无水乳糖的分析方法

描述；说明

白色或接近白色的粉末。

2. 溶解度

**中文翻译：** **“水溶性良好，几乎不溶于酒精”** **解释：** “Freely soluble in water”表示该物质在水中能够完全溶解；“Practically insoluble in alcohol”则意味着该物质在酒精中的溶解度极低，几乎无法溶解。这种描述常用于化学物质或药品的性质说明，用于区分物质在不同溶剂中的溶解行为。

3. 识别；鉴定

A. 样品的红外吸收光谱与无水乳糖的参考光谱一致，或者与从无水乳糖原料药（WRS）获得的光谱一致。

B. 通过薄层色谱法

固定相：硅胶G
稀释剂：配制甲醇与水的混合物（比例为3:2）。
流动相：配制一种由二氯乙烯、冰醋酸、甲醇和水（50:25:15:10）组成的溶液。
标准溶液A：用已知浓度为0.5毫克/毫升的稀释剂配制USP无水乳糖RS溶液。
标准溶液B：按照每毫升0.5毫克的浓度，使用已知浓度的稀释剂配制含有USP葡萄糖RS、USP乳糖无水RS、USP果糖RS和USP蔗糖RS的溶液，用于每种参比标准品。
测试溶液：将约25毫克的无水乳糖转移到一个50毫升的容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度线，然后混合均匀。
喷雾溶液：将0.5克百里酚溶解在95毫升酒精和5毫升硫酸的混合液中。
**操作步骤：** 分别将2 µL的标准溶液A、标准溶液B和测试溶液滴加到色谱板上。待斑点干燥后，将色谱板放入预先用展开溶剂平衡好的纸衬里色谱室中，放置约1小时进行展开。继续展开直至溶剂前沿移动至色谱板长度的四分之三处。将色谱板从色谱室中取出，用暖风吹干，然后再次用新鲜的展开溶剂进行展开。再次取出色谱板，标记溶剂前沿的位置，并用暖风吹干。接着用喷液溶液对色谱板进行喷雾处理。最后将色谱板在130°C下加热10分钟：如果测试溶液产生的主斑点在外观和Rf值上与标准溶液A产生的斑点一致，则测试有效。但如果使用标准溶液B得到的色谱图上只有四个清晰可见的斑点（忽略原点处的任何斑点），则测试无效。

C. 颜色测试

需要试剂。
氢氧化铵
**操作步骤：** 将250毫克（mg）的原料药溶解在5毫升（ml）水中，然后加入3毫升（ml）氢氧化铵（ammonium hydroxide），并在80°C（摄氏度）的水浴中加热10分钟。如果出现红色，则说明反应成功。

4. 溶液的澄清度和颜色

限制：吸光度除以路径长度（以厘米为单位）的结果不得超过0.04。
**步骤：** 取1克样品，将其溶解在10毫升沸水中。然后测量该溶液在400纳米波长下的吸光度。

5. 酸度或碱度

要求：使用的0.1M氢氧化钠溶液的体积不得超过0.4毫升。
需要试剂。
酚酞溶液
0.1M氢氧化钠
**操作步骤：** 将6.0克样品溶解在锥形瓶中，加入25毫升水并煮沸。冷却后，加入0.3毫升酚酞溶液；如果溶液仍无色，则需要加入不超过0.4毫升的0.1摩尔/升氢氧化钠溶液才能使溶液变为粉红色。

6. 特异旋光度

限制：在 +54.4° 至 +55.9° 之间，基于无水物质的计算结果。
**操作步骤：** 1. 在100毫升容量瓶中准确称取约10克样品。 2. 将样品加入80毫升水中，加热至50°C后溶解，然后冷却。 3. 加入0.2毫升6M氨水，静置30分钟，再用蒸馏水稀释至100毫升。 4. 将溶液温度调整至25°C后，将其倒入偏振光度计试管中。 5. 读取溶液的偏振度值五次。 6. 清洁偏振光度计试管，然后重新加入99.8毫升水和0.2毫升6M氨水的混合液，再次在25°C下读取偏振度值五次。
计算；核算
旋转校正值 = 平均观测值 - 平均空白值 “Where...”
µ = 校正后的观测旋转值
D = D线钠光
L = 极谱管长度（单位：分米）
C = 物质的浓度（以百分比表示）

蛋白质及吸光杂质

限制：在约400纳米处的吸光度最大为0.04；在210纳米至220纳米范围内的吸光度不得超过0.25；在270纳米至300纳米范围内的吸光度不得超过0.07。
**步骤：** 使用1厘米的比色皿，在400纳米波长下测量溶液A的吸光度，以水作为空白对照。吸光度不得超过0.04。将1毫升溶液A用水稀释至10毫升，然后在210纳米至300纳米的波长范围内再次测量吸光度。在210纳米至220纳米的范围内，吸光度不得超过0.25；在270纳米至300纳米的范围内，吸光度不得超过0.07。

重金属

限制：不超过5 ppm
需要试剂。
稀释氨水
稀释醋酸
硫化氢溶液
醋酸盐缓冲液，pH值为3.5
标准溶液（铅含量20 ppm）
0.1M盐酸
标准溶液的配制方法：在Nessler比色管中吸取1毫升铅标准溶液（含铅20 ppm），用水稀释至25毫升。使用稀醋酸或稀氨水调节pH值至3.0至4.0之间，再用水稀释至35毫升。
样品溶液：称取4.0克样品，转移至Nessler比色管中，加入20毫升温水和1毫升0.1M盐酸，再加入适量水至总体积为25毫升。使用稀醋酸或稀氨水调节pH值至3.0至4.0之间。最后用水稀释至35毫升。
**操作步骤：** 向每个内塞尔（Nessler）比色管中加入10毫升 freshly prepared hydrogen sulfide solution（新鲜制备的硫化氢溶液），混合后用水稀释至50毫升。静置5分钟后，从上方向下观察溶液在白色背景下的颜色。测试溶液产生的颜色不得超过标准溶液产生的颜色深度。

9. 燃烧残渣

限制：不得超过0.1%
**操作步骤：** 1. 将硅 crucible（硅坩埚）加热至发红状态，持续10分钟；然后置于干燥器中冷却后称重。 2. 取约1克已精确称量的待检测物质放入硅坩埚中，先用硫酸湿润该物质，随后轻轻点燃；再次用硫酸湿润后，在约800℃的温度下点燃。 3. 等待冷却后重新称重，接着再次点燃并持续燃烧15分钟。 4. 重复此过程，直到连续两次称量的结果相差不超过0.5毫克为止。
计算；核算 
                                   W3 – W1
% 硫酸盐灰分 = --------------- × 100
                                   W2 – W1
其中：W1 = 空铂坩埚的重量。
W2 = 坩埚重量 + 样品重量。
W3 = 坩埚重量 + 灰分重量。（燃烧后所得）

10. 含水量

限制：不得超过1.0%
需要试剂。
无水甲醇（AR级）
KF试剂：无吡啶的单组分溶液
**操作步骤：** 在滴定容器中取约40毫升无水甲醇，用KF试剂进行中和，然后分别测定三次KF试剂的浓度（单位为mg H2O/5毫升），并记录平均值。
将大约500毫克的样品准确加入滴定容器中。使用KF试剂进行滴定，直至达到电位滴定的终点。记录卡尔·费休滴定仪测得的水分含量百分比。重复三次实验以测定样品的水分含量，并取平均值。
11. 干燥失重
限制：不得超过0.5%
**操作步骤：** 1. 在一个干净且已干燥的、预先称量的 LOD 瓶中称取 1.000 克待测物质。 2. 盖上瓶塞，轻轻摇晃使物质均匀分布，高度不超过 10 毫米。 3. 将 LOD 瓶放入烤箱中，随后取下瓶盖并继续将其留在烤箱内。 4. 在 80°C 下干燥样品 2 小时。 5. 打开烤箱后，立即关闭 LOD 瓶，将其转移到干燥器中，并使其恢复到室温。 6. 重新称重，直至重量稳定。
计算；核算
                                    W2 – W1
**干燥损失百分比 = --------------- × 100**
                                    W2 – W3
“Where:”
W1 = 空的、清洁且干燥的 LOD 瓶的重量。
W2 = LOD瓶的重量 + 样品的重量。
W3 = LOD瓶的重量加上样品的重量（干燥后）。

12. 微生物限度

限制；限度；界限 

总微生物计数：不超过100个/克
大肠杆菌和沙门氏菌：未检出
程序：按照原料药微生物限度检测的标准操作规程（SOP）进行操作。