[if !supportLists]1.0 目标：
本研究的目的是开发一种分析方法，用于测定新产品的含量及有关杂质。 高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography） 或者 紫外-可见分光光度计 根据适用情况。
2.0 引言与概述：
本指南提供了关于分析方法各个方面的分析开发工作的详细信息。
3.0 范围：
IUPAC名称
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国际非专利药名（International Non-Proprietary Name）
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分子式
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CAS编号
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化学结构
1:1外消旋体混合物
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分子量
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溶解度
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外观；外观性状
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Pka
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LogP
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BCS class
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pH值与溶解度关系曲线
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pH稳定性曲线
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多态性
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异构现象
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光稳定性
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熔点oC)
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密度
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吸湿性
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杂质
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**专论**
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官方配方；正式制剂规格
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5.0 产品详细信息：
名称
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分子量
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分子式
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IUPAC名称
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化学结构
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分子的状态：符合美国药典（USP）、欧洲药典（EP）或公司内部标准（In-house）。
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剂型：片剂/胶囊/口服液/注射液
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剂型规格
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最大日剂量
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每日最大剂量的参考/依据
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报告阈值
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识别阈值（Identification Thresholds）
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定量阈值
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关于分析特性的文献
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溶解度
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pKa
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关于代谢物的信息
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5.1 文献综述
5.2 药典中对原料药（API）与制剂杂质的相关参考条款
6.0 原料药的合成路线：
7.0 杂质的结构：
7.1 杂质的极性与分析物的极性对比
根据结构，对极性（与分析物相比是极性较低还是极性较高）得出基本结论。
8.0 色谱条件：
8.1 检测器的选择：
根据分析物及其杂质/降解产物的特性，说明选择特定检测器的理由。
如果使用多个检测器来估计某些杂质的存在，必须明确说明这一点。
8.2 初始波长选择的基础（针对紫外光谱（UV）、折射率（RI）和电喷雾质谱（ELSD）检测方法）：
（应根据分析物及其杂质/降解产物的光谱来确定）
8.3 缓冲液及pH值的选择：
（讨论基于 pKa 确定 pH 值的依据，以及根据杂质分离情况来选择缓冲液的缓冲范围。）
记录在不同pH条件下杂质的分离情况，并说明选择特定pH值的原因。请粘贴相关的色谱图。
pH值的最终确定应基于稳健性数据（即在目标pH值及其±0.2范围内的数据）。
8.4 列选择：
初始的色谱柱选择是基于对分析物及其杂质的极性评估，这些评估是根据它们的官能团来进行的。
8.5 洗脱模式：
使用含有所有可能杂质的样品来运行这些默认梯度，以便准确评估杂质的极性范围。
9.0 用于方法开发的样品：
项目1：
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||
时间
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缓冲液
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有机相
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0.01
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50
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50
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60
|
5
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95
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70
|
5
|
95
|
71
|
50
|
50
|
75
|
50
|
50
|
观察结果：
项目2：
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|||
时间
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缓冲液
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有机相
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0.01
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95
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5
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|
60
|
5
|
95
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70
|
5
|
95
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71
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50
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50
|
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75
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50
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50
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观察结果：
根据梯度设计中水含量和溶剂含量的不同，从洗脱图中得出极性杂质和非极性杂质的结论。
文件条件（Document conditions） 流动相（这些参数包括柱子类型、流速、柱温以及梯度程序，这些设置共同决定了色谱分离条件的最终确定。）
（通过比较不同色谱柱的分离特性，记录决定最终选用某色谱柱的依据。）
记录柱子的描述和特性，包括长度、内径、粒径、碳载量百分比、孔径、表面积、末端封盖等参数。
记录所有替代条件，以证明某些杂质无法被遗漏或估计错误。
10.1 溶剂选择：
应根据溶解度（在制剂中的提取能力）、峰的对称性以及溶液的稳定性来进行判断。
10.2 溶解度：
10.3 样品基质中分析物峰的测定百分比（%）：
（对于制剂产品，需记录能够使样品中分析物峰的浓度达到95%以上的操作程序及所用稀释剂。）
10.4 溶液的稳定性：
（至少初步估计溶液在12小时内的稳定性，并在后续获得新数据时更新相关数据。）
11.0 干扰研究：
记录空白样品、安慰剂样品以及过滤器对实验结果的干扰情况。同时附上相关样品的色谱图。
12.0 建立高效液相色谱系统（HPLC）及色谱柱的耐用性测试方法：
12.1 两种不同的高效液相色谱系统（例如 Waters、Agilent、Shimadzu）：
（记录两种不同型号的HPLC系统在分离杂质时的差异。）
12.2 两个不同的列（其中一个最好是新列）：
记录两种不同型号色谱柱中杂质的分离情况。
12.3 确定色谱参数的灵敏度：
记录pH值、流速、柱温以及流动相组成的稳定性数据。
文件 RT、RRT、杂质名称、拖尾因子、每种条件下的分辨率以及相应的样品色谱图。
12.4 测试浓度与注射体积：
记录最终确定测试浓度和注射体积的依据，确保其符合“检测限（LOQ）≤报告阈值”的标准。
13.0 强制降解实验及稳定性指标的确立：
记录降解条件、降解细节，并附上色谱图和纯度曲线。
通常可以使用以下格式。或者（具体取决于分子的特性）。
压力类型
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应力条件
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热处理的；与温度相关的
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在105°C的温度下保持12小时或24小时。
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水
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回流处理12小时。
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酸
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回流处理12小时。
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基础；底数；基准
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回流处理12小时。
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氧化
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在实验室台面上放置24小时。
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光；光线；明亮
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200瓦特，120万勒克斯小时
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湿度
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相对湿度（RH）为90%，持续7天。
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RRT
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降解百分比
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名称
（已知/）
未知的；不清楚的
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**峰值纯度**
合格；通过
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备注；说明；附言
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热处理的；与温度相关的
|
水
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酸
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基础；底数；基准
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氧化
|
光；光线；明亮
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湿度
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是/否
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工艺/降解产物
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||
（捕获所有已知和主要的未知降解产物峰。）
结论：
所有已知和未知的杂质/降解产物正在彼此分离，并且与分析物峰分离。
所有检测到的峰都被确认为纯的。
13.1 质谱研究：
记录对主要降解产物进行的质量谱研究结果。
（将LC-MS方法及样品色谱图作为附件附上。）
13.2 质量平衡研究：
记录受压样品的%含量测定结果（该结果需根据峰高小于1AU的API标准进行计算）。
记录降解的总体百分比，并进行质量平衡计算。
压力类型
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降解百分比
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%含量测定；%效价测定
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总计；总数
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备注；说明；附言
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热处理的；与温度相关的
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||||
水
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||||
酸
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基础；底数；基准
|
||||
氧化
|
||||
光；光线；明亮
|
||||
湿度
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13.3 波长确定的依据：
（应根据强制降解样品和稳定性样品中杂质峰的光谱重叠情况来判断，如果有的话。）
（请附上强制降解/稳定性样品的光谱叠加图。）
14.0 建立相对关系 响应因子（Response Factor） （RRF）与回收率：
记录使用至少两种不同权重计算得出的回收率（RRF），并通过相应的回收率研究来验证这些计算结果的准确性。
原料药标准批次编号： 生效期：
已知杂质的名称
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杂质批次编号
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纯度百分比
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RRT
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RRF
|
回收率（% Recovery）
根据相对回收率（Relative Recovery Factor, RRF）进行计算。
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备注；说明；附言
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15.0 原料药（API）与制剂制备方法的比较
如果使用的方法不同，需将每种方法分析得到的残留溶质（RRT）和杂质百分比记录下来并进行比较。记录的杂质数量和百分比必须一致。
16.0 药典方法与企业内部方法的比较：
（如果对于所分析的化合物存在任何官方认可的方法，应建立并记录这些方法的等效性或优越性。）
“如果发现任何药典方法存在不足之处，请将相关信息通报给相应的药典管理部门，并附上沟通记录及对方的回复。”
17.0 选择定量方法的理由：
记录选择定量方法（如面积归一化法、稀释标准品法或内标法）的依据。
（如有排除标准，请将其记录下来，并说明排除的理由。）
18.0 系统适用性标准的选择：
记录选择...的依据。 系统适用性 诸如分辨率（resolution）和信噪比（signal-to-noise ratio）之类的标准。 **尾随因子（Tailing Factor）**%RSD / 峰响应比 理论板数（Theoretical plates）, 产能利用率 （其他等）
19.0 API合成路线不同阶段的分析方法（在最终制剂阶段之前）：
记录每个阶段的反应方案，包括反应物、中间体、溶剂、催化剂以及可能的副产物。
记录用于估算原料药（API）制造过程中不同阶段纯度/杂质的方法，并附上相应的样品色谱图。
请提供关于逐步消除各种杂质的文件或报告。
20.0 结论：
通过说明该方法的稳定性特性来记录实验结论。
请对该方法中的任何特定敏感性进行评论。
请对使用该方法时需要采取的任何特殊预防措施进行说明。
请提供具体的文件处理说明（如果有的话）。
记录该标准品的吸湿性以及具体的储存条件（如果有的话）。
请提供/附上杂质规格最终确定的依据文件。
21.0 附录：
方法开发报告中应附上附件。
[if !supportLists]22.0 参考文献：
[if !supportLists]23.0 缩写：
编号：
|
数字；号码
|
+
|
正负；大约；上下浮动
|
即；也就是说
RRT
|
那就是；也就是说
相对保留时间
|
原料药（Active Pharmaceutical Ingredient）
%
|
**活性药物成分（API）**
百分比
|
紫外光（Ultraviolet Light）
|
紫外线（UV）
|
RI
|
折射率
|
ELSD（Electrospray Laser Desorption Ionization Mass Spectrometry）
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蒸发光散射检测器（Evaporative Light Scattering Detector）
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[if !supportLists]24.0 [endif]修订历史：
S. No.
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修订编号
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生效日期
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变更控制编号：
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另请参阅： 分析方法验证方案
提交人：
迪帕克·多特（Dipak Dhote）
纳希克-422010
印度马哈拉施特拉邦。
电子邮件：dipak.d@bluecrosslabs.com
提交人：
迪帕克·多特（Dipak Dhote）
助理 分析研发经理
蓝十字实验室 有限公司纳希克-422010
印度马哈拉施特拉邦。
电子邮件：dipak.d@bluecrosslabs.com