1.0 目标
提供一种用于制备、灭菌、储存以及检测微生物培养基生长情况的测试方法。2.0 范围
该程序适用于用于微生物检测的固体和液体培养基的制备。3.0 责任
职位：技术助理检查员：执行人员/经理
4.0 责任制
部门负责人5.0 程序/步骤
5.1 对于液体培养基的制备：
5.1.1 根据脱水培养基瓶子或培养基制备表上的说明，称取所需量的培养基粉末，以制备特定体积的培养基。5.1.2 如果没有现成的脱水培养基，应按照药典要求自行配制培养基。
5.1.3 通过加热并持续搅拌来溶解培养基。当需要溶解大量培养基时，应继续搅拌并加入剩余的水分以补足体积，然后充分混合均匀。
5.1.4 如有必要，使用0.1N盐酸或0.1N氢氧化钠调节pH值。
5.1.5 根据标准操作规程（SOP），将批号分配给已制备的培养基。
5.1.6 经过灭菌处理后，检查一个容器的pH值，如果pH值超出规定范围，则将其丢弃。pH值必须保持在允许的范围内。
5.1.7 将指定体积的培养基分配到适当的玻璃容器中，以便后续使用。
5.1.8 用棉塞或金属盖将其封闭。
5.1.9 在每个试管上贴上标签，并标注所使用的培养基详细信息。
5.1.10 如果使用棉塞，需要用包装纸将其包裹起来。
5.1.11 除非另有规定，否则应按照标准操作规程（SOP）将培养基在121°C下灭菌20分钟。
5.1.12 在灭菌后，将培养基在室温下冷却，然后进行预培养和促生长测试。
5.2 对于固体培养基的制备：
5.2.1 按照指示，在一个容量为所需培养基最终体积两倍的烧杯中，称取指定量的培养基粉末。5.2.2 加入适量的蒸馏水，并充分搅拌均匀。
5.2.3 根据标准操作规程（SOP），将批号分配给相应的培养基或培养基容器。
5.2.4 在持续搅拌的情况下加热并溶解培养基成分，以防止烧焦。
5.2.5 检查培养基的pH值，如有需要，使用0.1N HCl或0.1N NaOH进行调整至所需pH值。
5.2.6 在熔融状态下，将指定体积的培养基分配到相应的玻璃容器中。
5.2.7 用棉塞封住玻璃容器的口部。
5.2.9 用包装纸覆盖棉塞。
5.2.10 除非另有规定，否则应按照标准操作规程（SOP）将培养基在121°C下灭菌20分钟。
5.2.11 在灭菌完成后，固体培养基将根据具体要求以不同的形式使用。
[A] 对于斜面制备：
将熔化的介质管倾斜放置，让其固化。[B] 对于刺穿试验（stab preparation）：
将介质管保持直立状态，让其固化。[C] 用于制备平板：
为了准备培养皿，需要在层流洁净环境中（LAF）将培养基倒入无菌的培养皿中，然后让其固化。5.2.12 用于其他用途的固体培养基应在温度为45°C至50°C的烤箱或水浴中保存，直至使用，以确保其保持熔融状态。
5.2.13 无菌固体培养基平板应储存在20°-25°C的温度下，而无菌斜面培养基和穿刺培养基应储存在冷冻温度下。
5.3 培养基的预培养：
5.3.1 所有的无菌固体和液体培养基都应在30°-35°C的温度下保存48小时，以进行预培养。5.3.2 如果在48小时后培养基出现生长迹象（对于液体培养基，溶液会变得浑浊；对于固体培养基，可能会出现菌落），则根据标准操作规程（SOP）丢弃受污染的培养基。
5.3.3 将批号分配给每个培养基容器，并在20-25°C的步入式培养箱中进行转移培养。
5.4 生长促进试验：
5.4.1 检查培养基的促生长性能，方法有两种：一种是将 <100 个细胞/毫升的对照菌株接种到液体培养基中；另一种是将已知能产生阳性反应的对照菌株划线接种到固体培养基平板的表面。如果培养基存在无菌问题，需通过分别对每个测试容器进行重复接种来检测其促生长能力。5.4.2 在检测总活菌计数时，应同时使用阳性对照菌株，这些对照菌株包括指示性微生物：SCD琼脂上的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、SD琼脂上的白色念珠菌（Candida albicans）以及Endo琼脂上的大肠杆菌（Escherichia coli）。
5.4.3 如果在液体培养基中观察到细菌的浑浊现象在48小时内出现，或者在固体琼脂上观察到真菌生长在24-48小时内（在特定的培养条件下），则认为该培养基是合格的。
5.4.4 在促进生长测试结束后，将所有预培养的无菌液体培养基试管和固体培养基平板转移到20°-25°C的环境中继续使用。
5.4.5 将所有斜面和穿刺物储存在冷冻温度下。
5.5 存储：
5.5.1 介质如果存放时间超过三周，不得用于无菌生产过程。5.5.2 除无菌检查外的培养基应在20°-25°C的温度下保存，并在一个月内使用完毕。
5.5.3 在冷冻温度下储存的斜面和刺针应在两个月内使用完毕。
5.5.4 保持介质制备记录的完整性。
6.0 缩写词
6.1 °C = 摄氏度6.2 ml = 毫升