菌种培养物。
5.8 六个月后，应再次按照第5.7点的步骤，使用M2菌种进行每月的培养操作。
5.9 应从这些每月培养的菌种中制备每周/每日使用的菌种，这些菌种应每天或每周使用一次，但使用时间不得超过一周，即第1天、第2天、第3天、第4天等等。
5.10 在使用这些培养物后（即超过其有效期后），请丢弃这些培养管。
5.11 打开 冻干的 每年进行培养，并丢弃旧的培养物库存。
5.12 在冻干安瓿开启六个月后，检查当前培养基上生长的微生物的鉴定结果。
表1
微生物；生物体
|
ATCC # MTCC
|
生长培养基
|
生长温度：±1ºC
|
培养时间 - 天
|
状况；条件；环境
|
**芽孢杆菌**
**枯草芽孢杆菌（Subtilis）**
|
441
|
Trypticas大豆肉汤（TSA）
|
37
|
1
|
好氧的
|
白色念珠菌
|
ATCC
19403
|
沙氏葡萄糖琼脂（Sabouraud Dextrose Agar，SDA）
|
30
|
2
|
好氧的
|
产孢梭菌（Clostridium sporogenes）
|
NCIM
10627
|
马血琼脂（HBA）
|
32
|
2
|
厌氧的
|
大肠杆菌
|
TSA
|
37
|
1
|
好氧的
|
|
铜绿假单胞菌
|
TSA
|
37
|
1
|
好氧的
|
|
金黄色葡萄球菌
|
TSA
|
37
|
1
|
好氧的
|
6.0 缩写词
6.1 标准操作规程（Standard Operating Procedure）
6.2 ATCC - 美国典型培养物保藏中心（American Type Culture Collection）
6.3 MTCC - 微生物种培养收集中心
6.4 NCIM - 国家工业微生物菌种库
6.5 SDA - 萨博劳德葡萄糖琼脂（Sabouraud’s Dextrose Agar）
6.6 TSA - 豆腐酶大豆琼脂
6.7 HBA - 马血琼脂
6.8 SCDB - 大豆酪蛋白消化肉汤
6.2 ATCC - 美国典型培养物保藏中心（American Type Culture Collection）
6.3 MTCC - 微生物种培养收集中心
6.4 NCIM - 国家工业微生物菌种库
6.5 SDA - 萨博劳德葡萄糖琼脂（Sabouraud’s Dextrose Agar）
6.6 TSA - 豆腐酶大豆琼脂
6.7 HBA - 马血琼脂
6.8 SCDB - 大豆酪蛋白消化肉汤