**定量方法检测内毒素**

这些方法利用对数响应值与对数内毒素浓度之间的线性回归关系来进行分析。为了确定浊度法和显色法的精确度或有效性，会进行预备性测试，以确保标准曲线的适用性，并确认测试溶液不会干扰（抑制或增强）反应过程。

动态浊度法是一种光度测定方法，用于测量内毒素与裂解液反应所产生的浊度增加。该方法可以测定反应混合物达到预定吸光度所需的时间（起始时间），或者测定浊度变化的速率。

动力学显色法是一种光度测定方法，用于测量内毒素与裂解产物反应后，从显色底物中释放出的发色团所产生的颜色变化。该方法可以测定反应混合物达到预定吸光度所需的时间（起始时间），或者测量颜色变化的速率。

终点显色法是一种光度测定方法，用于测量由内毒素与裂解产物反应后释放出的显色基团所产生的颜色。该方法是在反应停止后，通过加入适当的酸来终止孵育过程，然后测量孵育结束时的颜色强度。

标准曲线的制备

使用CSE（细胞溶解试剂）制备至少三种不同内毒素浓度的溶液，以获得一条线性标准曲线。按照裂解产物制造商的说明（体积比、孵育时间、温度、pH值等），对每种标准内毒素溶液至少进行两次重复实验来执行该程序。

回归线必须具有线性，其相关系数 r 在内毒素浓度范围内不得超过 -0.980。

检测干扰因素

为了验证测试结果，必须证明测试样品的制备过程不会抑制或增强测试效果，也不会以其他方式干扰测试的进行。如果裂解液供应商、样品的制造方法或配方发生变化，必须重新进行验证。初始稀释液的制备可以使用以下公式进行：

初始稀释倍数 = 测试溶液中的细菌内毒素限度
                                                     C
C 是标准曲线中最低的 CSE 浓度，单位为 EU/ml。
**测试溶液的制备：** 按照以下要求制备溶液A至D。
溶液A = 在初始稀释状态下被检测产品的溶液（即测试溶液）。
溶液B = 在测试溶液中加入CSE（杂质），其浓度位于标准曲线的中点或接近中点（即PPC，Point of Performance Concentration）。
溶液C = 用BET法配制的水中CSE标准溶液，用于覆盖标准曲线的线性部分。
溶液 D = 水的比表面积（BET，非晶态）。
溶液的pH值必须符合裂解物制造商规定的范围，通常在6.0到8.0之间。如有必要，可以通过添加无菌的0.1 M盐酸、0.1 M氢氧化钠或其他合适的试剂来调整pH值。 缓冲区；缓冲剂 用纯水（BET）配制。
相关： 细菌内毒素检测（BET或LAL检测）验证

方法；方式；工序

在微孔板的孔等重复容器中进行测试。向每个选定的容器中加入适量的溶液D（NC）、标准CSE水溶液（溶液C）、测试溶液（溶液A）和溶液B（PPC）。然后加入裂解液，并按照裂解液制造商提供的说明进行检测。

结果的计算与解读

根据使用系列C的溶液得到的回归方程，计算溶液A和B的内毒素浓度。通过从溶液B的内毒素浓度中减去溶液A的内毒素浓度，计算添加的内毒素的平均回收率（百分比）。

干扰因素的检测结果仅在以下条件下有效：
(a) 负对照（溶液D）的检测结果不应高于所使用裂解物描述中规定的限值。
(b) 系列C中的CSE溶液符合标准曲线制备的相关要求。
(c) 溶液B中添加的内毒素的平均回收率在50%到150%之间。
如果平均回收率超出规定的范围，必须按照相关程序消除干扰因素。 凝胶凝固法.
另请参阅：
方法A：动力学浊度法
方法B：动力学显色法
方法C：终点显色法