碧迪安（Biomerieux）试剂盒的标准操作规程（SOP）

1.0 目的

制定用于操作和校准 Biomerieux 试剂盒（mini API、Densimat 和电子移液器）的程序。

2.0 范围

这适用于微生物实验室。

3.0 责任

微生物学人员

4.0 责任制

部门主管

5.0 程序/规程

5.1 迷你型原料药（mini API）仪器的操作：

5.1.1 原则

迷你原料药（mini API）的原理依赖于两种类型的检测数据。
a) 涡轮光度计读数：
涡轮光度法读数用于含有同化测试的试纸条。例如：ID32GN、ID32C。
浊度法：通过测量透射光的强度（T）来评估细菌生长的程度，其中透射光的强度与细菌生长量成反比。
散射光度法：通过测量在30度角散射的光强度（S），该强度与细菌生长量成正比。
b) 测色读数：
含有显色底物的试纸条使用比色法进行读数。例如：ID32 STAPH、RAPID ID32 E、RAPID ID32 A、RAPID ID32 STREP。
Mini API 用于测量每个微杯在可见光谱四个区域内的光透过率。

5.2 清洁

5.2.1 微量原料药仪器的清洁

5.2.1.1 为了清除机器表面的灰尘：
请用柔软、干燥且无绒毛的布轻轻擦拭仪器表面。如果这还不够有效，可以在柔软的布上涂抹专门的塑料外壳清洁剂进行清洁。
5.2.1.2 请使用3.5英寸的磁盘清洁工具来清洁磁盘。
5.2.1.3 为了清洁打印机，请使用软毛刷，并确保清除所有灰尘或污垢。

5.3 原料药的制备与操作

5.3.1 在读取试纸条之前，请按照给定的步骤操作迷你型原料药（mini API）设备。

步骤1：使用仪器背面的开关（ON/OFF）来启动迷你型原料药生产设备。
步骤2：在开始读取试纸条之前，请等待15分钟（预热）。
准备用于读取的试纸条。
请取下条形盖子。
添加进行某些测试所需的试剂。
步骤3：拔出防护导轨。
步骤4：将试纸条放置在试纸条卡车上。
步骤5：读取试纸条上的数据。
迷你API软件开始读取试纸条，试纸条的处理过程是自动完成的。
条形码被读取后，其结果会被解析。根据解析结果，系统会确定该条形码对应的检测类型（是涡轮菲利米特法（Turbinephelometric）还是比色法（Colorimetric））。
当“mini API”启动后，系统会进行内部配置测试。仪器会发出两次提示音，表示“mini API”已成功完成内部测试。
在主菜单出现之前，迷你API软件的展示页面会短暂地显示在屏幕上。
对于涡轮费洛计（Turbinephelometric）的测量过程，试纸条会进入并退出检测设备各一次。
在进行比色读数时，试纸条会进入和退出检测仪器两次。
在阅读周期结束时，试纸架会保持在外部位置。当你退出迷你API软件的结果输入模块后，试纸架会自动回到内部位置。
在迷你API程序手册中，如果遇到“Troubleshooting”相关的问题，请按照手册中的步骤进行处理；如果问题仍然无法解决，请联系技术工程师。
该仪器配备了风扇，因此即使不使用时也可以保持开启状态。

5.4 Densimat的清洁

5.4.1 取干燥样品 棉签 “and dip in filtered”可以翻译为“然后蘸取过滤后的液体/物质”。这个短语通常用于描述在处理或使用某种物质之前，先将其过滤掉杂质，然后再进行下一步操作（例如蘸取或使用过滤后的液体）。 70%（体积比）异丙醇.
5.4.2 用拭子擦拭位于读数区右侧的光敏传感器。
5.4.3 当需要时，应清洁 Densimat 设备。
a) 在读数区内部，安瓿瓶已经破裂了。
b) 结果数值过高。
5.4.4 原理：Densimat 用于测量液体培养基安瓿中的细菌密度。
5.4.5 Densimat 通过两次测量能够精确地确定细菌密度。
a) 散射光（两个光传感器） b) 透射光（一个光传感器）
5.4.6 麦克法兰德比色法（McFarland scale）/ 细菌浓度

5.5 Densimat的操作

5.5.1 当安瓿被插入光学检测装置时，Densimat会自动启动。
5.5.2 如果光密度（OD）值在30秒内没有变化，Densimat设备会自动进入待机模式。
5.5.3 备用模式在显示屏上用“McF”表示。
5.5.4 当安瓿被取出时，Densimat会从待机模式中启动并开始工作。
5.5.5 用干净、无绒的布擦拭安瓿瓶。
5.5.6 旋转安瓿瓶，直到秤上显示最低的稳定读数。

5.6 接种物密度的调整

5.6.1 使用无菌环将所需的分离菌落加入指定的培养基中。
5.6.2 调整细菌悬浮液，使其达到推荐的标准。
5.6.3 将安瓿插入 Densimat 设备的指定位置，并记录密度值（单位：McF）。
5.6.4 如果密度高于标准要求，那么 细菌悬液 应该通过加入一定体积的培养基来稀释。
5.6.5 如果密度低于标准要求，应添加更多的细菌培养物。

5.7 电子移液器的操作

5.7.1 电子移液器的清洁
用浸有过滤后的70%（体积比）异丙醇的无绒布清洁电子移液器的外表面。
5.7.2 控制设备
移液器的控制装置包括：
a) 开/关按钮 b) 键盘 c) 液晶显示器
d) 启动按钮 e) 倾倒杆
5.7.3 键盘
M Key：用于选择要接种的试纸条类型（每个杯孔中的孔数/每个杯孔的体积）。
S ► 关键点：在连续模式下编程接种速度。
▲ （选择“向上”）关键参数：数值显示增加了1。
▼ （向下选择）键：显示的数值减少1。
* 关键：选择分配模式：连续模式（CONTINUOUS）或步进模式（STEP）。
E键：用于在参数选择后进行初始化或确认操作。

5.7.4 使用程序

5.7.5.1 “START”按钮用于启动移液器。
a) 用于接种55微升体积样品的吸液阶段（或）
用于接种的135μl体积的匀浆液。
b) 在选择了 STEP 分配模式的情况下，执行分配操作。
当选择了“连续分配”模式时，分配周期为……
c) 如果选择了“连续分配”模式（CONTINUOUS dispensing mode），则应中断分配过程。
5.7.5.2 停止移液器使用：要停止移液器，将开关置于“关闭”（OFF）位置。

5.8 BIOMERIEUX 试剂盒的性能确认

5.8.1 原料药（Mini API）的性能确认

迷你原料药（mini API）的性能确认应使用以下微生物进行测试。
Rapid ID 32E ═► 用于检测肠杆菌科（沙门氏菌属）细菌。
ID32 STAPH ═► 用于革兰氏阳性菌（金黄色葡萄球菌）
ID32 E ═► 用于肠杆菌科（大肠杆菌/沙门氏菌属）的检测。
ID32 GN ═► 用于革兰氏阴性菌（铜绿假单胞菌）
ID32 C ═► 用于酵母（白色念珠菌）
5.8.2 按照操作规程操作仪器，并根据附录1“Mini API（Biomerieux）的性能确认”记录结果细节。
5.8.3 接受标准：所有已知的微生物都应通过使用相应的检测条进行检测，并能够被识别出来。
5.8.4 频率：每年一次，以及在有任何重大维护活动时。
3种标准微生物：大肠杆菌（E.coli）、沙门氏菌属（Salmonella species）、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）；枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）；白色念珠菌（Candida albicans

5.9 Densimat仪的校准精度

5.9.1 选择一支悬浮培养基的安瓿（至少2.5毫升）。
5.9.2 将其放入 Densimat 中。显示的数值应在 0 到 0.1 McFarland 之间。
5.9.3 使用分光光度计（550 nm）在0.22微米过滤水中制备大肠杆菌悬浮液，调整浊度至光密度为0.125（相当于0.5 McFarland单位）。
5.9.4 将这种悬浮液转移到之前已经清空的安瓿瓶中。
5.9.5 将安瓿放入Densimat仪器中，显示的密度值应为0.5 McF±0.1 McFarland。
5.9.6 将详细信息填写在附件“Densimat [Biomerieux] 校准记录”中。
5.9.7 如果读数超出范围，需清洁光电传感器。
5.9.8 接受标准：McFarland浊度计的读数应在0.5 ± 0.1范围内。
5.9.9 频率：每年一次，以及当测量结果超出规定范围时。

5.10 电子移液器的校准

5.10.1 取之前已经清洗并冲洗过的干燥烧杯。 注射用水 使用新鲜制备并冷却后的注射用水（WFI）进行填充。
5.10.2 将一个干燥的烧杯放在称量盘的上面。 称重天平使用之前已经校准过的设备，称量干燥烧杯的重量（包括烧杯本身的重量）。
5.10.3 用指定的方法修复所需的微尖端。 **微量移液器** 用移液器吸取注射用水，并将其注入放置在称量盘上的烧杯中。
5.10.4 等待屏幕上的数值显示稳定后，按下打印机按钮进行打印。之后需要扣除皮重（即容器本身的重量）。
5.10.5 按照上述程序，在最小设定值（16/55 μl）和最大设定值（32/135 μl）下进行读数，并同时打印出结果。将观察结果记录在“Biomerieux电子移液器校准记录”中。
分配的注射用水（WFI）的体积（ml） = 分配的WFI的重量
                                      25°C时水的密度
5.10.6 计算误差百分比和相对标准偏差。
5.10.7 接受标准：相对标准偏差不应超过2%，对于135μl的样品，%误差不应超过0.98；对于55μl的样品，%误差不应超过1.46。
5.10.8 校准频率：每年一次，以及在任何进行重大维护活动时。

5.11 不同分析人员之间的差异性识别

5.11.1 编码样品：需向分析人员提供2种标准微生物（细菌、念珠菌）以及1种环境分离株，用于…… **识别；鉴定** 由负责微生物检测的部门处理。（该微生物的名称需保密，仅由分析人员知晓）
5.11.2 按照标准操作规程（SOP）进行操作和分析。
5.11.3 接受标准：已鉴定标准菌株的鉴定率（% ID）应不低于90%。已鉴定微生物“标准菌株”的鉴定率也应达到…… 环境分离株“不同分析人员之间的结果差异不得超过20%。”
5.11.4 校准频率：对于每位新分析师来说，

5.12 系统检查

5.12.1 该鉴定试剂盒适用于…… 革兰氏阴性菌 应分别用革兰氏阳性细菌（已知菌株/标准菌株）进行接种，反之亦然。随后需对接种后的菌株进行鉴定。
5.12.2 必须对2种标准微生物（革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌）进行鉴定。
5.12.3 校准频率：每年一次，以及在任何进行重大维护活动时。

5.13 注意：

5.13.1 不得使用腐蚀性产品来清洁微型原料药（mini API）的表面和筛网，因为这些产品可能会损坏相关部件。
5.13.2 不要用酒精或溶剂清洁打印机，因为它们可能会损坏部件。
5.13.3 禁止水流入打印机构或电子部件上。
5.13.4 不得使用硬毛刷或具有研磨性的材料。
5.13.5 不要在打印机内部喷洒润滑剂。
5.13.6 不得使用压缩空气来清洁打印机内部。
**注意：在性能确认过程中，除了进行实验室培养外，还应当采集分离株样本。**

6.0 缩写

6.1 标准操作规程（Standard Operating Procedure）
6.2 WFI - 注射用水
6.3% - 百分之六点三
6.4 °C - 摄氏度
6.5 -ve - 表示“负的”或“否定的”
6.6 +ve - 阳性