70%异丙醇是最常用的消毒剂之一，在制药行业中广泛应用。它用于表面消毒、设备杀菌、洁净室及无菌生产区域的双手消毒。
有必要对70%异丙醇的有效期进行验证，以确保其有效性。这样做是为了了解储存的异丙醇溶液在储存过程中能保持有效性的时间。本文将解释70%异丙醇溶液有效期验证的原理、要求以及所采用的微生物学方法。
IPA溶液通过使微生物细胞膜中的蛋白质变性并溶解脂质来消毒表面。当IPA与纯净水以70:30的比例稀释时，其杀菌效果最佳。由于酒精的蒸发，溶液中的酒精浓度会随时间降低，从而影响其消毒效果。对IPA溶液进行验证有助于确定制备好的70% IPA溶液的有效使用期限。
充分混合溶液，并在容器上贴上标签，注明以下内容：
在每个时间点，使用下面描述的方法来评估消毒剂的有效性。
表面拭子法
平板计数法
将冰箱中的培养物取出，让其恢复到室温。
金黄色葡萄球菌
大肠杆菌
铜绿假单胞菌
沙门氏菌，以及
野生培养
2. 将1毫升的肉汤培养物加入9毫升的无菌生理盐水中（0.9%氯化钠溶液），以获得10倍的稀释液用于测试。-1.
3. 取10毫升溶液中的1毫升进行转移。-1 将药物稀释至9毫升无菌生理盐水中，以配制出10毫升的溶液。-2 稀释。
4. 同样地，对培养液进行系列稀释，以获得浓度为10的稀释液。-3, 10-4, 10-5 以及10-6
5. 从10倍稀释液中取1毫升的培养悬浮液。-3, 10-4, 10-5 以及10-6 将样品分两份分别放入无菌培养皿中。
6. 在每个培养皿中倒入约15至20毫升冷却至约45°C的无菌大豆酪蛋白消化琼脂。将培养皿置于32.5 ± 2.5°C的温度下培养24至48小时。
7. 计算每个平板上的菌落数量，并选择那个稀释度，使得菌落数量不少于10个。5.
8. 使用每种含有不低于10×10^6个细胞/毫升的培养液悬浮液，各加入1毫升。5 cfu/ml；地板上的数量约为25个单位（cfu），分别记录。2 将物品放置在通风良好的区域，让其自然风干。
9. 干燥完成后，按照最新的拭子检测标准操作规程（SOP）进行表面采样，然后测定每平方厘米的总需氧菌计数。2 在取样后的4小时内。
10. 立即用70%体积比的异丙醇（IPA）溶液清洁地面，并让其静置30分钟，以使消毒剂充分作用于挑战测试菌株。
11. 30分钟后，按照标准操作规程（SOP）进行采样，并检测细菌数量。
12. 重复步骤9至12，以确定70%异丙醇（IPA）溶液在室温下24小时、48小时、72小时和96小时后的有效性。
对数减少量 = log10(N0) − log10(N)
“Where:”
N0 = 消毒前的微生物数量
N = 消毒后的微生物数量
2. 在平板暴露时间结束后，立即用70%（体积比）的异丙醇（IPA）溶液清洁地面。
3. 清洁完成后，用70%体积比的异丙醇（IPA）溶液喷洒该区域，然后立即关闭房间30分钟，以促进消毒液的作用。
4. 在接触30分钟后，立即按照最新的标准操作规程（SOP）对培养板进行处理，并每2小时检测一次每个位置的细菌数量。
5. 重复上述步骤1至4，以确定70%（体积比）IPA溶液在室温下24小时、48小时、72小时和96小时后的有效性。
在制药生产设施中，验证70%异丙醇（IPA）的有效期是一项关键的GMP要求。通过使用表面网法和沉降平板法进行验证，制造商可以确认70% IPA在其使用期间能够保持其抗菌性能。
通常情况下，新配制的70%异丙醇（IPA）溶液在清洁且密封的容器中、在受控温度下储存时，其有效性可保持96小时。一些制药机构会根据自身的验证数据来设定更长或更短的保质期。
有必要对70%异丙醇的有效期进行验证，以确保其有效性。这样做是为了了解储存的异丙醇溶液在储存过程中能保持有效性的时间。本文将解释70%异丙醇溶液有效期验证的原理、要求以及所采用的微生物学方法。
70%异丙醇消毒原则
IPA溶液通过使微生物细胞膜中的蛋白质变性并溶解脂质来消毒表面。当IPA与纯净水以70:30的比例稀释时，其杀菌效果最佳。由于酒精的蒸发，溶液中的酒精浓度会随时间降低，从而影响其消毒效果。对IPA溶液进行验证有助于确定制备好的70% IPA溶液的有效使用期限。 物料与设备
为了有效验证稀释消毒剂的储存条件和有效期，必须满足以下要求：- 99%异丙醇（IP/BP/USP等级）
- 纯化水（Purified Water）或注射用水（Water for Injection, WFI）
- 清洁的不锈钢或玻璃混合容器
- 用于储存的无菌容器或喷雾瓶
- 大豆酪蛋白消化琼脂（SCDA）
- 无菌拭子
- 经过验证的层流空气系统
- 校准过的培养箱
- 经批准的拭子检测和平板暴露测试方法
- 测试菌株 – 大肠杆菌（E. coli）、沙门氏菌（Salmonella abony）、金黄色葡萄球菌（Staph. aureus）、白色念珠菌（C. albicans）以及环境分离株（野生菌株）。
配制70%体积比的异丙醇（IPA）溶液
使用干净且已校准的量筒，向干净的容器中加入700毫升异丙醇和300毫升纯化水。充分混合溶液，并在容器上贴上标签，注明以下内容：
- 名称：70%体积比异丙醇
- 制备日期：
- 批号：
- 在有效期内使用。
- 由……准备 / 签名：
- 经……验证 / 签名：
验证周期
在溶液制备完成后立即（0小时）、24小时、48小时、72小时和96小时的时间点进行验证测试。在每个时间点，使用下面描述的方法来评估消毒剂的有效性。
表面拭子法
平板计数法
方法1：表面拭子法
一个规定的表面积，通常为25平方厘米。2 样品在含有已知微生物群的情况下被故意污染。经过70%异丙醇（IPA）溶液处理后，使用无菌拭子采集样本，并通过计数来确定微生物负荷的减少百分比。将冰箱中的培养物取出，让其恢复到室温。
金黄色葡萄球菌
大肠杆菌
铜绿假单胞菌
沙门氏菌，以及
野生培养
程序；步骤；操作规程
1. 使用无菌环，将每个斜面上的细菌培养物分别接种到50毫升的无菌大豆酪蛋白消化培养基中，然后在32.5 ± 2.5°C的温度下培养24至48小时。2. 将1毫升的肉汤培养物加入9毫升的无菌生理盐水中（0.9%氯化钠溶液），以获得10倍的稀释液用于测试。-1.
3. 取10毫升溶液中的1毫升进行转移。-1 将药物稀释至9毫升无菌生理盐水中，以配制出10毫升的溶液。-2 稀释。
4. 同样地，对培养液进行系列稀释，以获得浓度为10的稀释液。-3, 10-4, 10-5 以及10-6
5. 从10倍稀释液中取1毫升的培养悬浮液。-3, 10-4, 10-5 以及10-6 将样品分两份分别放入无菌培养皿中。
6. 在每个培养皿中倒入约15至20毫升冷却至约45°C的无菌大豆酪蛋白消化琼脂。将培养皿置于32.5 ± 2.5°C的温度下培养24至48小时。
7. 计算每个平板上的菌落数量，并选择那个稀释度，使得菌落数量不少于10个。5.
8. 使用每种含有不低于10×10^6个细胞/毫升的培养液悬浮液，各加入1毫升。5 cfu/ml；地板上的数量约为25个单位（cfu），分别记录。2 将物品放置在通风良好的区域，让其自然风干。
9. 干燥完成后，按照最新的拭子检测标准操作规程（SOP）进行表面采样，然后测定每平方厘米的总需氧菌计数。2 在取样后的4小时内。
10. 立即用70%体积比的异丙醇（IPA）溶液清洁地面，并让其静置30分钟，以使消毒剂充分作用于挑战测试菌株。
11. 30分钟后，按照标准操作规程（SOP）进行采样，并检测细菌数量。
12. 重复步骤9至12，以确定70%异丙醇（IPA）溶液在室温下24小时、48小时、72小时和96小时后的有效性。
结果计算
使用以下公式计算微生物数量的减少量。对数减少量 = log10(N0) − log10(N)
“Where:”
N0 = 消毒前的微生物数量
N = 消毒后的微生物数量
验收标准
- 在所有时间点上，微生物数量应减少≥90%（即对数减少1个单位）。
- 0小时和96小时样品之间的疗效不应有任何显著差异。
方法2：沉降平板法
在向空气中喷洒70%异丙醇（IPA）溶液之前和之后，允许环境空气中的微生物沉积在琼脂平板上。IPA处理后菌落数量的减少表明70% IPA溶液的有效性。程序；步骤；操作规程
将预培养的无菌大豆酪蛋白消化琼脂平板暴露在空气中2小时。2. 在平板暴露时间结束后，立即用70%（体积比）的异丙醇（IPA）溶液清洁地面。
3. 清洁完成后，用70%体积比的异丙醇（IPA）溶液喷洒该区域，然后立即关闭房间30分钟，以促进消毒液的作用。
4. 在接触30分钟后，立即按照最新的标准操作规程（SOP）对培养板进行处理，并每2小时检测一次每个位置的细菌数量。
5. 重复上述步骤1至4，以确定70%（体积比）IPA溶液在室温下24小时、48小时、72小时和96小时后的有效性。
验收标准
- 在经过异丙醇（IPA）处理后的平板上，菌落数量应比处理前的平板减少至少90%。
- 在24小时、48小时、72小时和96小时的间隔内，不应观察到微生物数量有所增加。
法规要求；监管期望
像美国食品药品监督管理局（USFDA）、世界卫生组织（WHO）和欧洲药品管理局（EMA）这样的监管机构要求制造商对在符合药品生产质量管理规范（GMP）要求的设施中使用的所有消毒剂溶液的稳定性和有效期进行验证。这些监管指南的关键参考文件包括：- 世界卫生组织技术报告系列961，附件6 – 无菌药品的GMP（药品生产质量管理规范）。
- USP <1072> – 消毒剂和防腐剂。
- 欧盟药品生产质量管理规范（EU GMP）附录1（2023年更新）——洁净室清洁与消毒的验证。
API消毒的局限性
70%的异丙醇（IPA）溶液对大多数营养型细菌和病毒有效，但对孢子无效。对于某些能形成孢子的微生物（如枯草芽孢杆菌），或者需要使用杀菌剂或灭菌方法的场合，必须使用额外的消毒剂或灭菌方法。 FDA参考文件第34页 - 消毒效果.在制药生产设施中，验证70%异丙醇（IPA）的有效期是一项关键的GMP要求。通过使用表面网法和沉降平板法进行验证，制造商可以确认70% IPA在其使用期间能够保持其抗菌性能。
通常情况下，新配制的70%异丙醇（IPA）溶液在清洁且密封的容器中、在受控温度下储存时，其有效性可保持96小时。一些制药机构会根据自身的验证数据来设定更长或更短的保质期。