使用生物指示物的DHS验证标准操作规程

1.0 目标

使用生物指示剂来验证DHS的灭菌效率。

2.0 范围

该程序适用于位于质量控制实验室微生物学区域的DHS设备。

3.0 责任

3.1 职位：技术助理（微生物学家）
3.2 检查：执行人员/经理

4.0 责任追究

部门负责人

5.0 程序

5.1 频率：每六个月一次
5.2 微生物：枯草芽孢杆菌孢子。
5.3 对用于验证目的的批次/批次的 B. subtillis 孢子条进行初始计数。

5.4 初始孢子计数：

5.4.1 将试纸条无菌地转移到100毫升的无菌生理盐水中，静置半小时后进行热处理：将试管置于70-80°C的水浴中加热15分钟。
5.4.2 用手掌轻握试管或使用涡旋器使试管内的孢子悬浮液均匀混合。
5.4.3 根据初始计数结果，用无菌生理盐水进一步稀释。
5.4.4 从不同的稀释液中各取两份样品，以确保每个平板上的菌落计数不超过50个菌落形成单位（cfu/plate）。
5.4.5 将已经熔化并冷却至45°C至50°C的SCD琼脂培养基倒入预先准备好的培养皿中，轻轻摇晃后让其固化。
5.4.6 将平板置于培养箱中培养。 **倒置位置** 在30°-35°C的温度下保存48-72小时。
5.4.7 计算每个平板上的菌落数量，并根据稀释因子计算平均菌落数量。
5.4.8 如果初始计数不超过标签声称值的150%，且不低于标签声称值的75%，则可以使用该条带进行验证。
5.4.9 将结果记录在附录I中。

5.5 DHS验证

5.5.1 将装有穿孔不锈钢容器的DHS腔室装载到设备中，并确保容器密封良好。
5.5.2 取九条试纸，用铝箔纸将其包裹好，并在铝箔纸上清楚地标明每个试纸的位置；然后将这些试纸放入DHS（数据采集系统）中，确保它们能够覆盖到根据附上的位置图表所确定的最低温度点。
5.5.3 保留一条试纸不进行检测，作为阳性对照。
5.5.4 按照标准操作规程（S.O.P.）执行 DHS 循环。
5.5.5 循环完成后，取出所有试纸条。
5.5.6 在无菌条件下，在标有编号和日期的SCD（大豆酪蛋白消化）培养基试管（10毫升）上做好标记，然后将试纸条无菌转移到相应的标记好的SCD培养基试管中。
5.5.7 将一条未暴露的试纸条转移到SCD培养基试管中，并标记为“阳性对照”。
5.5.8 保留一个未接种菌种的SCD培养管作为阴性对照。
5.5.9 将所有试管在30°C至35°C的温度下培养14天。
5.5.10 在含有孢子条的SCD培养基试管中，每天观察这些试管，持续14天，以检测是否出现浑浊或生长现象。
5.5.11 阳性对照应在72小时内显示生长现象。

5.6 解释

5.6.1 如果在任何一种SCD培养基试管中均未观察到菌落生长，则测试结果合格，DHS（无菌工艺验证）即被视为通过验证。
5.6.2 如果在任何一种SCD培养基试管中观察到菌落生长，需鉴定该菌落是否为B.subtillis。
进行革兰氏染色，并将其与阳性对照结果进行比较。如果结果不符合要求，需解决DHS相关问题后重新进行实验。
5.6.3 保存验证记录，并附上符合以下要求的校准卡。
设备名称：
识别编号：
校准频率：
校准日期：
校准截止日期：
由...进行校准。
校准由以下人员检查/确认：
5.7 按照附录II的要求记录结果。

6.0 缩写

6.1 SCD = 大豆酪蛋白消化物
6.2 N.Saline = 生理盐水
6.3 hr. = 小时
6.4 cfu = 菌落形成单位
6.5 B.= 杆菌（Bacillus的缩写）
6.6 ml = 毫升
6.7% = 百分之六点七
6.8°C = 摄氏度
6.9 U.S.P. = 美国药典
6.10 &= 和
6.11 S.O.P.No. = 标准操作规程编号
6.12 S.S = 不锈钢
6.13 DHS = 干热灭菌