高效液相色谱(HPLC)柱性能评估与柱维护

HPLC Column Performance Evaluation and Column Care

2011年7月21日Ankur Choudhary (noreply@blogger.com)AI 专业翻译

新列

对于新的…… 高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography) 对于新安装的色谱柱,将按照现有在用色谱柱的操作程序以及制造商的说明书进行性能测试。(如果制造商证书中列出了所需的化学试剂,那么这些试剂也需要准备齐全。)

现有列

对于现有的色谱柱操作,将按照以下程序进行色谱柱性能测试。

对于所有的 C18 色谱柱和 C8 色谱柱:

色谱条件:

流动相:乙腈:水(60:40)
波长:254纳米
注射体积:20毫升
列式烘箱温度:25°C ± 1°C。
对于其余参数,请参照“列性能方法参数”中的规定进行处理。
配制移动相中含0.1%甲苯的测试溶液。
检查色谱图以确认…… 理论板数(theoretical plates) 以及所得峰值的不对称性(10%)。

C8和C18柱的验收标准:

5次重复注射的相对标准偏差(RSD):不超过2.0%
理论板数:对于新色谱柱,需记录其理论板数。对于现有色谱柱,理论板数超过初始值或初始值的-10%也是可以接受的。
不对称度(10%):NMT 2.0
将测试结果输入到性能评估报告的相应列中。

对于硅胶柱(正在常规使用的柱子):

流动相:N-己烷与乙醇,比例为95:5
波长:254纳米
柱温:40°C
对于其余参数,请参照“列性能方法参数”中的规定进行处理。
配制浓度为0.1%的苯溶液,溶剂为正己烷。
检查色谱图,确认所得峰的理论板数是否满足要求,并判断峰的不对称度是否在10%以内。

硅胶柱的验收标准:

5次重复注射的相对标准偏差(RSD):不超过2.0%
理论板数:对于新购买的色谱柱,需要记录其理论板数。对于已使用的色谱柱,如果实际板数超过初始值的100%或低于初始值的90%,均属于可接受范围。
不对称性(10%):NMT 2.0
将测试结果输入到性能评估报告的相应列中。
苯基柱、氰基柱、手性柱等将按照制造商的说明或柱的性能参数进行测试。

一种用于色谱柱确认或性能评估的替代方法:

对于所有色谱柱(包括 C8 和 C18),分别注入五个重复样品。 系统适用性 或者按照指定方法的标准来使用相应的列。
计算相应的系统适用性结果。该结果必须符合系统适用性参数的要求。
理论板数(N)= 16(t/W)2
不对称性(10%)= w/2f
“Where...”
t - 保留时间
W:通过将相对平直的峰两侧外推至基线来测得的峰宽。
**w**:在峰高10%处的峰宽
f - 从峰顶垂直向下测量到峰高10%处与峰前沿之间的距离
频率:在完成1500次注射后进行,如需要可提前进行。

色谱柱的冲洗:

在开始使用HPLC之前以及每天工作结束后,必须使用合适的HPLC级溶剂对色谱柱进行冲洗。
逐渐增加或减少溶剂的流速,以避免对色谱柱床造成突然的冲击。
以下提供的冲洗时间仅供参考,具体操作需根据实际需求进行调整。冲洗时间可能会因注射样品的数量或色谱柱的污染程度而变化。
将所有清洗细节记录在……中。 高效液相色谱柱 **日志本**
相关: 相对响应因子(RRF)的计算

对于 C18 和 C8 色谱柱:

在分析之前,用储存该色谱柱的相同溶剂冲洗色谱柱30分钟,流速为1毫升/分钟。
用流动相中存在的乙腈或甲醇冲洗色谱柱,流速为1 ml/min,持续约30分钟。


📌 本文由 AI 翻译自 pharmaguideline.com,仅供内部参考查看英文原文