纯化水系统 | 制药指南中文站

制药行业中的纯化水系统

树脂的再生

阳离子交换树脂的再生

注意：在阳离子床再生过程中，务必确保脱气泵处于关闭状态。

在HDPE再生罐中加入约28升去离子（D.M.）水，然后加入约14升33%的盐酸溶液，搅拌均匀后备用注射。具体用量需根据系统设计进行计算。
打开原水进水阀。打开交流过滤器（A.C. Filter）的阀门。
检查阳离子交换器的所有阀门是否都已关闭。
将连接在阳离子交换器阀门上的PVC管子的自由端浸入盐酸溶液中。
根据系统设计要求，打开阀门并控制盐酸溶液的注入速率，使其进入阳离子交换器。（这样可以通过文丘里效应吸入盐酸溶液：在再生过程中，流动方向是顺着重力；而在正常运行过程中，则是逆着重力方向。）
盐酸溶液的注射完成后，立即关闭阀门并冲洗20分钟。
20分钟后关闭阀门，并对阳离子交换器进行反冲洗。
检查pH值。继续冲洗，直到pH值达到2.0到3.0之间。如果pH值低于2.0，则需要继续冲洗更长时间。
再生频率：每周两次。

阴离子交换树脂的再生

注意：在阴离子床再生过程中，务必确保脱气泵处于关闭状态。

取大约36升去离子水（D.M. Water）。 HDPE 再生罐。
将大约4公斤的氢氧化钠溶解在其中。（具体用量需根据系统设计进行计算。）
打开原水进水阀。检查阳离子交换器的反渗透（RO）过滤器阀门是否打开，以及阴离子交换器的所有阀门是否关闭。
将连接到阴离子交换器的PVC管的自由端浸入苛性溶液中。
打开阀门，并控制阀门的开度，以保持每分钟3.5升的腐蚀性溶液注入阴离子交换器的速率，这符合系统设计的要求。（这样可以通过文丘里原理吸出酸溶液——在再生过程中，流体流动方向是依靠重力的；而在正常操作过程中，则是逆着重力方向流动的。）
一旦苛性溶液的注入完成，立即关闭阀门，并对阴离子交换器进行至少30分钟的冲洗。
30分钟后关闭阀门，然后打开阀门，让交换器进行15分钟的冲洗。
在上游冲洗过程中，需要同时打开主开关和配电盘上的开关，以启动脱气泵。
确保所有其他开关均处于“关闭”状态，并且脱气罐中的水位保持在一半以上。
检查电导率和pH值。电导率应低于30 mho/cm，pH值应在7.5至9.5之间。如果电导率高于30 mho/cm或pH值高于9.5，可以继续进行超量冲洗（up rinsing）一段时间。
再生频率：每周两次。

混合床离子交换器的再生

在HDPE再生罐中取约6升去离子（D.M.）水，然后加入约3升33%的盐酸溶液，并进行混合。具体用量需根据系统设计要求进行计算。
将连接到混合床阀门上的PVC管的自由端浸入溶液中。离子交换器加入已制备的溶液中。
在另一个高密度聚乙烯（HDPE）再生罐中取10升去离子水（D. M. Water），然后向其中溶解1.25公斤氢氧化钠（Sodium hydroxide）。具体所需的数量需根据系统设计进行计算。
将连接在混合床离子交换器阀门上的PVC管子的自由端浸入准备好的溶液中。
打开原水进水阀。
检查反渗透（A.C.）过滤器的阀门、阳离子交换器的阀门、脱气罐与脱气泵之间的阀门以及阴离子交换器的阀门是否处于开启状态。
请同时打开主开关和配电盘上的开关，以启动脱气泵。确保所有其他开关都处于“关闭”状态，并且脱气罐中的水位保持在一半以上。
关闭所有正在使用的阀门。打开混合床离子交换器的反冲洗阀门，进行10分钟的冲洗。之后再次关闭所有阀门，保持混合床离子交换器关闭状态5分钟，以便重新分配混合树脂。（此操作通过利用混合树脂之间的密度差异，帮助分离阴离子交换树脂和阳离子交换树脂。）
打开阀门，并控制阀门的开启方式，以确保腐蚀性物质的注入过程至少需要10分钟。
一旦腐蚀性溶液的注入完成，立即关闭阀门并冲洗10分钟。
打开阀门，并控制阀门的开启速度，以确保酸液注入混合床离子交换器的时间至少为10分钟。
一旦盐酸溶液的注入完成，立即关闭阀门12，对酸进行10分钟的冲洗。
关闭阀门10分钟后，启动鼓风机运行10分钟，然后打开阀门让空气排出。这样可以将树脂床重新混合均匀。
立即打开阀门进行最终冲洗。15分钟后，检测电导率和pH值；电导率应低于1 mho/cm，pH值应在6.5到7.2之间。
再生频率：每周两次
检查白色高密度聚乙烯（HDPE）储罐中明矾溶液的液位，液位应超过储罐容积的1/4。如果不足，则按照要求配制明矾溶液。
检查推土机泵是否已进行预充；将推土机的开关切换到“开”（ON）状态后，液体应该会出现在排放管中。如果需要，进行预充操作。
通过调节泵的行程刻度来设置所需的流量。调整行程速率以获得所需量的明矾。通常情况下，行程保持在35的位置，然后调整转速至25，并适当设定时间，以实现10 ppm的浓度目标。

相关：纯化水系统中脱气的重要性及方法

启动程序（Priming Procedure）

移除四功能阀门组件。
将含有镇静剂的溶液通过吸管注入容器中，直到容器被完全填满。
安装四功能阀门组件。
请将电源“打开”，然后拔出压力释放旋钮（红色和黑色），直到明矾溶液从排放管中流出。

明矾溶液的制备

称取约1.5公斤的明矾，将其放入一个聚乙烯袋中。
在100升的高密度聚乙烯（HDPE）容器中加入约70升水，然后加入明矾。
**翻译：** 剧烈搅拌至完全溶解。将溶液体积补足至100升，转移至另一个HDPE容器中。 **解释：** 此描述是制药生产过程中的操作步骤，具体包括： 1. **剧烈搅拌**：确保原料药（API）和辅料（Excipient）充分混合并完全溶解。 2. **体积补足**：将溶液的体积调整至100升，使用适当的溶剂或稀释剂完成这一过程。 3. **容器更换**：将搅拌后的溶液转移至另一个HDPE（高密度聚乙烯）容器中，以确保溶液的储存和运输安全。这些步骤通常用于药品配制或中间体的处理过程中，确保产品质量和合规性。

明矾剂量的计算

翻译结果： “药品生产质量管理规范（GMP）”
每小时用水量 = 约5000升。
所需剂量 = 10 PPM，即每1000升液体中使用10克。
50克用于5000升。
但是用于配制的明矾浓度为1.5%（重量/体积）。
100
因此，所需的明矾剂量（每小时）= 50 × ---- = 3300 毫升。
1.5
调整推土机泵的旋钮

翻译结果： “药品生产质量管理规范（GMP）”如果“速度”（Speed）和“行程”（Stroke）旋钮都调至满刻度的100%，那么推土机泵的满负荷输出量为每小时40升。例如……

速度（即转速调节）保持在25，即满负荷的25%。

“Stroke长度调节”设置为35，即满负荷的35%。

因此，推土机泵的容量等于其额定容量的25%乘以35%。

25 35

= ----- x ---- x 40000

100 100

对于实际输出结果，也会进行同样的检查。

在将原水卸入地下储罐之前，使用便携式仪表检测原水的总溶解固体（TDS）含量（限值：不超过150 ppm），并记录检测结果。如果TDS含量超过150 ppm，则不得继续进行下一步操作。
取之前已经检测过游离氯含量的次氯酸钠溶液。
关于数量，请参考“游离氯百分比 - 所需次氯酸盐的量”图表。
打开地下储罐的入口。
将次氯酸钠溶液加入储罐的进水管中，并记录所加入的次氯酸钠溶液的用量。

相关：水系统的氯化与脱氯处理

商业级次氯酸钠的用量

“用于10000升水的配制过程是必需的。”
所需游离氯的浓度通常为1至3 PPM（百万分之一）。
即：在100,000升液体中包含1千克的某种物质。
10克物质溶解在10,000升（1个储罐）的液体中。
次氯酸钠中的游离氯含量在6.5%到13%（重量/体积）之间。
如果游离氯的浓度为10%（重量/体积比），那么为了维持1 ppm的氯含量，所需的次氯酸钠的量是……
1000
= 100 毫升
10
请使用以下图表来计算次氯酸钠的用量。

“Free percentage”指的是“自由度（degrees of freedom）的百分比”。在统计学和数据分析中，自由度是指模型中可以独立调整的参数数量。例如，在线性回归分析中，自由度的数量会影响模型的拟合优度和统计显著性。含有氯元素	次氯酸钠 “用于给药（Required for dosing）”
6%到7% 7%到8% 8%到9% 9%到10% 10%到11.5% 11.5% 至 13%	300毫升 275毫升 100毫升 100毫升 100毫升 100毫升

测量通过紫外线灯室的水流速率。具体方法是将水收集在一桶中一分钟，然后测量其体积（以升为单位）。接着用体积除以60来计算每秒的水流量（单位为升/秒，LPS）。

请注意，紫外光照射室的体积是以升（liters）为单位来表示的。

根据以下公式计算水在紫外光照射室中的停留时间：

紫外光照射室体积（单位：升）

**停留时间 = ---------------------------------------------**

流量（升每秒，LPS）

在2538埃的波长下，有效杀死微生物所需的最低剂量为30000微瓦秒/平方厘米。

计算所需的最小紫外光强度。

30000

所需的最小紫外强度 = ----------------- 微瓦/平方厘米

**停留时间**

将微瓦（microwatts）转换为毫瓦（mill watts）的方法是用1000来除。

程序；步骤；操作规程
1) 启动去离子（DM）水系统，并检测将输送至蒸馏器的去离子水的电导率。
2) 将纯化水（DM water）完全注入纯化水缓冲罐中。
3) 确认每根柱子顶部的两个蒸汽阀门都是打开的。
4) 打开主蒸汽入口阀，让蒸汽进入第一塔；同时关闭排水阀。
5) 打开蒸馏釜控制面板上的主开关，然后启动进水泵。
6) 根据进水蒸汽的压力调整原料药（DM） feed水的流量，并启动冷却水系统。
7) After a while, water droplets will begin to appear from the steam valves at the top of the first column, followed by steam. Once a continuous stream of steam is coming out from both valves, close the lower valve first, and then the upper one.
8) 同样地，水滴会随着蒸汽从第二列的顶部分阀门中流出。当蒸汽开始连续流动时，先关闭下方的阀门，再关闭上方的阀门。
9) 对于第三列和第四列，按照步骤8中的方法进行操作。
10) 现在，蒸馏水将从出口软管中流出。
11) 倒掉最初的10升蒸馏水，然后检测剩余蒸馏水的电导率。
12) 在当天的操作结束后，关闭主蒸汽入口阀，打开下部排水阀，继续让进水流动一段时间以冷却系统。
13) 关闭进水阀，并打开四根柱子顶部所有的蒸汽阀门。

根据入口蒸汽的压力，调整进水流量和冷却水流量，以确保蒸汽能量的充分利用。

2. 调整并设置排放阀，使得当热蒸馏水的电导率超过1.0微西门子时，排放阀会自动开始排放蒸馏水，并持续排放直到蒸馏水的电导率降至1.0微西门子以下。

3. 定期清洁 DM 水进料管线上的 18 微米 SS 过滤器，以确保进料水的正常流动。

4. 请确保DM水缓冲罐始终有水，以防止空气进入供水管线。

5. 每年对蒸馏釜进行除垢处理；或者当电导率接近设定限值时，或者当蒸馏产量低于额定产量时，也必须进行除垢操作。

使用适当屏蔽的紫外线灯发出的紫外线，已经成功减少了大气中的微生物数量。

“最大值” 紫外线的杀菌活性在2537埃的非电离波长下，紫外线能够激发微生物细胞内的分子，引发有害的细胞内化学反应，可能导致细胞死亡。然而，要杀死营养细胞、细菌孢子和霉菌，必须维持足够高的紫外线强度，并且照射时间必须足够长。

紫外线的剂量是以“微瓦·秒/平方厘米”为单位来测量的。从屏蔽灯发出的紫外线强度在持续使用后会逐渐减弱，可能会降至每平方厘米880微瓦·秒这一最低要求以下。因此，有必要定期监测这些灯/管的强度。为了监测紫外线灯的效率，我们使用了Black Ray紫外线强度计来进行测量。
相关：从水系统中去除病原体
灯具检测程序

在操作 Black Ray UV Meter 以及进行相关测试时，必须佩戴安全护目镜。
2. 将传感器单元按照正确的极性连接到紫外光谱仪（UV meter）上。
3. 检查传感器单元的窗口，确保其清洁。
4. 将金属过滤网安装在传感器窗口上。
5. 每月按照以下方式检查紫外线灯的运行状态：
用浸过70%异丙醇的无绒布清洁灯或灯管。
b. 将传感器单元直接放置在灯或管子上，距离灯的任一端约4至6厘米，同时也要远离灯的中心位置。
c. 读取三次数据，然后计算平均值。
d. 更换灯泡或灯管。如果平均读数低于每平方厘米880微瓦。
e. 按照上述程序检查新的灯管或光源，记录新的读数，并在灯管上标注安装日期。每月检查灯管的亮度并记录下来。
f. 在各个生产部门，每日记录每盏灯/每根灯管的使用时长及工作效率。

紫外线灯强度的测量频率 = 每月一次

燃烧时间测量 = 每日

紫外线灯更换政策

如果紫外线灯的强度低于80微瓦/平方厘米，或者使用时间超过3000小时，就需要更换这些灯。

引言

DM水过滤器需要定期更换和清洗，以确保通过过滤器的DM水质量高且流量稳定。清洗还能防止过滤器堵塞。

程序；步骤；操作规程

A. 常规清洁
1. 从外壳中取出DM水过滤器。
2. 拧下药筒，然后取出药筒两端的橡胶垫圈（如果有的话）。
3. 用蒸馏水彻底清洗垫圈和滤芯。
4. 用预先加热的蒸馏水进行反向冲洗，持续10分钟。
5. 如有可能，用预先加热的蒸馏水冲洗10分钟，然后将其重新安装回外壳中以供使用。
在使用水之前，用清水冲洗外壳3到4分钟，并检查水流速度。
如果上述步骤仍无法确保良好的流速，且仍然存在堵塞现象，那么应将滤芯浸泡在2%的硝酸溶液中2至4小时。浸泡完成后，用流动的去离子水冲洗滤芯，直至完全去除酸痕。然后用过滤后的热蒸馏水进行反向冲洗10分钟。如果条件允许，再用过滤后的热蒸馏水进行正向冲洗10分钟，之后将其重新安装到设备中继续使用。
清洁频率：每两周一次
在纯化水生产线上安装了多种过滤器，这些过滤器的清洁方法如下：
1. 瓶子/安瓿清洗机上装有两条10微米的过滤器。
2. 橡胶塞清洗线上配备了一台20微米的过滤器。
3. 多柱蒸馏釜的进水口处需安装一个18微米的过滤器。
在紫外消毒装置之前，DM生产线上安装了一个40微米的过滤器和一个20微米的过滤器。
5. 一个用于托盘清洗的SS盘式过滤器和一个用于橡胶塞清洗的SS盘式过滤器（过滤精度均为10微米）。
6. 在DM工厂的混合床之后，需要安装一个40微米的过滤器。

引言

该纯化水（DM）生产线配备了一个由六支紫外线灯管串联组成的紫外线杀菌系统，用于在纯化水最终用于容器清洗之前降低其中的微生物负荷。为了确保该系统的有效运行，这些灯管需要在每天操作前后进行清洁。

程序；步骤；操作规程

在开始使用纯化水生产线之前，需要手动操作每根紫外线灯管上的刷子，使其前后移动十次，对所有六组紫外线灯管进行彻底清洁。
2. 现在启动去离子水（DM）生产线，并排放掉通过过滤系统（bank）流出的前五升水。
3. 再次清洁每一个试管，将刷子前后移动三次，同时让水持续流过试管。同时，丢弃大约3升的水。
4. 现在启动紫外线杀菌系统，并使用该系统处理后的水进行操作。
5. 在一天的操作结束后，关闭紫外线灯（UV bank），通过前后移动刷子来清洁试管，并冲洗掉一些水。
注意：
1. 检查储存库中紫外线灯管的强度，并记录其使用情况（包括累计燃烧时间），至少每月记录一次。
2. 清洁刷需要定期进行维护，以防止它们发生堵塞。
3. UV灯管应在使用3000小时后更换，或者当其辐射强度降至（8.8 x 100）微瓦/平方厘米以下时更换，以较早者为准。

1st BED-CATION BED

• 阳离子床使用盐酸进行再生。
酸溶液的用量：48升盐酸（HCl）+ 55升去离子水（DM水），配制成浓度为14%的溶液。
步骤：打开阳离子床容器的特定阀门，通过下流方式引入酸。（在某些设备中，采用文丘里效应通过吸力引入酸）。通过调节阀门来控制酸的流量。在加入/吸入盐酸溶液完成后，关闭吸力阀门，然后完全打开相关阀门，以排放并冲洗阳离子床。
• 床层冲洗时间为15至20分钟，这种冲洗方式属于下流冲洗（down-flow rinse）。
• 对于阴离子床的上流清洗，关闭相应的阀门，然后打开指定的阀门进行排水，直到出水口的pH值达到3.5至4.5之间。

第二层阴离子床

• 阴离子床使用碱进行再生。

碱溶液的用量：13.6公斤氢氧化钠 + 136升去离子水

[浓度溶液 = 14%].

步骤：打开特定阀门，将碱溶液引入阴离子床。（在某些设备中，通过文丘里效应实现酸的吸入）。使用专用阀门控制碱的吸入量，确保碱的加入或吸入过程在20到30分钟内完成。加入或吸入完成后，关闭吸入阀门，并完全打开相应的阀门，让阴离子床进行向下冲洗；向下冲洗持续15到20分钟。

• 在下流冲洗完成后，对阴离子床进行上流冲洗。

• 对阴离子床进行上流清洗时，关闭相关阀门并打开指定的阀门以排放废水。上流清洗完成后，检查排放水的pH值应在9到9.5之间，然后继续冲洗阴离子床，直到水的电导率达到合格标准。

混合床（Mixed Bed）

首先，需要对混合床进行反冲洗，以分离阳离子树脂和阴离子树脂。反冲洗过程持续30分钟。

• 对于反冲洗操作：打开相应的阀门，并同时打开顶部的空气释放阀；反冲洗后，阳离子树脂会沉到底部，而阴离子树脂会留在顶部。这种分离情况可以在床层的下视面板上观察到。

对于混合床，首先使用碱来再生床层的阴离子部分，即床层的顶部部分。

• 需要使用的碱的量 = 2.5公斤 NaOH + 25升水（浓度为10%）。

• 关闭所有阀门；打开混合床的进料阀及其他相关阀门，以便树脂在混合床上进行沉淀。

• 现在通过打开相应的阀门，开始在混合床中加入/抽取碱液。

• 现在进行碱液的冲洗操作，保持所有阀门开启状态，但关闭吸液阀，然后进行30分钟的冲洗。

• 使用酸来再生床层的阳离子部分，即床层的底部部分。

• 对于混合床的酸处理操作，关闭所有阀门，然后打开吸入口阀门。

• 需要使用的酸的量 = 6升盐酸（HCl）+ 12升水。

• 打开相应的阀门以调节流量，使酸在大约20分钟内被加入或吸入。

• 在所有酸都被加入或吸走之后，关闭吸力阀，并完全打开其他阀门，对混合床的下层阳离子区域进行20到30分钟的冲洗。

请注意，酸/碱的添加是在所有床层中自上而下进行的。酸处理和混合床冲洗完成后，需要进行混合床的空气混合操作。

空气混合

• 关闭所有阀门。

• 打开相应的阀门。打开混合床顶部的空气阀门。

• 打开排水阀，将混合床中的水位降至一半。[通过容器的观察玻璃进行观察]。

• 打开空气进气阀和排气阀，通过观察玻璃容器中的情况来确认树脂已充分混合。

• 在空气混合完成后，关闭所有阀门。

• 打开空气排放阀一段时间，以排出混床中积聚的空气，然后完全用水填充混床，并等待水从空气排放阀中流出。让水从空气排放阀中流出10到15分钟。15分钟后，打开排水阀和阀门，清洗所有床层，并检测最终水的pH值。继续清洗床层，直到最终水的pH值在5.5到7.5之间，且电导率在规定的范围内。

碳床（Carbon Bed）

• 关闭向阳离子柱供水的阀门，然后将循环泵切换到关闭位置。

• 打开相应的阀门，让液体排出2分钟。阀门的开启程度应使主压力表上显示10磅/平方英寸（10 lb/in）的压力。

• 打开相应的阀门，进行5分钟的反冲洗。如有需要，可继续反冲洗以确保空气完全排出。

• 打开特定的阀门以排出碳床中的空气。

• 打开和关闭相应的阀门，以确保碳床的正常运行。

• 允许其排空1分钟。

• 打开和关闭相应的阀门以确保正常运行。

• 打开电导率仪的阀门，使流速达到500毫升/分钟，然后检测电导率值。

限制如下：

对于阳离子，其浓度应不超过 30 微西门子/平方厘米（NMT 30 microsiemens/cm²）。

对于混合床（Mix Bed）：电阻率（NMT）应小于或等于3微西门子/平方厘米（3 microsiemens/cm²）。

如果测得的电导率在允许的范围内，打开所有向使用点供水的水阀。2小时后再次检测电导率并记录结果。

再生过程的警戒限值如下：

对于阳离子：NMT ≤ 20 微西门子/厘米2.

对于混合床（Mix Bed）：电阻率（NMT）应为 2.5 微西门子/平方厘米（2.5 microsiemens/cm²）。

引言

有时，小瓶/安瓿清洗机配备有一个储水罐（称为“header tank”），该储水罐用于储存去离子（DM）水，为每次小瓶和安瓿的清洗过程提供连续的水源。根据药品生产质量管理规范（GMP）的要求，必须定期拆卸该储水罐并对其进行彻底清洁。

程序；步骤；操作规程

1. 断开电磁阀的电源。

2. 拆除柔性供水软管。

3. 从洗衣机上拆下储水罐，并将其移到蒸馏釜附近。

4. 使用扳手拧下不锈钢螺母，取下储罐的侧盖，并同时移除橡胶垫圈。

5. 用80°C的热水冲洗罐体内部5分钟。

6. 用干净的海绵擦拭罐体内部、盖子和垫圈，然后用热水蒸馏水再次冲洗罐体、盖子和垫圈三次。

7. 通过将热蒸馏水通过水位指示器三次来清洁它。

8. 通过将蒸馏釜中产生的热水和蒸汽直接通入柔性供水软管来对其进行清洁。

9. 将盖子连同垫圈一起重新装回水箱上，拧紧螺母，然后将水箱重新安装回洗衣机上。

10. 重新连接电磁阀的电源，并将清洗过的柔性供水软管重新安装回储罐上。

注意：每天操作机器结束后，务必将 header tank（集水池）中的水完全排空，因为积水是微生物繁殖的温床。

清洁频率：每周一次

如果微生物计数过高，或者检测到铜绿假单胞菌（Pseudomonas）和大肠杆菌（E. Coli），则需要采取相应的措施。

1) 按照步骤1至步骤5的顺序进行操作。

2) 从内部对罐体进行10分钟的蒸汽灭菌处理，确保蒸汽能够穿透玻璃液位指示器。

3) 用热水清洗盖子、螺母、螺栓和垫圈，然后将其放入蒸汽中加热5分钟。

引言

蒸馏水储存罐用于收集和储存从蒸馏器中获得的无热原蒸馏水。必须将其储存在80°C的温度下，以保持其无热原状态。

除了不含热原外，蒸馏水还必须不含有任何颗粒物。为此，蒸馏水储存罐会定期进行彻底清洁，并且相关清洁记录会得到妥善保存。

程序；步骤；操作规程

1. 关闭加热器，并将罐内所有的蒸馏水从底部排水口排出。接下来，将罐子从多柱蒸馏器上断开连接。将罐子倾斜放在地上，然后拆卸加热元件、垫圈和温度感应元件。

2. 用干净的海绵和过滤后的流动去离子水（DM water）从内部清洁储罐。如果发现任何粘性颗粒，使用尼龙刷和0.05%的苯扎氯铵溶液（50%）进行清洁，然后用流动的去离子水彻底冲洗干净。

3. 最后，用新采集的无热原蒸馏水冲洗三次。同样地，也用新鲜的无热原蒸馏水冲洗加热元件、垫圈和温度传感器三次。

4. 用垫圈固定加热元件和温度传感器到罐体上，并将罐体竖立放置。用盖子封闭罐体，然后将其连接到多柱蒸馏装置上。启动多柱蒸馏装置，收集约50升蒸馏水到罐中，之后彻底排空罐底的水分。

5. 现在将所需量的蒸馏水收集到储罐中，并保持其温度在80°C直至使用。

频率 - 每月

引言

DM水缓冲罐作为DM水的储存设施，主要用于为多柱蒸馏器提供进水。同时，它还负责通过DM水树脂床运行夜间DM水循环系统，以维持DM水的微生物负荷在较低水平。

缓冲罐接收来自最终混合床的DM水，这些水在通过紫外线消毒系统后进入缓冲罐。由于该罐用于储存关键操作所需的水，因此需要定期对其进行清洁，以去除来自DM床的树脂细颗粒及其他污染物。这些污染物可能从DM床进入缓冲罐，同时也有助于降低DM水的微生物负荷。缓冲罐连接了两台泵：一台是进水泵，负责将水输送至多柱系统（multi-column system）。蒸馏第一台泵用于正常生产过程中的供水，而第二台泵则用于夜间DM水的循环使用。

程序；步骤；操作规程

1. 打开罐子的盖子，通过底部的排水口将罐内的水完全排干。

2. 断开连接储罐与供水泵以及循环泵之间的管道。

3. 如果储罐内装有浮球阀，请移除浮球。

4. 用干净的海绵和过滤后的流动去离子水彻底清洗罐体内部，在整个清洗过程中保持底部排水口处于开启状态。

5. 如果在罐体的侧面或底部观察到任何粘性颗粒物，应使用含有0.05%苯扎氯铵溶液的尼龙刷进行清洁，然后用过滤后的流动去离子水彻底冲洗，并保持底部排水口处于开启状态。

6. 最后，用热水冲洗三次。每次冲洗时都要将罐子中的水排干。

7. 同样地，清洁盖子和浮球。

8. 重新连接所有断开的管道。

9. 关闭底部的排水口，从纯化水厂取新鲜的纯化水；同时关闭容器盖子并固定好夹具。

清洁频率：每周一次

蒸馏水

每周都会从蒸馏器中收集新鲜蒸馏的水，用于以下分析：

a. 按照IP要求，在干净的、带塞子的烧瓶中进行化学分析。

b. 微生物计数包括总微生物计数以及对无菌、已封口的烧瓶中是否存在大肠杆菌（E. Coli）和假单胞菌属（Pseudomonas）的检测。

c. 对于热原检测将样品置于一个已经清洁并预先灭菌过的、带有塞子的烧瓶中。

2. 分析完成后，如果检测结果异常，会将检测报告的副本连同警示备注一起提交给无菌部门。

3. 用于冲洗容器、橡胶塞和设备的蒸馏水被储存在80°C的温度下。

**去离子水**

1. 药用纯化水（DM water）从预先指定的地点收集，用于后续的分析。

a. 根据IP要求，用于化学分析的样品需从洗瓶机中取出后，立即收集到干净的、带有塞子的烧瓶中（每周进行一次）。

b. 对于微生物分析，包括总菌数检测以及大肠杆菌（E. coli）和假单胞菌属（Pseudomonas）的检测，样本需从以下部位收集到预先灭菌并装有塞子的干净烧瓶中，然后分别进行检测（每周一次）。

i. 在与生产线平行的紫外线（UV）处理装置之后。

ii. 来自小瓶/安瓿清洗机的储存罐（头部）。在收集这些物品的过程中，采取了极其严格的预防措施，以防止任何可能的微生物污染。污染；杂质.

c. 使用中的去离子（DM）水的电导率每天都会进行检测，并将检测结果记录在无菌部门的相关记录中。

验收标准

化学分析

根据药典规定，DM水（纯化水）的使用必须符合相关质量标准。

蒸馏水

微生物限度：

DM水中总菌落计数（T.M.C.）的限值 = 不超过50 cfu/ml。

蒸馏水的总菌落形成数（T.M.C.）限值 = 不超过 10 个菌落形成单位/毫升（cfu/ml）。

电导率限值：

DM水 = 电导率不超过3.0微西门子

蒸馏水 = 不超过1.0微西门子

原料药（DM）用水中的微生物数量应该很低。DM（原料药）生产过程中的床层是微生物潜在生长的主要来源，而床层中的积水会导致微生物繁殖。让水流过床层可以保持微生物数量在较低水平。因此，在生产设备不使用时，需要确保床层中有持续的水流。这种持续的水流可以通过循环回路来实现，该回路在整个夜间以及设备不使用期间都保持“开启”状态。

程序；步骤；操作规程

关闭混合床与缓冲罐之间的阀门，以便将床层中的水分排出。

2. 然后关闭碳床和阳离子床之间的阀门。

3. 然后启动循环泵，并打开缓冲罐与阳离子床之间的阀门。

4. 然后打开混合床与缓冲罐之间的阀门。

5. 现在，这些泵将从缓冲罐中抽取水，将其输送到阳离子床、阴离子床，然后再进入混合床。经过紫外线消毒管和40微米过滤器后，水会重新回到缓冲罐，从而完成整个循环过程。

A. 目的

此次校准的目的是确定用于性能测试方法的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）和/或酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）的实际紫外光（UV）敏感性，从而确定在以下剂量下能够实现的对数减少值：枯草芽孢杆菌为 38000 mW-sec/cm²，酿酒酵母为 16000 mW-sec/cm²。

B. 设备

组装一个装置，该装置能够将少量搅拌过的样品置于几乎准直的辐射束中。随后可以使用辐射计来测量辐射强度（I0）。

应使用与系统中使用的灯具有相同压力的UV灯（非研究对象），将其连接到镇流器和电压调节器上（见图）。将灯悬挂在涂成深黑色的管子上方。使用一个小盘子中的溶液，该盘子的直径应等于或小于准直管的直径，并确保溶液深度达到1厘米。移除盘子和搅拌器后，在液体表面测量I0值，然后将辐射计放置在相应的位置。

C. 计算

使用辐射计测量得到的 I0 值，并根据相关公式计算搅拌溶液中的平均强度。该计算需要用到在 254 nm 波长下测得的吸光度数据。

I0 (1–e–aeL)

I ave = ————————

aeL

ae “吸光度每厘米至基线e”

L = 溶液在准直光束中受照射的深度（厘米）

I0 = 测量得到的强度（单位：mW/cm²） )

I ave = 平均强度（mW/cm²） )
相关：纯净水与去矿物质水的区别

D. 生长培养基

1. 营养琼脂配方

每升蒸馏水或去离子水中的成分含量

牛肉提取物 3 克。

蛋白胨 5 g.

琼脂

2. YM培养基（酵母用）的配方

• 肉汤

每升蒸馏水或去离子水中的成分含量

酵母提取物

麦芽提取物

蛋白胨

葡萄糖

• 明胶

与“broth plus Agar 15 g”相同。

• 抗生素储备溶液：2毫升/100毫升琼脂培养基。

**不要对抗生素储备液进行高压灭菌处理。待高压灭菌后的YM琼脂冷却至约45-50°C后，再无菌条件下加入抗生素。**

• 每100毫升蒸馏水或去离子水中所含的抗生素储备溶液成分……

氯四环素 0.5克

氯霉素 0.5 克。

3. 将培养基溶液放入高压灭菌器（蒸汽灭菌器）中，在15磅的压力（121°C）下进行15分钟的灭菌处理。

4. 缓冲稀释用水

E. 好氧乳杆菌孢子与酿酒酵母的培养

从美国典型培养物保藏中心（American Type Culture Collection, ATCC）获取培养物，并按照相关说明进行复苏。

使用以下 ATCC 菌种：

枯草芽孢杆菌 ATCC #6633

酿酒酵母 ATCC # 18824

F. 挑战性微生物敏感性测试的校准

1. 枯草芽孢杆菌（孢子）的敏感性

接种10毫升的营养琼脂斜面，在35°C下培养24小时。±2小时

• 将这种培养物进行连续三次传代培养，每次传代间隔24小时，并将培养物转移到新的斜面培养基上。

• 在第三次转移后，孵育时间结束后，用2毫升缓冲水清洗斜面培养基。

将2毫升的微生物转移到含有10毫升缓冲水的试管中，然后混合该悬浮液。

将1毫升的悬浮液转移到12个装有营养琼脂的法国方形培养瓶中。将接种后的培养瓶置于35°C下培养24小时。

• 用5毫升缓冲水和20-30颗玻璃珠清洗所有12个斜面培养皿，直到斜面上所有可见的微生物生长都被清除干净。

• 将所有12个样品混合到一个烧瓶中。将悬浮液置于65°C的水浴中加热15分钟，期间需不时搅拌烧瓶以确保均匀受热。

• 将悬浮液以2500转/分钟的速度离心15分钟，然后小心地去除上清液。

• 使用99毫升的缓冲水分别洗涤细胞三次。每次洗涤之间进行离心，以去除上清液，同时保留孢子。

• 在第三次洗涤后去除上清液，将孢子重新悬浮在50毫升的缓冲水中。

• 用 Whatman #1 过滤器过滤悬浮液。如果堵塞严重，可能需要使用多个过滤器。

• 最终过滤后的孢子悬浮液将用于校准和测试处理设备中的紫外线（UV）照射系统。

• 使用倾注平板法，在适当的稀释度下（10倍稀释度除外）确定孢子的最终浓度。⁷ -10⁸ （孢子浓度：[具体数值] spores/ml）。将平板在35°C下培养48小时，之后进行读数。

• 混悬液可以在2-4°C的温度下无限期储存；但在每次使用前都需要进行计数，以确保其浓度符合要求。此外，在每次使用前还必须进行孢子菌株测试，以确认孢子是主要存在的微生物类型。

• 将孢子悬浮液的储备液进行稀释，使其浓度达到 5 × 10^6 的水平。⁴ 翻译结果：达到1×10的水平。⁵孢子/毫升

• 在悬浮液液面处，测量准直光束的紫外灯输出强度（I0）。

• 向培养皿（推荐直径不超过60毫米）中加入适量的稀释孢子悬浮液，并使用一个小型磁力搅拌器（推荐尺寸为10毫米长×3毫米直径）。按照预定的时间间隔对样品进行照射，以便获得微生物存活情况的图表。与……相对；与……相比该时间范围内的总紫外线剂量。

• 必须在无菌条件下处理经过辐照处理的样品，并在辐照后30分钟内进行分析。分析前，将样品存放在避光环境中。使用孔板技术进行分析：每个样品需在含有营养琼脂的培养板上重复接种三次，然后在35°C下培养48小时。48小时后进行计数，之后再继续培养72小时，每24小时记录一次数据。最终结果应以最后一次记录为准。如果出现菌落过度生长的情况，则以菌落过度生长前的数据为准。

• 制备孢子校准曲线，其横坐标为 log Ns，纵坐标为 No。与……相对；与……相比测量剂量。根据图表，确定紫外线剂量为 38000 mW-sec/cm2 时的灭活效果。

No = 初始孢子浓度

Ns = 每个暴露样本上三次平板计数的平均值

2. 酵母（S. cerevisiae）的敏感性

• 将10毫升的YM培养基接种到试管中，然后在25°C的摇床水浴中以适当的速度（约225转/分钟）培养24小时（再加上2小时），以确保培养物充分通气。

• 将这种培养物进行连续三次传代培养，每次传代间隔24小时，并将培养物转移到新的肉汤培养管中。

• 在第三次转移后，将酵母细胞均匀悬浮在试管中，然后分别用移液器将5毫升酵母细胞转移到两个2升的烧瓶中，每个烧瓶内含有1升YM培养基。将烧瓶置于25°C的水浴振荡器上培养，振荡速度应足以使培养物充分通气（约225转/分钟），培养时间为24小时。

• 将悬浮液以2500转/分钟的速度离心15分钟，然后小心地移除上清液。

将2升离心后的悬浮液中的所有细胞汇集起来。

• 使用99毫升的缓冲水分别洗涤细胞三次。每次洗涤之间进行离心，以去除上清液，同时保留细胞。

• 在第三次洗涤后去除上清液，将细胞悬浮在50毫升的缓冲水中。

• 最终制备的悬浮液将用于治疗设备的校准和测试中的紫外线（UV）照射。这些细胞必须在收获后24小时内使用，并在此期间存放在室温下。

• 使用倾注平板法，在适当的稀释度下确定孢子的最终浓度（除……情况外）。 10⁷ -10⁸ 细胞浓度为（细胞数/毫升）。将平板在25°C下孵育48至72小时，之后进行读数。

• 将酵母悬浮液原液进行稀释，以获得所需的浓度。 10⁴ 达到10⁵ 细胞/毫升（cells per milliliter）

• 在悬浮液液面处测量准直光束的紫外灯输出强度（I0）。

• 向培养皿（推荐直径不超过60毫米）中加入适量的稀释酵母悬浮液，并配备一个小型磁力搅拌器（推荐尺寸为10毫米长×3毫米直径）。在预先记录的时间间隔内对样品进行照射，从而获得该时间段内微生物存活率与总紫外线剂量之间的关系图。

• 必须在无菌条件下处理经过辐照处理的样品，并在辐照后30分钟内进行分析。分析前，将样品存放在避光环境中。使用孔板技术进行分析：每个样品需用YM琼脂培养基分三次接种到孔板上，然后在25°C下培养5天。在48小时时记录一次菌落数量，之后再继续培养72小时，每24小时记录一次菌落数量。最终结果以最后一次记录为准。如果出现菌落过度生长的情况，则以菌落过度生长前的最后一次记录为准。

• 制备对数Ns/No值的酵母校准曲线。与……相对；与……对比测量剂量。根据图表，确定紫外线剂量为 16000 mW-sec/cm2 时的灭活效果。

No = 初始细胞浓度

Ns = 每个暴露样本上三次平板计数的平均值

特别说明：

辐照处理是在8个时间点进行的，总共进行4次对微生物的灭活操作，以确保数据的一致性。

剂量的计算基于以下假设：测量得到的 I0 值中有 4% 来自水面反射。剂量计算采用“平均强度乘以暴露时间”的公式。所使用的孢子或酵母浓度使得溶液的紫外吸收非常低，因此吸收度计算中的任何误差都可以忽略不计。

备注：

准直管的长度应至少为53厘米（21英寸），其内部应涂成纯黑色。

2. 该支撑架应具有调节功能，能够将准直管升高或降低至培养皿的表面。

3. 紫外线（UV）剂量的测量必须在培养皿表面暴露的同一位置进行。

系统制造商/供应商需要提供以下附加文件：

**结构完整性测试**（这些测试旨在评估整个系统的基本设计、材料及制造质量，包括刚性治疗舱、一次性使用的治疗舱以及承受管路压力的柔性管路单元。）

这些文件包括：

a. 静水压力测试 - 完整组装

b. 静水压力测试 - 金属压力容器

c. 非金属压力容器的爆破试验

d. 循环测试 - 非金属一次性压力容器、阀门及控制系统，以及开放式排放装置。

2. 紫外线（UV）报警性能测试证书。

用于原料药生产的水的确认（Performance Qualification for Water Used in API Production）

引言

纯化水用于原料药的制造。而原水通常用于……（The raw water is generally used for……）

(i) 用明矾处理以去除胶体物质。

(ii) 通过砂滤器、滤芯过滤器去除颗粒物。

(iii) 经过活性炭处理以去除色素。

(iv) 经过树脂处理以去除可溶性盐分。

整个过程经过精心设计并经过验证，以确保将原水转化为符合药典要求的纯化水。

净化过程的性能按照以下要求进行检测/验证。

测试；检验	要求；规定；需求	备注；说明；附言
描述	它应该是一种清澈、无色、无味且无臭的液体。
酸度或碱度	向10毫升的新鲜煮沸并冷却后的硼硅酸盐玻璃烧瓶中加入0.05毫升甲基红溶液，所得溶液不应呈现红色。向10毫升水中加入0.1毫升溴百里酚蓝溶液，所得溶液不应呈现蓝色。
氨（Ammonium）	向20毫升水中加入1毫升碱性碘化汞试剂，静置5分钟。从垂直方向观察时，该溶液的颜色不应比以下溶液更深：即将1毫升碱性碘化汞溶液加入到4毫升氨标准溶液（1 ppm NH4）和16毫升无氨水（0.2 ppm）的混合液中所得到的溶液。
钙和	向100毫升水中加入2毫升pH值为10.0的氨镁缓冲液、50毫克媒染黑II混合物以及0.5毫升0.1摩尔的乙二酸钠溶液。反应后不应产生蓝色。
重金属	在一个玻璃蒸发皿中，将150毫升溶液在水浴中蒸发至剩余15毫升。所得溶液中有12毫升符合重金属限量测试的要求（限值为0.1 ppm）。使用铅标准溶液（铅的限值为1 ppm）来制备标准品。
氯化物	向10毫升水中加入1毫升2摩尔/升的硝酸和0.2毫升0.1摩尔/升的硝酸银。溶液的外观在15分钟内没有发生变化。
硝酸盐	向装有5毫升水的试管中（试管需浸入冰块中），加入0.4毫升浓度为10%（重量/体积）的氯化钾溶液，0.1毫升二苯胺溶液，然后边摇晃边逐滴加入5毫升硫酸。随后将试管转移至……
	50℃的恒温水浴°将溶液C静置15分钟。溶液中出现的蓝色不应比使用4.5毫升无硝酸盐水和0.5毫升硝酸盐标准溶液（2 ppm NO3，即0.2 ppm）按相同方法制备的溶液中的蓝色更深。
硫酸盐	向10毫升水中加入0.1毫升2摩尔的盐酸和0.1毫升0.25摩尔的氯化钡。该溶液的外观应在至少一小时内保持不变。
易氧化物质	向100毫升水中加入10毫升1摩尔的硫酸和0.1毫升0.02摩尔的过锰酸钾溶液，然后煮沸5分钟。粉红色应完全消失。
非挥发性物质	将100毫升水在水浴中蒸发至干涸，然后在100℃下进行干燥。°C to 105°C. 剩余物含量不超过0.001%（重量/体积）。
铝	如果用于制备透析溶液的水符合铝含量的检测要求：向400毫升水中加入10毫升pH值为6.0的醋酸盐缓冲溶液和100毫升蒸馏水。该溶液的铝含量应低于10微克/升的限值。作为参考溶液，可以使用以下混合物：2毫升铝标准溶液（含铝2 ppm）、10毫升pH值为6.0的醋酸盐缓冲溶液以及98毫升蒸馏水。制备空白对照溶液时，则使用10毫升醋酸盐缓冲溶液。缓冲溶液，pH值为6.0 R和100毫升蒸馏水R。
微生物污染	总好氧菌计数不得超过每毫升100个微生物，该计数通过膜过滤法，并使用琼脂培养基B进行测定。

	倾注平板法（Pour-Plate Method）使用直径为9厘米的培养皿，向每个培养皿中加入1毫升按照描述方法制备的样品，以及15至20毫升适合细菌培养的液化琼脂培养基（例如培养基B）。对于每个稀释度，至少准备两个培养皿。将培养皿置于30°C至35°C（真菌为20°C至25°C）下培养5天，除非在更短的时间内就能获得可靠的计数结果。选择在某一稀释度下生长且菌落数量最多（细菌少于300个菌落，真菌少于100个菌落）的培养皿。计算这些计数的算术平均值，并得出每克或每毫升中的菌落形成单位数。
1) 大肠杆菌检测	将1毫升水样无菌转移至带螺旋盖的容器中，加入100毫升营养肉汤，摇匀后静置1小时，再次摇匀。然后松开盖子，在37℃下进行培养。°C表示18到24小时。
主要测试	将上述方法制备的1毫升富集培养物无菌转移至含有阳性对照和阴性对照的试管中，同时转移至含有5毫升无菌Maconkey肉汤的试管中（试管需倒置）。达勒姆将样品放入试管中，然后在37℃下孵育48小时。°C. 酸性物质的生成（颜色从红色变为黄色）以及气体的释放（容器倒置后出现气泡）。达勒姆“不应看到任何管子（或管道）。”
次要测试	将装有酸和气体的试管中的1毫升内容物分别加入两个试管中：(a) 含有5毫升无菌Maconkey肉汤的试管，以及(b) 含有5毫升无菌蛋白胨水的试管。培养24小时后，观察试管(a)中是否产生酸和气体，同时观察试管(b)中是否生成吲哚。为了检测吲哚的存在，加入0.5毫升Kovac试剂，充分摇匀后静置1分钟。如果试剂层出现红色，则说明存在吲哚。在二次测试中同时检测到酸、气体和吲哚的存在，可判断为大肠杆菌（Escherichia Coli）的存在。

2) 检测沙门氏菌培养基的制备	将1毫升水样无菌转移至带螺旋盖的容器中，加入100毫升营养肉汤，摇匀后静置1小时，再次摇匀。然后松开盖子，在37℃下进行培养。°C表示18到24小时。
主要测试（Primary Test）	向两个试管中分别加入1.0毫升上述制备的富集培养液：一个试管含有10毫升salenite F培养基，另一个试管含有10毫升tetrathionate培养基。然后在36°C至38°C的温度下孵育48小时。从每个试管中取培养物，接种到三个含有不同培养基的平板上：(i) Brilliant Green琼脂，(ii) Desoxycholate Citrate琼脂，以及(iii) Bismuth Sulphate琼脂。将这些平板在36°C至38°C的温度下再孵育18至24小时。如果出现不符合以下描述的菌落，则视为不合格。亮绿色琼脂：质地细腻、透明或呈不透明状，颜色可能为白色、粉红色或红色；其周围通常会有一圈粉红色或红色的区域。 2. 脱氧胆酸柠檬酸盐：无色且不透明，可能含有琼脂，也可能不含黑色颗粒。 3. 硫酸铋琼脂：黑色或绿色
次要检验（Secondary Test）	将此测试作为辅助/确认性测试来执行。将表1中列出的特征显示的任何菌落转接至三糖铁琼脂（Triple Sugar Iron Agar）上：首先将接种针插入斜面表面进行接种，然后使用同一接种针在尿素培养基（Urea Broth）试管中进行接种。在36°C至38°C的温度下培养18至24小时。如果刺孔培养基（stab culture）中产生酸和气体（无论是否伴有黑色沉淀），且三糖铁琼脂表面的菌落没有酸性反应，同时尿素培养基也没有红色变化，说明存在沙门氏菌（Salmonellae）。如果刺孔培养基中产生酸但没有气体，则需要通过凝集试验来确认该微生物的身份。
控制测试	执行控制测试时，需使用1.0毫升的富集培养液以及含有10至50株Salmonella Abony（NCTC 6017）的肉汤柱（该肉汤柱由在营养肉汤中培养24小时后的菌株制备），对试管（a）和（b）进行接种。如果测试结果未能显示控制样本中含有沙门氏菌，则该测试无效。
3) 检测铜绿假单胞菌（Pseudomonas）	将1毫升水加入含有100毫升Centrimide培养基的无菌螺旋盖瓶中，然后在30℃下孵育。°C 到 32°将样品在含有Cetrimide琼脂层的培养板上传代培养72小时，然后在30℃下进行孵育。°C 至 32°将样品置于48摄氏度下培养。通过革兰氏染色法观察培养结果。培养过程中不应出现革兰氏阴性杆菌。
氧化酶测试：	滴入2到3滴 freshly prepared 1% w/v（重量/体积）的溶液。在一张滤纸上（建议使用 Whatman 1 号滤纸），滴加 N,N,N,N'-四甲基-P-苯基二胺二氯化物（N,N,N,N'-tetramethyl-P Phynylendediammonium dichloride），然后用可疑菌落进行涂抹。如果在 5 到 10 秒内没有出现紫色，那么该菌落即为阴性（即不含有该物质）。
控制测试	进行对照试验时，需在无菌、带螺旋盖的容器中加入规定量的培养基以及含有10至50株铜绿假单胞菌（NCTC 6750）的肉汤（该菌株需从24小时培养的营养肉汤中制备）。培养基的体积应为100毫升。试验结果应显示存在革兰氏阴性杆菌；同时，在滤纸上使用1.0%（w/v）的N,N,N,N'-四甲基-对苯基乙二胺二氯化物溶液处理后，应出现紫色反应。
4) 检测金黄色葡萄球菌	将1毫升水样放入一个无菌的螺旋盖瓶中，该瓶内含有100毫升液体大豆酪蛋白消化培养基，然后在30℃下进行培养。°C 到 32°C培养72小时。然后转种到含有甘露醇盐琼脂培养基或Vogel Johnson琼脂培养基的平板上，并在30℃下培养。°C 到 32°将样品在48小时内培养，然后通过革兰氏染色法观察其生长情况。在甘露醇盐琼脂培养基中，不应出现黄色菌落的革兰氏阳性球菌（呈簇状）。在沃格尔-约翰逊琼脂培养基中，也不应出现被黄色圈包围的黑色革兰氏阳性球菌菌落。

凝固酶试验	将来自甘露醇盐琼脂培养基或Vogel Johnson琼脂培养基上琼脂表面的可疑菌落转移至单独的试管中，每个试管中加入0.5毫升哺乳动物血浆（最好是兔或马的血浆），可以添加适当的添加剂，也可以不添加。在37°C的水浴中孵育这些试管，三小时后开始观察，并在之后的适当时间间隔内继续观察，直至24小时。观察过程中，不应出现任何程度的凝固现象。
阳性对照品	进行对照试验时，需重复原有试验步骤，并向无菌螺旋盖瓶中加入规定量的培养液以及含有10至50株金黄色葡萄球菌（ATCC 6538, NCTC 10788）的肉汤。这些细菌需从在液体大豆酪蛋白消化培养基中培养24小时后获得。该试验应能证明金黄色葡萄球菌的存在。

用于原料药（API）生产的水的分发和处理系统的设计确认
用于原料药（API）制造的水必须符合相关质量标准。储存与分发为了避免化学污染或微生物污染，这些污染可能会对中间体或成品的药物的反应过程或质量产生不利影响。
在设计确认完成后，必须考虑制剂的安全储存和正确处理方法。
水必须通过加热循环系统进行输送。
2. 水应储存在75至80摄氏度的温度下。
3. 整个系统，包括储罐和管道等，应定期加热至75°C。
4. **“Dead legs”** 在制药行业中，**“Dead legs”**通常指的是生产流程或管道系统中的死胡同或阻塞部分，这些地方会导致物料或流体无法正常流动，从而造成浪费或生产效率下降。例如，在药品生产线上，如果某个管道或阀门堵塞，物料可能会在这些区域积聚，导致生产停滞或质量问题。为了解决这个问题，企业需要定期检查和维护生产设备，确保生产流程的顺畅进行。在运输过程中应避免这种情况。
5. 应对用于储存罐和管道的建造材料进行严格检查。如果大宗药品对金属含量非常敏感，那么在选用这些材料时必须格外小心。
6. 316L 不锈钢应优先选择使用管道和配件。
在输送管道中，应避免使用螺纹接头。
8. 应使用微滤膜过滤器来保护出口/通风口。
9. 管道应定期进行熏蒸处理。
10. 储存罐应定期进行灭菌处理。