用于确定制备好的微生物培养基有效期的验证方案

1.0 引言

最重要的是要确保在测试过程中使用的各种培养基能够支持微生物的生长，这样才能使测试结果具有有效性。培养基支持微生物生长的能力主要受pH值、物理性质和水分含量的影响。因此，在使用之前必须检查这些参数是否保持不变，这可以通过检测pH值和进行促生长试验来实现。

本方案规定了在20-25°C和2-8°C储存条件下，测定制备好的培养基的保质期及其pH值稳定性的方法。所有培养基的制备均应按照相关标准进行。培养基制备的标准操作规程（Standard Operating Procedure for Media Preparation）打开容器后，或根据需要，应对所准备的培养基进行促生长能力测试；同时，还需检测其灭菌后的pH值。随后，应在不同的储存时间点抽取这些培养基的代表性样本，继续检测其促生长能力及pH值的变化情况。

1) 初始的；开始的

2) 一天后

3) 三天后

4) 7天后

5) 14天后

6) 21天后

7) 28天后

8) 31天后

所有这些不同介质的最大储存期限或有效期应根据实验结果来确定。促生长试验在确定某种培养基的保质期时，需要考虑其能够有效支持测试微生物生长的最长储存时间，同时确保在该储存期间其pH值保持稳定（即无变化）。

2.0 目标

本研究的目标是确定…… 制备好的微生物培养基的有效期在储存过程中，需要监测pH值的变化以及促进微生物生长的情况，以确保在使用时培养基仍具有支持微生物生长的能力，并且不含任何可能影响微生物生长的杂质或污染物。污染；杂质以及在特定储存条件下的变形情况。

3.0 范围

该协议适用于质量控制部门的微生物实验室。

4.0 参考文件

培养基制备的标准操作规程（Standard Operating Procedure for Media Preparation）

5.0 责任

微生物学家

6.0 程序/规程

6.1 培养基的制备

6.1.1 媒体（即用于生产过程中的各种材料或介质）应按照相关标准或规定进行制备。培养基制备的标准操作规程（Standard Operating Procedure for Media Preparation）.

6.1.2 液体培养基应分装成每份100毫升的量，放入250毫升的锥形烧瓶/瓶子中。

6.1.3 固体培养基应在灭菌后倒入已灭菌的培养皿中。

6.1.4 所有培养基（培养介质）都应贴有标签，标明培养基的名称、制备日期以及操作人员的签名。

6.1.5 媒体（Media）应储存在温度分别为20-25°C和2-8°C的培养箱中。

6.2 pH值的记录

6.2.1 在培养基灭菌后，其pH值应记录在数据表中，标注为“初始pH值（INITIAL pH）”。

6.2.2 在储存过程中，应按照第1.0节中提到的不同时间间隔，对每种液体培养基的pH值进行检测。

6.2.3 对于每种培养基，在不同的时间间隔内观察到的pH值都应记录在数据表中。

6.2.4 固体培养基只需在初次使用时检测其pH值即可。

6.3 生长促进试验

6.3.1 在所有培养基制备并完成灭菌处理后，应立即按照相关要求对所有培养基进行促生长试验。促生长操作规程（Growth Promotion SOP）将结果记录在数据表中。

6.3.2 在储存过程中，应按照第1.0节中提到的不同时间间隔，对各个培养基进行检测，以确认是否存在促进微生物生长的情况。

6.3.3 记录结果。促进生长在数据表中针对每种培养基进行测试。

6.4 检查外观和污染情况

6.4.1 目视检查固体琼脂培养基是否干燥。

目视检查固体琼脂培养基和液体培养基，观察是否存在任何变形，例如颜色变化、沉淀物形成、微生物污染等情况。

7.0 接受标准

在确定某种培养基的保质期时，应考虑其在符合以下标准条件下的最长储存期限。

A) pH值不得超出附录II中规定的范围。

B) 生长促进试验在初次进行时以及在整个储存期间都必须符合相关要求。

i) 液体培养基：应通过浊度的变化来显示生长情况。如果液体培养基不透明，那么在该培养基中培养后，需要进一步在选择性琼脂培养基上进行划线接种，其特征性生长结果应符合附件I中的描述。

ii) 通用培养基/富集培养基：所得到的总活菌数不应低于相应培养悬浮液实际菌数的 +30%。

iii) 选择性琼脂培养基应显示出与描述中相似的特征性生长。

附件一

C) 固体琼脂培养基不应变干。无论是液体琼脂还是固体琼脂培养基，都不应出现变形或污染现象。

相关：微生物培养物的维护

附录I
高级编号	介质的名称	测试菌株	观察结果；记录的发现
1	亚硫酸铋琼脂	沙门氏菌属	良好的生长情况，黑色或绿色的菌落。
2	亮绿琼脂	沙门氏菌属	生长良好；菌落体积小，呈透明或无色状态，也可能呈不透明或白色；通常周围有一圈粉红色或红色的区域。
3	木糖-赖氨酸-脱氧胆酸盐琼脂	沙门氏菌属	生长良好、发育完全的红色菌落，可能带有黑色中心，也可能没有黑色中心。
4	三糖铁琼脂（Triple Sugar Iron agar）	沙门氏菌属	在穿刺培养过程中（无论是否伴随黑色变现象），会形成酸和气体；而表面生长的部分则没有酸性。
5	甘露醇盐琼脂	金黄色葡萄球菌	生长良好，黄色菌落周围有一圈黄色区域。
6	沃格尔-约翰逊琼脂（Vogel-Johnson agar）	金黄色葡萄球菌	生长良好，黑色菌落周围有一圈黄色区域。
7	Braid Parker agar	金黄色葡萄球菌	生长良好，黑色菌落周围有透明圈。
8	西曲米德琼脂（Cetrimide agar）	铜绿假单胞菌	生长良好，通常呈绿色；在紫外光下会显示出绿色荧光。
9	荧光素假单胞菌琼脂培养基	铜绿假单胞菌	生长良好，通常呈无色至淡黄色；在紫外光下会显示出淡黄色荧光。
10	用于检测绿脓菌（Pyocyanin）的假单胞菌琼脂培养基	铜绿假单胞菌	生长良好，通常呈绿色；在紫外光下会发出蓝色荧光。
11	伊红美蓝琼脂（Eosin Methylene Blue agar）	大肠杆菌	生长良好，在透射光下呈现蓝黑色菌落；在反射光下具有特征性的金属光泽。
12	麦康凯琼脂（MacConkey agar）	大肠杆菌	生长良好，菌落呈砖红色；周围可能有一圈沉淀的胆汁。
13	麦康凯培养基（MacConkey broth）	大肠杆菌	酸和气体的生产。
14	EE肉汤	大肠杆菌	生长良好且伴有颜色变化
15	M-endo	大肠杆菌	从粉红色逐渐变为深红色，表面带有绿色的金属光泽。
16	吉奥利蒂·坎托尼肉汤（Giolitti Cantoni broth）	金黄色葡萄球菌 ATCC 6538	良好的增长
17	西曲米德肉汤	铜绿假单胞菌	生长良好，通常呈绿色。
18	蛋白胨水	枯草芽孢杆菌	浑浊度作为良好生长的指标
19	流式乳糖培养基	沙门氏菌属（Salmonella）或大肠杆菌（Escherichia coli）	浑浊度作为良好生长的指标
20	大豆酪蛋白消化培养基	枯草芽孢杆菌或大肠杆菌	浑浊度表示良好的生长情况。
21	R₂琼脂	枯草芽孢杆菌	所得到的总活菌数不应低于相应培养悬浮液实际菌数的 +30%。
22	流式硫代甘油酸盐培养基	枯草芽孢杆菌	浑浊度作为良好生长的指标
23	大豆酪蛋白消化琼脂	枯草芽孢杆菌	所得到的总活菌数不应低于相应培养悬浮液实际菌数的 +30%。
24	萨博劳德葡萄糖琼脂（Sabouraud Dextrose agar）	白色念珠菌或黑曲霉（Aspergillus niger）	所得到的总活菌数不应低于相应培养悬浮液实际菌数的 +30%。
25	营养琼脂	枯草芽孢杆菌	所得到的总活菌数不应低于相应培养悬浮液实际菌数的 +30%。
26	平板计数琼脂	枯草芽孢杆菌	所得到的总活菌数不应低于相应培养悬浮液实际菌数的 +30%。

附件二

储存条件
日期：仪器编号：
S.No	介质的名称	测试菌株	接种物；菌种；起始培养物已使用（cfu/ml）	培养温度	培养期；孵育期	计数结果（cfu/ml）
1	纠正与预防措施（Corrective and Preventive Action）
2	SDA
3	SCA

储存条件
日期：仪器编号：
S.No	介质的名称	测试菌株	接种物；菌种；起始培养物已使用（cfu/ml）	培养温度	培养期；孵育期	pH值	观察；观测；注意到
1	SCM
2	FTG
3	CMM
4	FLM
5	TTB
6	MCB
7	CTB
8	SCB
9	GCB
10	EEB
11	RFM
12	BSP

储存条件
日期：仪器编号：
S.No	介质的名称	测试菌株	接种物；菌种；起始菌株已使用	培养温度	培养期；孵育期	观察；观测；注意到
1	MEA
2	TSI
3	VRB
4	CBA
5	BPA
6	EMB
7	MSA
8	VJA
9	PAP
10	PAF
11	CTA
12	MCA
13	BGA
14	XLD
15	BSA

完成人：核对人：

日期：日期：