1.0 目的
制定使用过滤歧管通过膜过滤法对样品进行无菌检测的程序。2.0 范围
适用于质量控制微生物实验室中对稀释研究样本和稳定性研究样本的无菌检测。3.0 责任
受过质量控制/微生物学方面的专业培训。4.0 责任制
部门主管5.0 程序/规程
5.1 一般说明与注意事项
5.1.1 遵循；依照 微生物检测区和无菌检测区的进出操作规程.5.1.2 确保所有无菌或已灭菌的物品在其有效期/使用期限之内，并且包装完好无损。如果发现任何包装损坏或完整性受到破坏，切勿使用这些材料。
5.1.3 确保所有将要使用的培养基和稀释剂都经过预培养处理。检查培养基的质量是否合格。 污染；杂质 或者造成物理损坏。对于 Fluid Thioglycollate Medium（流体硫糖胶培养基），如果培养基颜色变为粉红色（出现罗丹明环）的比例超过三分之一，则不得使用该培养基容器。
5.1.4 检查物理参数（温度、...） 湿度 以及 **差压**在开始任何活动之前，必须先测量该区域的各项参数，并确保它们都在规定的范围内。
5.1.5 在每次……期间 无菌检查 进行会议；执行操作；实施任务 环境监测 按照标准操作规程（SOP）执行。
5.2 将材料转移至无菌检测区及cRABS（封闭式洁净空气屏障系统）
5.2.1 用于无菌测试的材料，如培养基、冲洗液或稀释剂，以及测试工具（如镊子、剪刀、带管路的排水托盘、排水收集容器等），必须经过高压灭菌处理，灭菌完成后应从灭菌设备中取出并存放在无菌区域（缓冲室）内。5.2.2 其他所有材料的转移方式如下：
5.2.2.1 将所有与无菌检测相关的材料，如样品和其他无菌配件，存放在培养室内的传递箱中，并确保传递箱处于开启状态。 LAL测试 空间；房间
5.2.2.2 从 LAL（液体活性分析）实验室卸下相关材料，并将其存放在 LAF（低温储存设施）中。
5.2.2.3 拆除产品小瓶的防拆封盖，并使用过滤后的消毒液对小瓶的外表面进行消毒。 消毒液.
5.2.2.4 使用过滤后的消毒液对外部无菌配件包装的表面进行消毒。
5.2.2.5 将所有材料转移至动态传递箱的开口处。 **缓冲区；缓冲空间**确保动态传递箱处于开启状态。
5.2.2.6 从缓冲室中卸下物料，并将其转移到无菌检测室。
5.2.3 按照标准操作规程（SOP）操作封闭式洁净室（cRABS）。
5.2.4 准备所有所需的材料，包括培养基容器、经过灭菌的配件（如集管、过滤漏斗、镊子、剪刀等），以及过滤后的消毒溶液等。 70%异丙醇（IPA） 将产品样品送至无菌检测室进行检测。
5.2.5 除产品样品外，所有材料均需存放在 cRABS 传递箱内。
5.2.6 关闭 cRABS 传递箱，并用过滤后的 70% 异丙醇（IPA）擦拭材料的外表面进行消毒。然后打开（相关设备或系统）。 紫外线（UV light） 并将这些材料暴露在环境中不少于15分钟。
5.2.7 在至少15分钟后，将材料从cRABS传递箱通过提供的通道转移到cRABS中。
5.2.8 如有样品需要保存，应将其存放在符合 cRABS（封闭式洁净空气屏障系统）要求的容器中。 **传递箱（Pass Box）**关闭传递箱，并用过滤后的70%异丙醇（IPA）擦拭样品的外表面进行消毒。请勿开启紫外线灯。待消毒剂干燥后即可。
5.2.9 将样品从 cRABS 传递箱通过提供的通道转移到另一个 cRABS 中。
5.2.10 在测试之前，确保每个物品上的消毒剂已经完全干燥，并且包装是完整的（没有破损）。
5.2.11 将排水收集容器牢固地连接到 cRABS 的排水端口上。
5.3 样品要求
5.3.1 容器数量：按照相关协议的规定。5.3.2 待检测样品的体积
稳定性样品：
容器内装物
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每种培养基的最低检测数量
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少于1毫升
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总内容
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1至40毫升
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内容减半，但总量不少于1毫升。
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超过40毫升但少于100毫升
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20毫升
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100毫升或以上
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含量为10%，但不少于20毫升。
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稀释研究样品：按照相应的实验方案进行取样，取样量不少于20毫升。
5.4 使用歧管进行开放式漏斗法的无菌检查
5.4.1 将已灭菌的歧管放入 cRABS（封闭式洁净空气屏障系统）内，并通过排水收集容器或烧瓶将其连接到真空泵上。5.4.2 将经过灭菌处理的膜过滤漏斗放置在歧管支架上。然后加入无菌的0.45µ过滤器。 膜过滤器 在过滤漏斗的滤网支架上。
5.4.3 打开过滤组件的盖子，用100毫升冲洗液湿润膜片，然后打开真空泵进行过滤。
5.4.4 以无菌方式打开产品容器的密封盖，将每个容器内的内容物转移到过滤装置中。或者，也可以使用无菌注射器和针头将内容物抽出并进行转移。在出现以下情况时…… 冻干产品 首先，用所需体积的无菌稀释剂重新配制样品，然后转移其中的内容物。
5.4.6 启动真空泵并对内容物进行过滤。
5.4.7 在样品过滤后，加入100毫升冲洗液并再次过滤。重复此步骤，直到有3次100毫升的冲洗液能够通过膜过滤器。
如果冲洗液及其用量与验证结果不符，应按照验证结果的要求进行更换。
5.4.8 冲洗后，使用无菌镊子和剪刀将膜切成两半。将其中一半膜转移到100毫升的豆酪蛋白消化培养基中，将另一半转移到100毫升的流式硫糖胶培养基试管中。
5.4.9 在试管上标注产品名称、批号/批记录编号、培养基批次号、日期以及分析人员的姓名首字母。
5.5 负性产品控制测试
5.5.1 在每次无菌检查过程中，应进行一次阴性对照测试，以验证培养基和稀释剂的无菌状态以及检查过程中的环境条件是否合格。5.5.2 进行测试时，应将 100 毫升 0.1% 的无菌蛋白胨水视为产品，并按照实验过程中可能进行的所有最大操作步骤进行操作，具体操作方法如下：
5.5.2.1 如果测试过程中对冻干产品进行的最大操作量是必要的，那么所有与冻干产品测试相关的步骤都应针对阴性产品对照品进行。
5.5.2.2 如果测试过程中对液体产品进行的最大操作次数为一次，则所有涉及液体产品的步骤都应适用于阴性产品控制（即确保产品不出现不合格情况）。
5.6 物料的转移与处置
5.6.1 测试完成后，将所有配件、用过的样品容器以及空的培养基稀释剂容器通过传递箱从缓冲室转移到高压灭菌室。5.6.2 将用于孵育的罐子和培养管通过动态传递箱从缓冲室转移到 LAL 测试室，然后再通过传递箱从 LAL 测试室转移到培养室。
5.6.3 使用过滤后的消毒剂清洁 cRABS（封闭式洁净空气屏障系统）。通过将足够量的消毒剂溶液输送到端口和管道中，对用于收集废液的端口和管道进行消毒，确保所有表面都接触到消毒剂溶液。
5.6.4 如果排水收集管发生泄漏或连接断开，请立即关闭阀门。 不锈钢 通过打开TC夹具来取出容器，然后通过传递箱将容器从缓冲室转移到高压灭菌器中。
5.6.5 通过添加适当的失活剂使容器中的溶液失活，并按照标准操作规程（SOP）进行处置。
5.7 孵育与观察
5.7.1 将大豆酪蛋白消化培养基（SCM）的无菌试管置于22.5 ± 2.5°C下培养14天，将流体硫糖胶培养基（FTG）的无菌试管置于32.5 ± 2.5°C下培养14天。5.7.2 在整个14天的培养期间，每天检查是否有微生物生长的迹象，并记录结果。如果第14天是周末或节假日，则应在下一个工作日进行观察。
5.7.3 在观察过程中，如果发现溶液出现浑浊度增加、沉淀物形成、棉絮状生长物，或者搅拌后培养基从底部产生漩涡状浑浊现象，应立即移除相关容器/试管，并继续进行后续操作。 识别/调查 按照当天观察时的标准操作规程（SOP）执行。
5.7.4 培养完成后，按照规定处置培养基。 培养基处置的标准操作规程.
5.8 接受标准
5.8.1 如果在培养期结束时，任何无菌测试培养基中均未发现微生物生长的迹象，则被测试的样品/产品符合无菌要求。5.8.2 如果在任何一种培养基中检测到微生物生长的迹象，那么被测试的样品/产品不符合无菌测试的要求，除非能够明确证明测试失败是由于与被测试样品/产品无关的原因造成的。只有满足以下一个或多个条件时，该测试才可被视为无效：
5.8.2.1 无菌检测区域的微生物监测结果显示存在异常。
5.8.2.2 对所测试过程中使用的检测程序进行审查后发现存在一处缺陷。
5.8.2.3 在阴性对照样本中检测到了微生物生长。
5.8.2.4 在确定从测试样品中分离出的微生物的身份后，该微生物（或这些微生物）的生长情况可以明确归因于进行无菌检查程序时所使用的材料或技术存在的缺陷。
5.8.5 如果测试结果被判定为无效，则必须使用与原始测试相同数量的样品重新进行测试。
5.8.6 如果重复测试中没有发现微生物生长的证据，则所检测的产品符合无菌测试的要求。
5.8.7 如果在重复测试中发现微生物生长，则该制剂不符合无菌测试的要求。
相关： 用于培养真菌和细菌的常见培养基的孵育条件
6.0 缩写词
6.1 标准操作规程（Standard Operating Procedure）6.2 cRABs - 封闭式限制访问屏障系统
6.3% - 百分之六点三
6.4 UV - 紫外线
6.5 °C - 摄氏度
6.6 毫升
6.7 SCA - 大豆酪蛋白消化琼脂
6.8 SCM - 大豆酪蛋白消化培养基