1.0 目标
制定使用内毒素指示剂小瓶对去热原烤箱进行验证的程序。2.0 范围
该程序适用于对用于去热原处理的烤箱进行验证。3.0 责任
3.1 职位：技术助理（微生物学家）/执行职务。3.2 检查：执行人员/经理
4.0 责任制
部门负责人5.0 程序
频率：每三个月一次。5.1 按照标签上的说明，使用稀释液（LRW）按照涡旋法（vortex method）每10分钟重新配制一次内毒素指示剂小瓶的内容物，持续30分钟。
5.2 将10个样品中的内毒素指示物的数量进行分配。 无热原 在层流罩（LAF）保护下的小瓶（每瓶相当于10,000 EU）。
5.2 将1-9号小瓶贴上标签，并用聚对苯二甲酸乙二醇酯（Para film）包装好其中一个小瓶以备阳性对照使用。
5.4 根据位置图将上述九个试剂瓶分别放置在烤箱的不同位置，并按照标准操作规程（SOP）执行加热循环。
5.5 保留一个未暴露的小瓶作为阳性对照。
5.6 循环完成后，将所有九个小瓶从烤箱中取出，并使其恢复到室温。
5.7 将所有小瓶中的内容物用1毫升的稀释水（LRW）重新配制，并使用涡旋仪搅拌5分钟。
（一瓶）用于PCè稀释至0.125和0.25 EU/ml的浓度。
（九支小瓶）用于样品采集 3个对数减少值（log reduction） （即每个小瓶含有10 EU/ml的浓度）。根据附件I中提供的稀释方案，用稀释液（LRW）将其稀释至0.125 EU/ml。
5.7 对所有浓度为0.125 EU/ml的稀释液进行LAL测试，同时对0.125 EU/ml和0.25 EU/ml的阳性对照品以及使用低浓度试剂水（LRW）制备的阴性对照品进行重复检测（每组两次）。
5.8 所有9个小瓶（每瓶含0.125 EU/ml的溶液）的凝胶形成检测结果必须为阴性，而阳性对照的结果必须为阳性。
5.9 按照附录II中的方法进行计算，并将结果记录在其中。
5.10 结果解读： - 阳性对照结果必须为阳性，而暴露于特定条件下的小瓶样本结果必须为阴性，这表明细菌内毒素的含量减少了3个对数单位（log reduction）以上。
5.10.1 如果暴露的试剂瓶检测结果呈阳性（+ve），则需进行重新验证（revalidation）。
5.11.2 如果对暴露在外的小瓶进行重新验证后结果为阳性（即符合标准），则需解决烤箱的问题，并重新执行整个流程。
5.10.2 接受标准：内毒素的水平应降低3个对数单位（log reduction）以上。
6.0 缩写词
6.1 0C = 摄氏度6.2 EU = 内毒素单位
6.3 ml = 毫升
6.4 LAL = 鲎变形细胞溶菌素（Limulus Amebocyte Lysate）
6.5 LRW = 拉尔试剂水（Lal Reagent Water）
6.6 PC=阳性内毒素指示物控制
将所有10个小瓶重新配制至每瓶含1毫升的稀释液（LRW）。
为了实现积极的管理控制：
(10,000 EU/ml) → 100 EU/ml → 1 EU/ml → 0.25 EU/ml → 0.125 EU/ml
1:100 1 :100 1:4 1:2
对于那9支被暴露的试剂瓶：
（假设对数减少值为3）即从 EU/ml 降低到 1 EU/ml，再进一步降低到 0.125 EU/ml。
1:8（最终稀释比例）
附件一
微生物实验室
脱氢反应的烘箱验证
去热原循环温度：_______________ 时间：______________
2. 根据位置图示，放置内毒素样本。
3. 试剂信息。
LAL：细菌内毒素检测
Endotoxin：细菌内毒素
LRW：空白对照液（Laboratory Reference Water）
灵敏度：____________ 有效期：__________________ 有效期：_____________
有效期：_________________ 重新配制方法：________________
块温度：入口温度：________ 出口温度：_________
开始时间：________ 结束时间：________
开始时间：________ 结束时间：________
高级编号
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地点；位置
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最后一次稀释的结果
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备注；说明；附言
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1
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2
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1
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2
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3
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4
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5
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6
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7
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8
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9
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阳性对照品浓度为0.25
0.125
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变更控制
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附件二
微生物实验室
去热原烘箱验证
日期：_________________
计算：-
X 对数减少值 = （从阳性对照品中回收的 EU/ml 的对数值）－（从样品中回收的 EU/ml 的对数值）
从样品池（PC）中恢复的log（对数单位）值乘以样品池中的总EU（欧洲单位）数，再乘以裂解物的灵敏度，即可得到最终结果。
从样品中回收的酶活性单位（EU/ml）= 样品中剩余的酶活性单位（EU）× 测定液的灵敏度。
对数减少值（>3 log reduction）
即；也就是
备注：-
分析员：_________________
审核人：____________________