1.0 目标
为了确定转接培养后微生物培养物的纯度。2.0 范围
本标准操作规程（SOP）用于验证微生物培养物的纯度，适用于继代培养后的微生物分析过程。3.0 责任
微生物学家 - 质量控制部门4.0 责任制
质量控制经理5.0 程序
5.1.1 用于检测细菌的革兰氏染色法
5.1.2 在层流洁净环境下（LAF），无菌地打开微生物培养管。5.1.3 取一环培养物，将其悬浮在无菌生理盐水中。
5.1.4 取一张干净、无油脂的载玻片，用生理盐水将培养物制成一层薄涂片。
5.1.5 将载玻片缓慢通过火焰进行空气干燥和热固定处理。注意避免过热。
5.1.6 用结晶紫（初级染色剂）浸泡涂片1分钟，然后用纯净水冲洗。
5.1.7 加入碘酒作为媒染剂，作用1分钟；然后用纯净水冲洗。
5.1.8 用纯酒精对涂片进行10秒的消毒处理。
5.1.9 加入番红花红（Safranin）作为复染剂，静置1分钟。然后用纯净水冲洗。
5.1.10 将载玻片风干或用吸纸吸干水分，然后在显微镜下观察。
5.1.11 显示紫色的微生物已经接受了初级染色，属于革兰氏阳性细菌。
5.1.12 那些呈现红色/粉红色的微生物已经接受了复染处理，属于革兰氏阴性细菌。
5.1.13 将显微镜下观察到的培养物形态与第5.3节中提到的形态进行比较。
5.1.14 根据第5.3条的要求，验证微生物培养在相应培养基中的菌落特征。
5.1.15 如果菌落特征与第5.3条的要求不符，仅记录其形态特征。
5.2 乳酚棉蓝染色法用于真菌检测
5.2.1 在层流罩（LAF）下无菌打开微生物培养管。5.2.2 使用一块干净且无油脂的载玻片。
5.2.3 使用针和镊子取出真菌的菌丝（对于丝状真菌），将其放置在载玻片上。小心地展开菌丝，然后滴几滴乳酚棉蓝溶液覆盖整个菌丝体，再盖上干净的、无油脂的盖玻片，最后在显微镜下观察。
5.2.4 将显微镜下观察到的培养物形态与第5.3点中提到的形态进行比较。
5.2.5 根据第5.3条的要求，验证微生物培养在相应培养基中的菌落特征。
5.2.6 如果菌落特征与第5.3条的要求不符，只需记录其形态特征即可。
5.3 微生物培养的形态学特征
5.3.1 大肠杆菌（E. coli）：革兰氏阴性球杆菌——产生吲哚（在EMB琼脂上形成具有绿色金属光泽的菌落）5.3.2 沙门氏菌属（Salmonella sps）：革兰氏阴性杆菌——尿素酶阴性（在XLDA培养基上形成黑色菌落，使用BSA染色）
5.3.3 金黄色葡萄球菌：革兰氏阳性球菌，呈簇状生长；凝固酶阳性（在VJA培养基上形成黑色菌落并伴有黄色圈；在BPA培养基上形成黑色菌落并伴有透明圈）。
5.3.4 铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）：革兰氏阴性短杆菌，具有运动能力，氧化酶阳性（在含有钙的培养基上会呈现荧光绿色）。
5.3.5 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）：革兰氏阴性杆菌，能形成孢子，无荚膜，具有运动能力。在SCDA培养基上形成的菌落呈非黏液状且形状不规则。
5.3.6 黑曲霉（Aspergillus niger）：这种丝状真菌在显微镜下可见分枝的菌丝和隔膜。属于产生黑色孢子的真菌。
5.3.7 白色念珠菌（Candida albicans）：这种酵母样/双相真菌呈椭圆形或球形，能产生有隔膜的假菌丝和真正的菌丝，形成白色或奶油色的黏稠菌落。
5.3.8 Shigella.flexeneri：革兰氏阴性杆菌（在SS琼脂上形成灰白色至无色的菌落）
5.3.9 普兰图鲁姆乳杆菌（Lactobacillus planthurum）：这是一种非荚膜的革兰氏阳性杆菌，通常单独存在或呈链状排列。在泛酸培养基（Pentothenate Inoculum Broth）中，其细胞会显得更为明显（即细胞密度更高）。
5.3.10 大肠杆菌突变株：革兰氏阴性杆菌。在存在维生素B12的条件下能够生长。
5.3.11 肠杆菌：革兰氏阴性球菌（在VRBG培养基上形成红色至红褐色的菌落）。
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6.0 缩写词
6.1 标准操作规程（Standard Operating Procedure）6.2 SCDA - 大豆酪蛋白消化琼脂
6.3 LAF - 层流空气（Laminar Air Flow）
6.4 XLDA - 果糖-赖氨酸-脱氧胆酸盐琼脂
6.5 BSA - 硫酸铋琼脂
6.6 VJA - Vogel Johnson Agar
6.7 BPA - 巴雷德帕克琼脂（Baired Parker Agar）
6.8 CA - 硫柳汞琼脂
6.9 VRBG - 紫红色胆汁培养基
6.10 SS琼脂 - 沙门氏菌和志贺氏菌琼脂