维生素E（或醋酸生育酚）的分析方法

将约2.0克待测物质（已准确称量）溶解在50毫升的乙醇（95%）和乙醚的混合液中。该混合液需先用0.1摩尔/升的氢氧化钾溶液中和至酚酞试纸呈中性。如果样品在冷溶剂中不溶解，需将烧瓶连接回流冷凝器，并在不断搅拌的情况下缓慢加热，直至样品完全溶解。然后加入1毫升酚酞溶液，再用0.1摩尔/升的氢氧化钾溶液进行滴定，直到摇动30秒后溶液仍呈淡粉色。根据实验结果计算酸值。

酸值 = 5.61 n/w

其中 n 表示所需 0.1M 氢氧化钾的毫升数；

w = 该物质的重量（以克为单位）。

准确称取约0.5克，溶解在100毫升的...中。 0.25M乙醇硫酸溶液加入20毫升水和0.1毫升浓度为0.25%（w/v）的二苯胺硫酸溶液，然后用……进行滴定。 0.01M硝酸铈铵 “直到产生一种蓝色，并且这种蓝色能够持续至少5秒钟。然后在不添加被检测物质的情况下重复该操作。两次操作结果之间的差异……” 滴定法 表示所需的硝酸铈铵的量。每毫升0.01M的硝酸铈铵相当于0.002154克的生育酚。

标准溶液

将1.0毫升铅标准溶液（铅浓度为1 ppm）移入一个50毫升的Nessler比色管中，然后用蒸馏水稀释至25毫升。使用稀醋酸或稀氨水调节溶液的pH值至3.0至4.0之间，再继续用蒸馏水稀释至约35毫升并充分混合。

测试溶液

在合适的坩埚中称取1.0克该物质，加入足够的硫酸使样品湿润，然后在低温下小心点燃直至完全炭化。向炭化后的物质中加入2毫升硝酸和5滴硫酸，继续加热直至不再产生白色烟雾。最好在马弗炉中于500°至600°的温度下加热，直至碳完全燃烧殆尽。冷却后，加入4毫升盐酸，盖上盖子，在水浴中消化15分钟，然后打开盖子，在水浴中缓慢蒸发至干燥。用1滴盐酸湿润残留物，加入10毫升热水并消化2分钟。逐滴加入氨水溶液，直至溶液对石蕊试纸呈微碱性，用水稀释至25毫升，并用稀醋酸调节pH值至3.0至4.0之间。如有必要，进行过滤；用10毫升水冲洗坩埚和过滤器，将滤液和洗液合并后放入50毫升的纳氏比色管中，用水稀释至约35毫升并混合均匀。

程序；步骤；操作规程

分别向装有标准溶液和测试溶液的每个圆筒中加入10毫升 freshly prepared hydrogen sulphide solution（新鲜制备的硫化氢溶液），混合后用水稀释至50毫升，静置5分钟，然后在白色表面上观察颜色变化；测试溶液产生的颜色不应比标准溶液产生的颜色更深。

酪蛋白胰酶消化物：20克

大豆卵磷脂：5克

聚山梨酯20：40毫升

水：960毫升

将酪蛋白和大豆卵磷脂的胰酶消化物溶解在960毫升水中，在48°至50°的水浴中加热约30分钟直至完全溶解。然后加入40毫升聚山梨酯20，搅拌均匀后按需分装。

II. 萨伯劳德氯霉素琼脂培养基（Sabouraud Chloramphenicol Agar Medium）

酪蛋白酶水解物：5.0克

动物消化物：5.0克

组织：5.0克

葡萄糖：0.05克

琼脂：15.00克

水：1000毫升

灭菌后的pH值为：5.6 ± 0.2

III. 大豆-酪蛋白消化琼脂培养基

酪蛋白胰酶消化物：15.0克

大豆粕中的木瓜蛋白酶消化物：5.0克

氯化钠：5.0克

琼脂：15.0克

水：1000毫升

灭菌后的pH值为：7.3 ± 0.2

程序；步骤；操作规程 

将10克样品溶解在Fluid Casein Digest-Soy Lecithin-Polysorbate 20培养基中，配制成100毫升的溶液。如有需要，可进一步稀释该溶液，使得每1毫升溶液能够产生30至300个菌落。从最终稀释液中取1毫升，分别滴加到两个无菌培养皿中。随后向每个培养皿中加入15至20毫升预先熔化并冷却至约45°C的Soybean-Casein Digest琼脂培养基。盖上培养皿盖子，通过倾斜或旋转培养皿使样品与琼脂充分混合，然后让混合物在室温下固化。将培养皿倒置，置于培养箱中培养48至72小时。培养结束后，观察培养皿中的生长情况，计数菌落数量，并计算两个培养皿的平均值，得出每克或每毫升样品中的微生物数量。如果从代表样品1:10稀释液的培养皿中未检测到任何微生物菌落，则结果应记录为“每毫升样品中的微生物数量少于10个”。

程序；步骤；操作规程
将10克样品溶解在Fluid Casein Digest-Soy Lecithin-Polysorbate 20培养基中，配制成100毫升的溶液。如有需要，可进一步稀释该溶液，使得每1毫升溶液能够产生20至80个菌落。从最终稀释液中取1毫升，分别滴加到两个无菌培养皿中。随后向每个培养皿中加入15至20毫升预先熔化并冷却至约45°C的Sabouraud Chloramphenicol琼脂培养基。盖上培养皿盖子，通过倾斜或旋转培养皿使样品与琼脂充分混合，然后在室温下让混合物固化。将培养皿倒置，置于20°C至25°C的温度下培养5至7天。培养结束后，观察培养皿中的生长情况，计数菌落数量，并计算两个培养皿的平均值，得出每克或每毫升样品中的微生物数量。如果从代表样品1:10稀释液的培养皿中未检测到任何微生物菌落，则结果应记录为“每克/毫升样品中的微生物数量少于10个”。

向10克样品中加入流式大豆-酪蛋白消化培养基，配制成100毫升的培养液，然后混合并培养。观察培养基中是否有微生物生长；如果发现生长，使用接种环将培养液的一部分涂布在Vogel-Johnson琼脂培养基（或Baird-Parker琼脂培养基、Mannitol-Salt琼脂培养基）以及Cetrimide琼脂培养基的表面上（每种培养基分别接种在培养皿中）。盖上培养皿并倒置后进行培养。如果经过检查后发现，没有任何培养皿上的菌落具有表1和表2中列出的特征（针对所使用的培养基），则该测试样本符合对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）和铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）的无污染要求。

通过氧化酶试验确认培养基上出现的可疑菌落是否为铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）。将菌落转移到预先浸渍了N,N-二甲基对苯二胺二盐酸盐（N,N-dimethyl-p-phenylenediamine dihydrochloride）的滤纸条或滤纸片上；如果未出现粉红色（随后变为紫色），则说明样品符合该试验的要求，即不含铜绿假单胞菌。如有必要，可通过其他合适的培养和生化试验来进一步确认铜绿假单胞菌的存在。

凝固酶试验（用于金黄色葡萄球菌）

使用接种环，将来自 Vogel-Johnson 球脂培养基（或 Baird-Parker 培养基、Mannitol-Salt 球脂培养基）表面的代表性可疑菌落转移到含有 0.5 毫升哺乳动物血浆（最好是兔或马的血浆）的试管中，血浆中可以添加或不添加适当的添加剂。将试管置于 37°C 的水浴中培养，并在 3 小时后以及之后每隔适当的时间间隔进行观察，直至 24 小时。同时检测阳性对照和阴性对照样本。如果样品在任何程度上都没有发生凝固现象，那么该样品就符合金黄色葡萄球菌吸收度测试的要求。

氧化酶和色素试验（针对铜绿假单胞菌）

使用接种环，将来自Cetrimide琼脂培养基表面（含有荧光素检测用假单胞菌）的代表性菌株划线转移到Pseudomonas琼脂培养基上（用于检测荧光素）以及Pseudomonas琼脂培养基上（用于检测绿脓素）。如果需要转移大量菌落，可以将每个平板的表面划分为四个象限，每个象限分别接种一个菌落。盖上盖子并将接种后的培养基倒置，然后在35 ± 2°C下培养不少于三天。在紫外光下观察划线区域，检查平板上是否存在表2中列出的特征性菌落。